Антибиотикорезистентность бактерий Listeria monocytogenes monocytogenes, выделенных из продукции животного происхождения в Нижегородской области

(Продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН) и ВОЗЖ, отвечающая за охрану здоровья животных [2].

Так, согласно государственному докладу Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в 2025 г. году в РФ при изучении антимикробной резистентности (АМР) 127 культур листерий, было зарегистрировано 15 резистентных изолятов листерий (2,6%). Анализ распределения АМР-штаммов по категориям товаров показал, что главным источником стала птицеводческая продукция, включая яйца и продукты переработки (45,9%). На кулинарные изделия и мясной сектор пришлось 31,3% и 18,9% соответственно. Если рассматривать видовую структуру резистентных изо-лятов за 2025 год, то в продовольственном сырье доминировали Salmonella (68,7%) и S. aureus (27,6%), в то время как доля L. monocytogenes составила лишь 2,6%. Однако именно листерии оказались преобладающим патогеном в рыбной продукции, заняв там долю в 44,5%. В 2025 году установлена резистентность к АМП штаммов L. monocytogenes к три-метоприм/сульфаметоксазолу (11,8%) [3].

В Российской Федерации для минимизации рисков, обусловленных антимикробной резистентностью, в РФ с 2017 года действует Стратегия предупреждения, рассчитанная до 2030 года. Для её практической реализации в 2024 году государством был утвержден последующий План действий на период 2025–2030 гг., предусматривающий комплекс мер по совершенствованию нормативно-правовой базы, повышению осведомленности населения и формированию эффективной системы мониторинга [4].

В связи с широким использованием антибиотиков в агропромышленном комплексе (до 80% от общего потребления), настоящая работа была направлена на анализ образцов продукции животноводства Нижегородской области.

Цель исследования направлена на обнаружение контаминации пищевых продуктов животного происхождения бактериями L. monocytogenes , выделение чистых культур патогена с последующей оценкой их антибиотикочув-ствительности, а также на проведение мониторинга резистентности изолятов за трехлетний период (2023-2025 гг.).

Условия, материалы и методы. Исследования были выполнены на базе Нижегородской испытательной лаборатории и Испытательной центральной научно-методической ветеринарной лаборатории ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») в 2025 году.

В работе были использованы 32 изолята бактерий L. monocytogenes , полученные из образцов продукции животного происхождения, пищевого сырья и полуфабрикатов предприятий Нижегородской области за 2023-2025 гг.

В качестве плотной питательной основы применяли агар Мюллер Хинтон (ФБУН «ГНЦ ПМБ», Россия). Диски, содержащие антибактериальные препараты, были выпущены компаниями Liofilchem (Италия) и ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера (Россия). Панель исследуемых АМП включала: ампициллин (10 мкг), эритромицин (15 мкг), триметоприм/сульфометоксазол (25 мкг), ампициллин сульбактам (20 мкг), цефок-ситин ( 30 мкг), неомицин (10 мкг), левофлоксацин (5 мкг), цефуроксим (30 мкг/диск), цефотаксим (5 мкг), стрептомицин (300 мкг), тобрамицин (10 мкг), меропенем (10 мкг), амикацин (30 мкг), моксифлоксацин (5 мкг), гентамицин (120 мкг), хлорамфеникол/ левомицетин (30 мкг), тетрациклин (30 мкг), доксициклин (30 мкг).

Для приготовления суспензий использовали чистую суточную культуру микроорганизмов, выросшую на питательном агаре Listeria пo Оттавиани и Агости (ALOA). Для создания инокулюма отбирали несколько колоний и переносили их в физиологический раствор. Мутность бактериальной массы измеряли на денситометре до достижения показателя 0,5 по шкале Мак-Фарланда. Чтобы избежать из- менения концентрации клеток, приготовленную суспензию использовали в работе — не позднее чем через 15 минут с момента получения.

