Антитела к дофамину и глутамату как факторы предрасположенности к аддиктивным расстройствам

Одним из аспектов ранней индивидуальноориентированной профилактики является поиск новых молекулярных и психофизиологических биомаркеров наркотической зависимости, среди которых особое место занимают нейротрансмиттерные системы головного мозга, играющие ключевую роль в механизмах развития зависимости от психоактивных веществ и их связь с иммунной системой. Многочисленные исследования последних лет свидетельствуют о модуляции функции физиологически активных соединений, таких как нейромедиаторы, нейропептиды, гормоны специфическими антителами [2]. Установлена тесная взаимосвязь между нарушением функции нейромедиаторных систем и индукцией аутоантител к ним при различных формах патологии ЦНС [2].

В связи с этим несомненный интерес представляет поиск новых молекулярных маркеров предрасположенности к зависимости от психоактивных веществ среди антител к нейромедиаторам, которые могут отражать особенности состояния нейрорегуляторных систем, участвующих в механизмах развития болезней зависимости. Психоактивные вещества (наркотики, алкоголь и др.), способные вызывать развитие синдрома зависимости, обладают общим звеном механизма действия. Ключевую роль в механизмах развития зависимости от психоактивных веществ играет значительная перестройка в дофаминовой нейромедиации в мезолимби-ческих структурах мозга, участвующих в формировании мотиваций и влечения [1]. Дофаминовая нейромедиаторная система тесно связана с глутаматергической системой в головном мозге [5].

В связи с этим целью настоящей работы было изучение содержания аутоантител к дофамину и глутамату в сыворотках крови студентов-добровольцев, проявляющих интерес и имеющих эпизодический опыт употребления каннабиноидов и амфетаминов и отвергающих прием или не употребляющих психоактивные вещества.

Материалы и методы. Обследовано 89 студентов-добровольцев средних специальных и высших учебных заведений г. Томска и г. Югры. Исследование проведено на базе отделения аддиктивных состояний и лаборатории клинической психонейроиммунологии НИИ психического здоровья. Критериями включения в обследование были письменное информированное согласие добровольца на участие в исследовании и возраст 18—28 лет. Критериями исключения были наличие психических расстройств, неврологической патологии, соматических расстройств в стадии обострения. По результатам психологического, клинического и лабораторного обследования было сформировано три исследовательских группы.

В первую группу вошли 25 студентов (18 мужского и 7 женского пола) с эпизодическим употреблением наркотиков, преимущественно каннабиноидов и амфетаминов, которые были отнесены к группе риска по формированию зависимости от психоактивных веществ. Во вторую группу было включено 11 студентов (все мужского пола), полностью отвергающих употребление психоактивных вещества (группа «абстинентов»). Третью контрольную группу составили 53 студента (38 мужского и 15 женского пола), не употребляющих психоактивные вещества (группа «относительных абстинентов»). Кровь для исследования у добровольцев брали однократно.

Антитела к нейромедиаторам дофамину и глутамату определяли методом твердофазного ИФА (ELISA) на полистироловых 96-луноч-ных планшетах, сенсибилизированных тест-антигеном. В качестве тест-антигенов использовали конъюгаты нейромедиатора с бычьим сывороточным альбумином (БСА). Конъюгированные антигены дофамин-БСА синтезировали с использованием диазотированного белка [4]. Конъюгат глутамат-БСА синтезировали с помощью глутарового альдегида [3]. Тест-антиген вносили в объеме 100 мкл в лунки планшета (Costar, USA) в конечной концентрации 0,3 мкг/лунку. Через 18 часов инкубации при температуре 4⁰ С планшеты 4—5 раз промывали физиологическим раствором с 0,05 % твином-20. Тестируемые сыворотки вносили в объеме 100 мкл в 0,05 М фосфатно-солевом буферном растворе рН 7,4 с 0,05 % твином-20 в конечном разведении 1:50. После инкубации в течение 1 часа при температуре 37⁰ С планшеты промывали физиологическим раствором с 0,05 % твином-20 3—4 раза и обрабатывали вторичными антителами к IgG человека, меченными пероксидазой хрена (фирма «Sigma», USA), в разведении 1:2000. После часовой инкубации в термостате при 37⁰ С планшеты промывали 3—4 раза физиологическим раствором с 0,05 % твином-20 и в лунки добавляли по 100 мкл субстратной смеси, содержащей равные объемы 0,2 М раствора Na 2 HPO 4 x2H 2 O 2 и 0,1 М раствора лимонной кислоты, 8 мг о-фенилдиамина, 8 мкл 33 % раствора Н 2 О 2 . После часовой инкубации в темноте при комнатной температуре реакцию останавливали 6 н. H 2 SO 4. Содержание антител в каждой лунке оценивали по оптической плотности сыворотки при λ=492 нм с использованием считывающего устройства «Mini-reader» («ImmunoChem-2100», USA) и выражали в условных единицах активности, показателем, представляющим отношение оптической плотности сыворотки крови каждого больного к среднему значению сывороток крови здоровых доноров.

