Злокачественная мезотелиома плевры: возможности использования иммуноцитохимических методик

В последнее десятилетие зафиксировано увеличение заболеваемости первичными опухолями серозных оболочек в Западной Европе, США, Австралии [1]. Подобная тенденция отмечается и в нашей стране, где уровень заболеваемости мезотелиомой плевры (МП) составляет 0,1–0,2 на 100 тыс. населения [6]. В настоящий момент наиболее изученным этиологическим фактором являются некоторых виды асбестовых волокон, считается, что они имеют тропность к серозным оболочкам. Из желудочно-кишечного тракта и бронхов частички асбеста мигрируют в плевру и брюшину, где могут накапливаться в значительных количествах и служить пусковым механизмом для развития опухоли. Латентный период злокачественной мезотелиомы колеблется от 15 до 60 лет. Однако даже при полном исключении воздействия асбеста рост заболеваемости мезотелиомой в ближайшие годы будет продолжаться. Известно, что около половины больных мезотелиомой не имели в анамнезе контакта с асбестом, предполагается, что рост заболеваемости МП в ближайшие годы будет продолжаться [11]. Другие возможные причины возникновения рассматриваемой опухоли – загрязнение атмосферы взвешенными веществами, радиация, хроническое воспаление, вирусные инфекции.

Лечение является достаточно трудной проблемой, так как хирургические и лучевые методы лечения применяются при локализованной форме МП лишь у 7–10 % больных [2]. Хирургическое вмешательство при мезотелиоме часто носит диагностический и лишь в отдельных случаях – радикальный характер. После плевропневмонэктомий операционная смертность достигает 14–15 % [2]. Показатели продолжительности жизни практически не зависят от метода лечения, после операции медиана выживаемости составляет 12,4 мес, после химиотерапии – 7,5 мес, после операции и химиотерапии – 12 мес [9]. Морфологическая диагностика мезотелиомы часто затруднительна, нередко приходится использовать дополнительные методы диагностики [5,7]. Одним из таких направлений является использование цитологических методов с применением иммуноцитохимии или электронной микроскопии.

Целью данной работы было изучение возможностей цитологической диагностики с использованием иммуноцитохимических методик при исследовании экссудатов из плевральных полостей.

Материал и методы

Работа основана на изучении результатов обследования 90 больных мезотелиомой в клинико-диагностической (цитологической) лаборатории ГУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер» за 5 лет. Доставленную в лабораторию плевральную жидкость центрифугировали по стандартным методикам, окрашивали по методу Паппенгейма, изучали на световом микроскопе.

При проведении иммуноцитохимических реакций препараты готовили с использованием цитоцентрифуги Cytospin–4. Иммуноцитохимические исследования проводили по стандартной методике. Для визуализации реакции анти-ген/антитело использовали стрептавидин-био-тиновую тест-систему LSAB2 и EnVision+. В качестве хромогена применяли DAB (3,3-диаминобензидин). Для верификации новообразования из серозных полостей использован набор маркеров, состоящий из 11 антител: цитокера-тины-пан (C MNF 116, C AE1/AE3), виментин (Vimentin), моно- и поликлональный раково-эмбриональные антигены (CEA), эпителиальный антиген (Ber-EP4), мезотелин (Mesothelial Cell HBME-1), эпителиальный мембранный антиген (ЕМА), калретинин (Calretinin), тромбомодулин (Thrombomodulin) и лейкоцитарный антиген CD-15 [3, 4, 8, 10]. Полученные данные сопостав- лены с последующим клиническим течением заболевания с учетом данных канцер-регистра и гистологическим изучением операционного материала первичной опухоли.

Результаты и обсуждение

Злокачественная мезотелиома диагностирована у 48 (53,3 %) женщин и 42 (46,7 %) мужчин. Преобладали пациенты старше 50 лет (86,7 %). В лабораторию поступала на исследование геморрагическая жидкость – 46 случаев (51,2 %), серозная – 40 (44,4 %) и студенистая – 4 наблюдения (4,4 %) в количестве от 8 до 1000 мл.

В 82 наблюдениях (91,1 %) определена эпителиальная мезотелиома, в 35 случаях – высокодифференцированная, в 39 – умереннодифференцированная и в 8 – низкодифференцированная. Саркомоподобная мезотелиома диагностирована в 2 (2,2 %) случаях, смешанная – в 6 (6,7 %). Саркомоподобная и двухфазная мезотелиомы наблюдались в нашем исследовании реже, вероятно, в результате менее выраженного слущивания клеток в плевральную полость [7]. По литературным данным, эти показатели составляют от 15 до 30 % всех наблюдений мезотелиом [11]. Саркомоподобная мезотелиома диагностирована у молодых людей (11 и 27 лет). Саркомоподобная мезотелиома характеризуется веретенообразными клетками с удлиненными ядрами и малозаметными ядрышками. Оба наблюдения веретеноклеточной мезотелиомы напоминали фибросаркому. Из иммуногистохимических исследований наиболее важными оказались исследования на кератины широкого спектра (C MNF 116, C AE1/AE3) для проведения дифференциального диагноза с веретеноклеточной опухолью мезенхимального происхождения.