Отбор и подготовку проб к посевам проводили стандартизованными методами (ГОСТ 31904-2012, ГОСТ 26669-85). Выделение бактерий L. monocytogenes проводили с использованием классических бактериологических методов (ГОСТ 32031-2022). Видовую идентификацию микроорганизмов подтверждали бактериологическим анализом, включающим окраску по Граму, реакцию на каталазу, образование B-гемолиза, определением биохимических тестов и лецитиназной активности.

Чувствительность изолятов L. monocytogenes к антибиотикам определяли дискодиффузионным методом по методическим указаниям (МУК 4.2.1890-04). Интерпретацию полученных данных осуществляли по российским рекомендациям (Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Версия 2025-01. Смоленск: МАКМАХ, СГМУ, 2025. 208 с.) .

Для анализа использовали 90-мм чашки Петри со стерильной средой Мюллер — Хинтон, содержащей 5% дефибринированной крови барана. Инокулюм объемом 0,1 мл аккуратно распределяли шпателем по поверхности агара для получения сплошного газона. На сформированный посев раскладывали диски с АМП. Период инкубации в перевернутом виде при температуре 37 °С составлял от 16 до 20 часов. При последующей интерпретации результатов (отнесении культуры к резистентным, промежуточным или чувствительным формам) измеряли диаметр окружности задержки роста бактерий, обязательно включая в этот показатель размер самого диска.

При оценке профилей АМР L. monocytogenes авторы столкнулись с дефицитом специфических интерпретационных шкал в отечественных рекомендациях ( Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Версия 2025-01. Смоленск: МАКМАХ, СГМУ, 2025. 208 с. ), подготовленных на основе рекомендаций Европейского комитета по определению чувствительности к антимикробным препаратам (EUCAST). В связи с этим для большей части АМП диаметры зон задержки роста оценивались по критериям, предназначенным для стафилококков ( Staphylococcus spp. ). При анализе чувствительности к стрептомицину пороговые значения были экстраполированы из протоколов, установленных для энтерококков ( Enterococcus spp. ). [5, 6, 7].

Для статистической обработки и построения диаграмм использовали приложение Microsoft Excel и стандартные статистические приемы обработки данных.

Результаты и обсуждение. На базе Нижегородской испытательной лаборатории, входящей в структуру ФГБУ «ВНИИЗЖ», в течение 2023–2025 гг. осуществляли комплекс исследований продовольственного сырья и товаров животного происхождения на показатели безопасности. Всего за этот период по показателю L. monocytogenes было испытано 5634 образцов продукции животного происхождения.

Характеристики проб, из которых были выделены и идентифицированы изоляты бактерии L. monocytogenes представлены на рисунке 1.

Рисунок 1 - Характеристика исследованных проб и выделенных изолятов L. monocytogenes за 2023

– 2025 гг.

В 105 образцах были обнаружены и выделены бактерии L. monocytogenes.

Почти половина всех обнаруженных изо-лятов (47%) была выделена из продукции птицеводства и полуфабрикатов на её основе (включая тушки птицы, рубленые изделия и котлеты). Вторым по значимости источником стали изделия из рыбы и морепродуктов (в частности, креветки и стейки трески или форели), где доля находок составила 19%. Многокомпонентные мясные полуфабрикаты, такие как пельмени и смешанный фарш, содержали 22% от общего числа изолятов. Наименьшая выявляемость (по 6% в каждой категории) зафиксирована в полуфабрикатах из свинины и говядины, представленной шейкой, окороком, пашиной и говяжьим фаршем.

В ветеринарной и медицинской практиках успешность борьбы с листериозом напрямую коррелирует со своевременным назначением АМП, обладающих выраженным бактерицидным действием в отношении L. monocytogenes [8, 9, 10]. L. monocytogenes чувствительна к большинству антибиотиков против грамполо-жительных бактерий, за исключением естественной устойчивости к цефалоспоринам, фосфомицину и препаратам хинолонового ряда ранних поколений [11].

Стандартная схема лечения базируется на сочетании аминопенициллинов (амоксициллин или ампициллин) и гентамицина [9, 12, 13]. Но возможно применение карбапенемов, линезолида, ванкомицина или рифампицина и АМП других групп в зависи- мости от клинической ситуации [14, 15].

