Антиканцерогенный эффект фенольного антиоксиданта фенозана (4-гидрокси- 3,5-ди-трет-бутилфенилпропионовой кислоты) на спонтанный канцерогенез у крыс и мышей

К синтетическим ингибиторам канцерогенеза относят немногочисленную группу фенольных антиоксидантов (в частности, бутилокситолуол и бутилоксианизол) из класса экранированных фенолов [2], эффект которых связывают с их способностью ингибировать перекисное окисление липидов и стабилизировать геном [6]. Интерес представляет фенольный антиоксидант «фенозана»

(4-гидрокси-3,5-ди-трет-бутилфенилпропионовая кислота), благодаря его способности оказывать ноотропное действие и предупреждать развитие судорожных припадков [2]. На ряде индуцированных опухолей (почек, кожи) фенозан тормозил их развитие [4, 5].

Цель исследования – изучить в опытах на крысах и мышах способность фенозана при длительном применении тормозить спонтанный канцерогенез.

Материал и методы

Были использованы крысы линии ЛИО местной разводки и мыши SHR разводки питомника «Рап-полово» РАМН, у которых, по нашим многолетним наблюдениям, возникают опухоли к концу жизни не менее чем у трети животных. В эксперимент брали по 50 животных в возрасте 6–8 нед обоего пола в группах опыта и контроля. Животные содержались в стандартных условиях в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986), и получали сбалансированный стандартный корм и питьевую водопроводную воду.

Фенозан вводили 3 раза в нед в дозе 5 мг/кг (терапевтическая доза) перорально зондом в подсолнечном масле (0,5 мл для крыс и 0,2 мл для мышей) в течение 18 мес. Контрольные животные получали подсолнечное масло. После окончания введения препаратов через 4 мес в опытах с крысами и через 3 мес – с мышами всех оставшихся в живых животных забивали парами эфира. Результаты визуального наблюдения и систематического взвешивания животных свидетельствовали об отсутствии проявления токсичности фенозана у крыс и мышей в использованной дозе 5 мг/кг.

Погибшие или забитые в терминальном состоянии и оставшиеся по окончании опыта животные подвергались полной аутопсии. Органы с опухолями фиксировали в 10 % формалине и после гистологической обработки изучали для установления диагноза. Полученные результаты подвергали статистическому анализу с использованием критерия хи-квадрат, точного метода Фишера и критерия t (Стьюдента).

Результаты и обсуждение

Эксперименты на крысах . Динамические показатели выживаемости крыс свидетельствовали об отсутствии достоверных различий между контролем и группами с воздействием фенозана (рис. 1А, 1Б). Большинство крыс погибало после 18 мес от начала эксперимента, и чаще всего от интерку-рентных заболеваний и возрастных изменений: пневмонии, воспалительных процессов в мочеполовых органах, подчелюстных абсцессов.

Первая опухоль в группе самки-контроль обнаружена через 284 дня от начала опыта, так что эффективное число крыс, переживших этот срок в других группах, оказалось примерно одинаковым – 41–44 (табл. 1). У крыс-самок по сравнению с самцами опухоли развивались гораздо чаще – 47,7 % и 27,9 % соответственно, и множественность их была в 2 раза выше (табл. 1). У самок чаще

Таблица 1

Группы животных	Контроль, самки (n=44)	Фенозан, самки (n=41)	Контроль, самцы (n=43)	Фенозан, самцы (n=41)
Локализация	Частота, количество и множественность опухолей
Всего	21 (47,7 %); 33; 0,75 ± 0,14	7 (17,1 %)*; 8; 0,2 ± 0,07*	12 (27,9 %); 14; 0,33 ± 0,09	9 (22 %); 11; 0,27 ± 0,09
Молочная железа	8 (18,2 %); 9; 0,2 ± 0,07	1 (2,4%)*; 1 ; 0,02 ± 0,02*	-	2 (4,9 %); 2; 0,05 ± 0,03
Гипофиз	12 (27,3 %); 12; 0,27 ± 0,07	4 (9,8 %)*; 4; 0,1 ± 0,05*	5 (11,6 %); 5; 0,12 ± 0,04	1 (2,4 %); 1; 0,02 ±0,02*
Кроветворная и лимфоидная ткань	3 (6,8 %); 3; 0,07 ± 0,04	1 (2,4 %); 1; 0,02 ± 0,02	5 (11,6 %); 5; 0,12 ± 0,04	1 (2,4 %); 1; 0,02 ± 0,02*
Прочие	9 (20,5 %); 9; 0,2 ± 0,06	2 (4,9%)*; 2; 0,05 ± 0,03*	4 (9,3 %); 4; 0,09 ± 0,04	7 (17,1 %); 7; 0,17 ± 0,06

Влияние фенозана на развитие спонтанных опухолей у крыс

Рис. 1. А – выживаемость крыс-самок. Б – выживаемость крыс-самцов.

