Жизнеспособность ядросодержащих клеток в размороженных лейкоконцентратах

Введение. Эффективность восстановления гемопоэза после аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) при онкогематологических заболеваниях зависит от количественных и качественных характеристик трансплантационного материала. Важнейшим показателем служит оценка жизнеспособности ядросодержащих клеток (ЯСК) в лейко-концентрате (ЛК), особенно после проведения манипуляций с трансплантатом (криоконсервирования, оттаивания и др.). Известно, что применяемый для криоконсервирования клеток диметилсульфоксид (ДМСО) обладает токсическим действием в отношении разных органов и систем пациента, поэтому разрабатываются методы профилактики реакций и осложнений, связанных с его использованием. Одним из возможных подходов является отмывание ГСК-содержащих ЛК от ДМСО, выполняемое сразу после размораживания.

Цель . Оценить жизнеспособность ЯСК в размороженных ГСК-содержащих ЛК.

Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы ГСК-содержащих ЛК (n = 82), полученные от 35 пациентов с онкогематологическими заболеваниями, которые проходили лечение в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России с 2018 по 2021 гг. ЛК криоконсервировали следующим образом: их предварительно смешивали с раствором ДМСО и раствором по-лиглюкина до достижения конечной концентрации ДМСО 5 %,

ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ», ПОСВЯЩЕННАЯ 90-ЛЕТИЮ РОССИЙСКОГО НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ИНСТИТУТА ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ

Санкт-Петербург

30 июня – 1 июля 2022 г.

замораживали в парах жидкого азота и хранили при температуре минус 196 oС до трансплантации. ЛК размораживали непосредственно перед трансплантацией. Сразу после размораживания ЛК отмывали от ДМСО смесью альбумина и полиглюкина, центрифугируя (2000g) в течение 5 мин., затем вводили внутривенно пациенту. К оценке жизнеспособности ЯСК в образцах ЛК приступали сразу после окончания технологических этапов: перед замораживанием (смесь нативных ЛК с ДМСО), после декриоконсервирования (образцы неотмытых ЛК) и отмывания (образцы отмытых ЛК). Методом проточной цитометрии определяли процент клеток, негативных по содержанию ДНК-тропного красителя 7-актиноминомицина D (жизнеспособных) среди ЯСК и в популяции, отвечающей за восстановление гемопоэза, ГСК. Результаты представлены в виде медианы и интерквартильного интервала (Mе [I квартиль; III квартиль]). Статистическую значимость различий оценивали с помощью критерия сдвига (положения) Вилкоксона, при этом использовали программу STADIA (Россия),

Результаты. Жизнеспособность ЯСК в ЛК больных после смешивания с ДМСО перед замораживанием составила 96,1 [94,0; 98,8] %, популяции ГСК - 96,2 [94,8; 98,5] %; после размораживания ЛК наблюдалось существенное снижение числа 7-AAD-негативных ЯСК (80,6 [76,0; 89,4] %, p = 0,002) и ГСК (86,7 [67,6; 92,9] %), p = 0,005). После отмывания ЛК от DMCO число жизнеспособных ЯСК и популяции ГСК также было меньше, чем в ЛК после смешивания с DMCO и до замораживания: 92,2 [85,2; 96,4] % (p = 0,008) и 94,4 [94,5; 95,2] % (p = 0,045) соответственно. Показано, что процедура отмывания не оказала негативного влияния на жизнеспособность ЯСК и популяции ГСК. После трансфузии отмытых клеточных продуктов отсутствовали гистаминоподобные реакции, обусловленные токсичностью ДМСО (кожные, сердечно-сосудистые, неврологические, желудочно-кишечные.

Выводы. Жизнеспособность ЯСК существенно уменьшается в размороженных ЛК по сравнению с таковой в нативных ЛК. Отмывание от ДМСО ГСК-содержащих ЛК, позволяющее нивелировать токсическое влияние криоконсерванта на организм больного, не снижает качества трансплантационного материала.