В данной работе изучена резистентность 32 изолятов L. monocytogenes , выделенных в ходе анализа пищевых продуктов за указанный выше период, к 18 антибактериальным препаратам. На основании характеристик роста изученных культур определены изоля-ты, демонстрирующие чувствительность либо устойчивость к АМП (рис. 2).

По данным Европейского комитета по определению чувствительности к АМП (EUCAST), у бактерий L. monocytogenes выражена природная устойчивость к антибиотикам цефалоспоринового ряда [16]. В данной работе было проведено исследование цефалоспоринов второго (цефокситин и цефуроксим) и третьего поколения (цефотаксим). Показано, что все испытуемые изоляты резистентны к данным АМП цефалоспоринового ряда (100%), а также устойчивы или соустой-чивы к триметоприму/сульфаметоксазолу (97%). Эти данные согласуются с результатами отечественных и зарубежных ученых [17, 18, 19]. Широкое применение цефалоспоринов в качестве эмпирической анти-биотикотерапии делает природную резистентность L. monocytogenes к данной группе препаратов клинически значимой проблемой. [20]. В связи с этим идентификация генетических локусов, детерминирующих устойчивость к цефалоспоринам, является необходимым условием для разработки методов преодоления этой резистентности и повышения эффективности терапии [21].

Рисунок 2 - Определение АМР изолятов бактерий L. monocytogenes к АМП.

Все изоляты L. monocytogenes были восприимчивы к 15 из 18 протестированных антимикробных соединений: ампициллину (100%), меропенему (22%), моксифлоксацину (25%), эритромицину (22%), ампициллин сульбактаму (100%), гентамицину (75%), неомицину (59%), амикацину (44%), тобрамицину (12,5%), стрептомицину (97%), тримето-прим/сульфометоксазолу (3%), хлорамфениколу (100%), тетрациклину (50%) и доксициклину (75%).

Все изоляты бактерий рода L. monocytogenes были наиболее чувствительны к группам аминопенициллинов и пенициллинов (ампициллин, ампициллин сульбактам), а также амфениколам (хлорамфениколу), аминогликозидам – (стрептомицин, гентамицин, неомицин). Полученные результаты подтверждают зарубежные и отечественные исследования, сообщающие о том, что устойчивость к бета-лактамам встречается редко у L. monocytogenes [1, 5, 22]. Наши результаты о 100% чувствительности к ампициллину полностью подтверждают выводы мета-анализа B. Collins et al. (2022), где ампициллин признан

«золотым стандартом» терапии [21], а также сведения С. А. Ермолаевой и соавторов о чувствительности L. monocytogenes к ампициллину (2022) [5].

Аминогликозиды проявляют бактерицидное действие в отношении всех изолятов L. monocytogenes . Высокую резистентность изоляты L. monocytogenes проявляли по отношению к аминогликозидам (амикацину, тобрамицину), макролидам (эритромицину), карбо-пенемам (меропенему), что представлено на рисунках 3, 4.

Проблема распространения устойчивых к АМП бактерий в пищевых продуктах становится все более острой для ветеринарии и медицины, что подтверждается и нашими испытаниями. В частности, ни один из исследованных изолятов L. monocytogenes не остался чувствительным к базовым АМП — все они оказались резистентны как минимум к четырем видам антибиотиков. При этом максимальная устойчивость (ко всем 18 исследуемым препаратам) выявлена не была, что совпадает с наблюдениями сторонних исследователей [5, 6, 23].

Рисунок 3 - Резистентность изолятов бактерий L. monocytogenes к аминогликозидам (%)

Рисунок 4 - Резистентность изолятов бактерий L. monocytogenes к меропенему, эритромицину (%)

Анализ профилей множественной резистентности (рис. 5) показал следующее распределение: 18,8% изолятов (n=6) были устойчивы к 11–12 препаратам; 15,6% (n=5) — к 10 препаратам; по 9,4% (n=3) — к 9

и 14 препаратам; 12,5% (n=4) — к 8 препаратам; 6,25% (n=2) — к 7 препаратам. Единичные изоляты (по 3,1%) проявили резистентность к 4, 6 и 13 антимикробным средствам.