(по оси абсцисс – продолжительность эксперимента в мес, по оси ординат – выживаемость в %)

Рис. 2. А – выживаемость мышей-самок. Б – выживаемость мышей-самцов.

(по оси абсцисс – продолжительность эксперимента в мес, по оси ординат – выживаемость в %)

У крыс-самок фенозан по сравнению с контролем статистически достоверно уменьшал общую частоту и множественность опухолей соответственно на 30,6 % и 76,3 %; частоту и множественность новообразований молочной железы – на 15,8 % и 90 %; частоту и множественность новообразований гипофиза – на 17,5 % и 63 %; частоту и множественность прочих новообразований – на 15,6 % и 75% (табл. 1). У крыс-самцов фенозан по сравнению с контролем статистически достоверно уменьшал только множественность новообразований гипофиза – на 83,3 % и множественность новообразований кроветворной и лимфоидной ткани – на 83,3 % (табл. 1). Отметим, что гистологический спектр опухолей в сравниваемых группах был примерно одинаковым. Таким образом, фенозан тормозил развитие спонтанных опухолей у крыс, причем у самок более выраженно и по большему числу параметров, чем у самцов.

Эксперименты на мышах. Выживаемость мышей обеих групп (контроля и опыта) оказалась довольно высокой и практически идентичной (рис. 2А, 2Б). Большая часть мышей погибла после 15 мес от начала опыта. Причиной смерти некоторых мышей в эти сроки являлись интеркурентные заболевания и возрастные изменения.

Первая опухоль у мышей обнаружена через 313 дней: к этому сроку количество животных во всех группах оказалось примерно одинаковым – 39–44 (табл. 2). В контроле у самок зарегистрирована высокая частота опухолей – 43,2 % при множественности – 0,68 (табл. 2).

Таким образом, в эксперименте фенозан тормозит спонтанный канцерогенез у крыс и мышей.

Таблица 2

Группы животных	Контроль, самки (n=44)	Фенозан, самки (n=43)	Контроль, самцы (n=39)	Фенозан, самцы (n=39)
Локализация	Частота, количество и множественность опухолей
Всего	19 (43,2 %); 30; 0,68 ± 0,13	12 (27,9 %); 15; 0,35 ± 0,1*	13 (33,3 %); 15; 0,38 ± 0,09	7 (17,9 %); 8; 0,21 ± 0,08
Легкие	13 (29,5 %); 14; 0,32 ± 0,08	3 (7 %)*; 3; 0,07 ± 0,04*	7 (17,9 %); 8; 0,21 ± 0,07	4 (10,3 %); 5; 0,13 ± 0,07
Молочная железа	2 (4,5 %); 2; 0,05 ± 0,03	2 (4,7 %); 2; 0,05 ± 0,03	-	-
Кроветворная и лимфоидная ткань	4 (9,1 %); 4; 0,09 ± 0,04	3 (7 %); 3; 0,07 ± 0,04	4 (10,3 %); 4; 0,1 ± 0,05	1 (2,6 %); 1; 0,03 ± 0,03
Прочие	9 (20,5 %); 10; 0,23 ± 0,07	6 (14 %); 7; 0,16 ± 0,07	3 (7,7 %); 3; 0,08 ± 0,04	2 (5,1%); 2; 0,05 ± 0,04

Влияние фенозана на развитие спонтанных опухолей у мышей

До этого было показано, что фенозан увеличивает продолжительность жизни мышей линии AKR со спонтанно развивающимся лейкозом [3]. Это важно с учетом его возможного использования в качестве противоэпилептического препарата [1, 2] (в настоящее время фенозан проходит клинические испытания). Как известно, такого рода средства рассчитаны на длительное (многолетнее) применение.