Серодиагностика вирусов, иммунология. Рубрика в журнале - Сельскохозяйственная биология
Статья научная
В России среди протективных и превентивных мер против ящура доминирует вакцинопрофилактика. Однако не исключено развитие субклинической инфекции у иммунных животных, которые становятся вирусоносителями и составляют потенциальную угрозу для восприимчивого поголовья. Поэтому разработка и внедрение в практику тестов для выявления животных-ви-русоносителей сохраняют актуальность. Секреторные иммуноглобулины А (sIgA) обеспечивают первую линию защиты против многих возбудителей инфекций, способны ингибировать внутриклеточную репликацию вируса, служат медиатором нейтрализации вирусов. По сообщениям зарубежных авторов, существует возможность идентификации животных-вирусоносителей с помощью экспресс-теста на основе иммуноферментного анализа, выявляющего секреторные IgA (sIgA-ИФА). Ранее нами были определены оптимальные условия sIgA-ИФА для выявления вирусоспецифических sIgA в образцах слюны в одном разведении. В настоящей работе представлены результаты апробации и испытаний тест-системы sIgA-ИФА («сэндвич»-вариант) в сравнении с другими лабораторными методами. Приведены данные исследования биологических образцов от крупного рогатого скота (96 гол., живая масса 200-300 кг, возраст 18-24 мес) из благополучных по ящуру сельскохозяйственных предприятий (Владимирская обл.) до и после вакцинации, иммунизированных различными сериями противоящурной вакцины и подвергнутых экспериментальному заражению. Образцы слюны, сыворотки крови и пищеводно-глоточной жидкости (ПГЖ), полученные с интервалом через 3-4 сут и до 94-х сут после заражения, исследовали с использованием sIgA-ИФА, НБ-ИФА (определение антител к неструктурным белкам вируса), реакции микронейтрализации вируса (РМН) и ПЦР-РВ-анализа. Кроме того, оценили относительную чувствительность, специфичность и точность теста по формулам, рекомендованным International Epizootic Bureau (IEB - Mеждународное эпизоотическое бюро, МЭБ) и сравнили с итогами референтного теста, выполненного Satya Parida (World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - WRLFMD, Pirbright Institute, Great Britain) по валидированной методике. Из пяти предварительно иммунизированных и затем инфицированных животных без клинических проявлений патологии у одного (¹ 8895) наличие sIgA с помощью sIgA-ИФА выявили в образце слюны на 18-е сут после заражения при ПП (процент позитивности) = 53,00±0,05 % и в последующие сроки (с 21-х до 94-х сут) - при значениях ПП от 41,00±0,11 до 115,00±0,41 %. Полученные данные были подтверждены в РМН (титр sIgA на 18-е сут - 1,20±0,05 lg, в период с 21-х по 46-е сут - до 1,58±0,08-1,90±0,13 lg). При этом в РМН отмечали существенные колебания значений, что нежелательно для идентификационного теста. В НБ-ИФА результаты обнаружения антител к неструктурным белкам ВЯ с 18-х по 94-е сут были положительными. В ПЦР РНК ВЯ выявляли в пробах ПГЖ с 28-х по 60-е сут после экспериментального заражения, но sIgA-ИФА давал более однозначные результаты, чем ПЦР. Для другого животного (¹ 8898) также подтверждена скрытая форма инфекции. Таким образом, показано, что предложенная тест-сис-тема на основе непрямого «сэндвич»-варианта ИФА для определения sIgА к вирусу ящура в образцах слюны крупного рогатого скота по диагностическим характеристикам позволяет идентифицировать животных-вирусоносителей. По результатам исследования 91 образца слюны чувствительность разработанной тест-системы относительно референтной (WRLFMD) составила 100 %, относительная специфичность - 97,7 %, точность - 99,0 %. На основании параметров k-ста-тистики (k = 0,99) подтверждена высокая сходимость результатов для двух тест-систем.
Бесплатно
Статья научная
Инфекционная анемия лошадей (ИНАН) - вирусная болезнь однокопытных, вызываемая РНК-содержащим вирусом из рода Lentivirus семейства Retroviridae. Она сопровождается поражением органов кроветворения и проявляется рецидивирующей или постоянной лихорадкой, анемией и нарушением функций сердечно-сосудистой системы. Своевременная диагностика ИНАН - единственный надежный способ контроля заболевания. Для этой цели предложены различные серологические и молекулярно-генетические методы. Серологические методы исследования при ИНАН имеют определенные недостатки. С их помощью невозможно выявить больных животных до начала сероконверсии, кроме того, зарегистрированы случаи иммунодефицитного состояния лошадей, при котором вирусспецифические антитела образуются в количестве, недостаточном для их обнаружения. В настоящей работе представлены данные по сравнительной оценке различных серологических и молекулярно-генетических методов диагностики инфекционной анемии лошадей при экспериментальном воспроизведении инфекции у восприимчивого животного. Использовали соответственно реакцию диффузионной преципитации (РДП), иммуноферментный анализ (ИФА) и способы обнаружения фрагментов генома вируса ИНАН с помощью гнездовой ПЦР с этапом обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) и электрофоретической детекцией, а также ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Разработанные тест-системы для ПЦР-диагностики основаны на амплификации фрагментов gag -гена вируса ИНАН с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. При исследовании проб крови, взятой на 2-е сут после экспериментального заражения, получен положительный ответ в гнездовой ОТ-ПЦР с электорофоретической детекцией и в ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Далее геном вируса ИНАН выявлялся методом ОТ-ПЦР до конца срока наблюдения, составлявшего 35 сут. Специфические антитела в сыворотке крови обнаруживали методом РДП, начиная с 30-х, ИФА - с 21-х сут после инфицирования. Таким образом, ПЦР можно эффективно применять в качестве специфичного экспресс-метода для выявления генома вируса ИНАН в период до начала сероконверсии с последующей верификацией другими лабораторно-диагностическими методами. Для предлагаемых отечественных тест-систем и рекомендованных методик исследования подтверждены преимущества использования ПЦР-диагностики на ранних сроках заболевания ИНАН.
Бесплатно