Двухфазная мезотелиома состоит из сочетания эпителиальных и саркоматоидных клеток. Каждый компонент представлен минимум в 10 % клеток опухоли, что оправдывает бифазность [11]. Дифференциальный диагноз такой мезотелиомы необходимо проводить с первичной саркомой плевры, в которой опухоль характеризуется локализованной формой без диффузного вовлечения плевры.

Для цитологической диагностики эпителиальной мезотелиомы использовали набор онкомаркеров, которые позволили идентифицировать в экссудатах опухолевые клетки мезотелиомы и аденокарциномы. Иммуноцитохимические исследования применяли в диагностике 65 мезотелиом (72,2 %). Во всех 65 наблюдениях клетки мезотелиомы (100 %) экспрессировали кератины (C MNF 116, C AE1/AE3), также во всех наблюдениях отмечена положительная цитоплазматическая реакция на виментин. При проведении реакции на моно- и поликлональный раково-эмбриональные антигены (CEA) опухолевые клетки были иммунонегативны. В двух случаях (3,1 %) отмечена реактивность опухолевых клеток на поликлональный раково-эмбриональный антиген. Негативная реакция клеток мезотелиомы на эпителиальный антиген (Ber-EP4) отмечена в 100 % наблюдений (таблица).

Мезотелин (Mesothelial Cell HBME-1) отмечали во всех 65 наблюдениях мезотелиомы (100 %). Калретинин и тромбомодулин изучен в 12

наблюдениях (18,5 %). Реактивность к калре-тинину и тромбомодулину для мезотелиомы имеет важное значение в дифференциальном диагнозе. Калретинин выявляли в клетках мезотелиомы, где наблюдали ядерно-цитоплаз-матическое окрашивание. Он отсутствовал в клетках опухоли, характерных для рака (4 случая), за исключением серозных папиллярных аденокарцином яичника (2 случая). Реакция на тромбомодулин также была положительной в 12 исследованных МП и отсутствовала при метастазах железистого рака в 4 наблюдениях. Реакция клеток мезотелиомы на лейкоцитарный антиген CD-15 во всех наблюдениях была негативной (таблица). Иммуноцитохимическое изучение эпителиального мембранного антигена (ЕМА) при мезотелиоме проведено в 8 случаях (12,3 %). Иммунореактивность во всех наблюдениях отмечена на клеточных мембранах. Для аденокарциномы характерно цитоплазматическое окрашивание эпителиального мембранного антигена.

Таблица

Результаты иммуноцитохимического исследования мезотелиомы и метастатической аденокарциномы плевры

Дифференциальная диагностика мезотелиомы и аденогенного рака была проведена у 30 больных, в результате проведенного морфологического анализа в 18 случаях установлен диагноз – мезотелиома, в 8 – диагностирован аденогенный рак легкого, в 2 – рак яичника, в 2 – рак молочной железы. Провести цито-гистологические параллели в диагностике мезотелиом удалось у 36 больных (40,0 %), иммуноцито- и иммуногистохимические – у 19 (21,1 %). Все исследуемые мезотелиомы в гистологическом материале были цитокератин-виментин положительные в 60–100 % опухолевых клеток. Кроме иммуноцитохимических маркеров, в иммуногистохимических исследованиях также изучен маркер пролиферации Ki-67, который обнаружен во всех наблюдениях, с частотой от 8,75 до 83,7 %. Исследование супрессорного гена р-53 отмечено в 0,58–33,8 % клеток. Реакция с антителами Her-2/neu во всех мезотелиомах была отрицательная.

Таким образом, цитологическая диагностика мезотелиомы плевры возможна, хотя она и сопряжена с большими трудностями. Клетки, полученные для цитологического исследования в экссудативных жидкостях, по существу имеют те же самые характеристики, что и биопсийный материал. Для правильной интерпретации полученных результатов цитологу (врачу-лаборанту) необходимо располагать данными анамнеза, рентгенологической информации и достаточным количеством клеточного материала. При использовании иммуноцитохимических методик при саркоматоидной мезотелиоме исследования могут быть ограничены пан-цитокера- тинами широкого спектра. При эпителиальной мезотелиоме наиболее значимы реакции на калретинин, мезотелин и тромбомодулин при положительной реакции на виментин и кератины. Иммунонегативная реакция характерна на CEA, Ber-EP4 и CD-15.