Полученные данные статистически обрабатывали по алгоритмам программы «Statistica 6.0» с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Критические значения уровня статистической значимости при проверке нулевых гипотез принимались равными 0,05. Данные представлены в виде М±SEM, где М – среднее, SEM – стандартная ошибка среднего.

Результаты и обсуждение. В сыворотках крови студентов-добровольцев, демонстрирующих различный интерес к психоактивным веществам (алкоголю, каннабиноидам и амфетаминам), обнаружены аутоантитела к дофамину и глутамату. Различия, выявленные в группе здоровых лиц, имеющих опыт эпизодического употребления каннабиноидов и амфетаминов, а также в группах «абсолютных абстинентов», полностью отвергающих прием психоактивных веществ, в том числе алкоголя, и здоровых лиц, являющихся «относительными абстинентами» по уровню аутоантител к дофамину и глутамату в сыворотках крови, представлены в таблице.

Таблица

Содержание аутоантител к дофамину и глутамату в сыворотках крови студентов-добровольцев в зависимости от их интереса к употреблению психоактивных веществ

Примечание . Уровень достоверности: * p<0,05, по сравнению с группой здоровых лиц, «относительных абстинентов»; #p< 0,05, ## p<0,01 по сравнению с группой здоровых лиц, «абсолютных абстинентов».

Как видно из таблицы, в группе студентов, которые эпизодически пробовали каннабиноиды или амфетамины, наблюдали снижение аутоантител к дофамину на 20 % и к глутамату на 14 % по сравнению со здоровыми лицами, являющимися «относительными абстинентами».

Группа студентов, являющихся «абсолютными абстинентами», характеризовалась повышенными уровнями в сыворотке крови аутоантител к дофамину на 30 % и к глутамату на 20 % по сравнению с группой студентов, эпизодически проявляющих интерес к психоактивным веществам. Различий в содержании аутоантител к дофамину и глутамату в сыворотках крови «абсолютных абстинентов» и «относительных абстинентов» не выявлено. Однако следует отметить, что небольшое количество студентов «абсолютных абстинентов» не позволило получить различия между ними и здоровыми лица- ми «относительными абстинентами», хотя прослеживается тенденция к повышению содержания аутоантител к дофамину и глутамату в группе «абсолютных абстинентов».

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено существенное снижение аутоантител к дофамину и глутамату у студентов, проявляющих интерес к психоактивным веществам и имеющим с ними эпизодический контакт, по сравнению со студентами «абсолютными и относительными абстинентами». Полученные данные можно рассматривать как отражение нейроиммунных взаимодействий между дофаминергической и тесно связанной с ней глутаматергической системой, а также аутоантителами к этим нейромедиаторам. Известно, что эти нейромедиаторные системы являются основными в развитии болезней зависимости [1]. По всей вероятности, сниженные уровни антител к дофамину и глутамату в группе студентов, эпизодически употреблявших психоактивные вещества, могут соответствовать низким уровням соответствующих медиаторов в мезо-лимбических структурах мозга и повышенной потребности в стимуляции их выработки этими веществами. Полученные результаты указывают на вовлеченность аутоантител к дофамину и глутамату в механизмы развития предрасположенности к болезням зависимости и свидетельствуют о возможности их использования в качестве биомаркеров риска развития зависимости от психоактивных веществ, что в дальнейшем может использоваться в разработке подходов к индивидуально-ориентирован-ной профилактике аддиктивных расстройств.

Работа поддержана грантом РГНФ № 16-06-00617.