• ■    Птица и полуфабрикаты из нее

• ■    Рыба и рыбная продукция

• ■    Свинина и полуфабрикаты из нее

• ■    Говядина и полуфабрикаты из нее

• ■    мясные полуфабрикаты смешанного состава

Рисунок 5 - Множественная АМР изолятов L. monocytogenes из образцов продукции животноводства

Изоляты из говядины и смешанных мясных полуфабрикатов обладают экстремальной антимикробной резистентностью (XDR), проявляя устойчивость к абсолютному большинству протестированных классов препаратов. Сохранение чувствительности данных культур к ампициллину и ингибиторозащищенному ампициллину-сульбактаму имеет решающее значение, так как бета-лактамы традиционно являются основой терапевтических схем при лечении системных форм листериоза у сельскохозяйственных животных. В то же время выявленная чувствительность к хлорамфениколу имеет исключительно теоретическое значение, поскольку применение препаратов данной группы (включая левомицетин) в продуктивном животноводстве законодательно запрещено или строго ограничено из-за рисков накопления остаточных количеств в пищевой продукции.

Изученные изоляты, выделенные из образцов птицы, рыбы и свинины, проявили устойчивость к 4–13 антимикробным препаратам, принадлежащим к 3–7 различным функциональным классам АМП, что позволяет классифицировать данные культуры как множественно (MDR) и экстремально (XDR) резистентные.

Первые данные о возникновении штаммов, резистентных к тетрациклинам, известны с начала 1980-х годов, тогда как устойчивость к фторхинолонам была зафиксирована в 1990х [5].

На рисунке 6 представлена динамика роста АМР L. monocytogenes к препаратам группы фторхинолонов за 2023–2025 гг. В ходе исследования выявлено, что с 2023 года устойчивость изолятов к левофлоксацину (фторхинолон III поколения) увеличилась на 27%.

Мониторинг устойчивости к фторхиноло-нам IV поколения (на примере моксифлокса-цина) выявил выраженную флуктуацию параметров. За ростом показателей в 2023–2024 гг. (на 27%) последовала нисходящая тенденция в 2025 году, когда уровень упал до 71%. Полученные результаты подчеркивают подвижность механизмов лекарственной устойчивости у бактерий рода L. monocytogenes , что диктует важность непрерывного контроля их чувствительности к АМП.

Рисунок 6 - Резистентность изолятов бактерий L. monocytogenes к фторхинолонам, %

Выводы.

• 1.    Полученные результаты позволяют оценить актуальное состояние проблемы контаминации продукции животного происхождения L. monocytogenes и профиль АМР выделенных изолятов в Нижегородском регионе за период 2023-2025 гг.

• 2.    Широкое распространение L. monocytogenes в сегментах птицеводческой продукции (47%) и мясных полуфабрикатов смешанного состава (22%) указывает на необходимость совершенствования санитарногигиенического контроля на этапах переработки и хранения данных видов сырья.

• 3.    Все исследованные изоляты демонстрировали устойчивость к четырем и более анти-

• бактериальным препаратам, что является подтверждением их полирезистентности и имеет важное значение для ветеринарной и медицинской практики.

• 4.    Установленная 100% резистентность к цефалоспоринам II и III поколений подтверждает природный характер устойчивости L. monocytogenes к данной группе антибиотиков, в то время как сохраняющаяся высокая чувствительность к аминопенициллинам и амфениколам позволяет рассматривать их в качестве препаратов выбора при терапии листериоза.

• 5.    Повышение устойчивости изолятов L. monocytogenes к фторхинолонам (в частности, увеличение устойчивости к левофлоксацину

• 6.    Обнаружение в образцах продукции животноводства изолятов L. monocytogenes

на 27% за три года) позволяет предположить возможность селективного давления АМП в агропромышленном секторе.

с экстремальной (XDR) и множественной (MDR) резистентностью, отражает необходимость интеграции мониторинга АМР в систему государственного ветеринарного надзора.