Ассоциация полиморфизмов генов NOS3 и ITGB3 c риском развития ишемической болезни сердца

ИБС является мультифакторным заболеванием, и риск ее развития определяется взаимодействием метаболических, поведенческих и генетических факторов [1].

Известно, что дисфункция эндотелия в совокупности с имеющимися факторами риска способствует возникновению и прогрессированию ИБС и выступает в качестве предиктора неблагоприятного исхода. В реализации функций эндотелия важную роль играет оксид азота (NO), который синтезируется эндотелиальной NO-синтазой (eNOS). Полиморфизм Т-786С (rs2070744) гена NOS3 обусловливает недостаток наработки фермента, что является причиной снижения синтеза и высвобождения NO, может привести к дисфункции эндотелия и служить основой для развития ИБС [5, 8].

В прогрессировании поражения коронарных артерий важнейшую роль играют тромбоциты. Процесс агрегации тромбоцитов заканчивается конформационным изменением комплекса GPIIb/IIIa, преобразующегося в рецептор для фибриногена [4]. Субъединица GPIIIa кодируется геном ITGB3. У носителей аллеля 1565C полиморфизма T1565C (rs5918) данного гена регистрируется более высокая степень агрегации тромбоцитов, что лежит в основе предрасположенности к атеротромбозу [10].

Полиморфные варианты генов могут определять как риск возникновения патологии, так и тяжесть процесса у каждого конкретного пациента, но их эффекты зависят от популяционных особенностей исследуемых когорт.

Цель исследования: оценка ассоциации полиморфизма T-786C гена NOS3 и полиморфизма T1565C гена ITGB3 с риском развития и прогрессирования ИБС в популяции Западно-Сибирского региона.

Материал и методы

В исследование включено 242 больных хронической ИБС в возрасте 58,1±8,5 лет, прошедших обследование и наблюдавшихся в отделении реабилитации больных сердечно-сосудистыми заболеваниями НИИ кардиологии (Томск). Всем пациентам выполнено стентирование коронарных артерий. Стенокардию напряжения имели 222 (91,7%) пациента, из них стенокардия I функционального класса (ФК) выявлена у 50 (22,5%) человек, II ФК – у 99 (44,6%), III ФК – у 73 (32,9%). Диагноз хронической сердечной недостаточности (ХСН) I ФК по Нью-Йоркской классификации поставлен 63 (27,0%) пациентам, ХСН II ФК – 118 (50,7%) и ХСН III ФК – 52 (22,3%) больным ИБС.

Фракция выброса ЛЖ в общей выборке составила 62 (55; 65)%.

В группу контроля вошли 162 добровольца в возрасте 52,7±8,2 лет, проживающих на территории г. Томска, не имеющих в анамнезе сердечно-сосудистой патологии и тяжелых хронических заболеваний.

ДНК выделяли из образцов цельной крови с помощью набора реагентов “Wizard Genomic DNA Purification Kit” (Promega, USA). Амплификацию полиморфных участков генов выполняли методом аллель-специфичной полимеразной цепной реакции c использованием готового набора SNP-express (НПФ ЛИТЕХ, Россия) и дальнейшей электрофоретической детекцией.

Для анализа количественных данных использовали тест Манна–Уитни для двух независимых групп или тест Крускала–Уоллиса для нескольких независимых групп. Для сравнения дискретных величин использовали критерий χ ² Пирсона или двусторонний точный тест Фишера. Для всех видов анализа статистически значимыми считались различия при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение

Мы оценили распределение частот генотипов и аллелей полиморфизмов T-786C гена NOS3 и T1565C гена ITGB3 в выборках больных ИБС и здоровых добровольцев (группа контроля). Результаты представлены в таблице 1.

Оказалось, что генотип -786CC и аллель -786C гена NOS3 статистически значимо чаще встречались среди пациентов, чем в группе контроля. Показатель отношения шансов для аллеля -786С составил 1,51 [95% CI: 1,12 – 2,04], что позволяет рассматривать носительство данного аллеля в качестве фактора риска ИБС в рассматриваемой популяции. Среди больных ИБС преобладали и носители аллеля 1565C гена ITGB3 , а отношение шансов, отражающее риск развития ИБС, для аллеля 1565C превышало единицу – 1,58 [95% CI: 1,06 – 2,35].

Далее была проведена оценка тяжести ФК стенокардии и ХСН в группах пациентов, являющихся носителями разных полиморфных вариантов гена NOS3 и гена ITGB3 . Наблюдалось уменьшение частоты наиболее легкого ФК I стенокардии от 28,9% у носителей генотипа -786TT до 12,1% у носителей генотипа -786CC и наибольшая частота ФК III у гомозигот -786CC (табл. 2). Однако частота ФК I, II, III ХСН была сопоставимой. В то же время больные с генотипом -786TC отличались наименьшей фракцией выброса ЛЖ.

Результаты, полученные при исследовании полиморфизма T-786C гена NOS3 , не противоречат данным, полученным другими исследователями. Так, в ряде работ отмечается, что для носителей аллеля -786C характерно увеличение тонуса венечных артерий и склонность к ко-ронароспазму [7, 8]. В украинской популяции установлена ассоциация между генотипом -786CC гена NOS3 и острым коронарным синдромом [3]. Опубликованы данные и о том, что полиморфизм Т-786С может выступать и в качестве предиктора рестеноза стентированных коронарных артерий [9].

Мы обнаружили ассоциацию носительства аллеля

Таблица 1

Распределение частот генотипов (n, %) и аллелей (%) в исследуемых группах

Генотипы	Группы		p
	Пациенты (n=242)	Контроль (n=162)
Ген NOS3 Генотипы -786TT / -786TC / -786CC	87 (35,9) 120 (49,6) 35 (14,5)	76 (46,9) 75 (46,3) 11 (6,8)	0,017
Аллели -786Т / -786С	60,7 / 39,3	70,1 / 29,9	0,007
Ген ITGB3 Генотипы 1565TT / 1565TC / 1565CC	157 (64,9) 80 (33,0) 5 (2,1)	122 (75,3) 39 (24,1) 1 (0,6)	0,062
Аллели 1565Т / 1565С	81,4 / 18,6	87,3 / 12,7	0,025

Примечание: p – уровень значимости при сравнении частот генотипов и аллелей между пациентами и контролем.

1565C гена ITGB3 с риском развития ИБС. В литературе описано, что для носителей аллеля 1565C гена ITGB3 характерна повышенная агрегационная активность тромбоцитов [4, 6], что может приводить к прогрессированию поражения коронарных артерий и, в конечном счете, к развитию ИБС. В частности показано, что носительство аллеля 1565C сопряжено с высоким риском развития инфаркта миокарда, агрессивным протеканием атеро-тромботической болезни и более высокой смертностью [2, 10]. Однако в нашей выборке отсутствовали значимые различия по частоте ФК I, II, III стенокардии и ХСН, а также фракции выброса ЛЖ в группах пациентов с генотипом 1565TT и носителей аллеля 1565C гена ITGB3 (табл. 3), что может быть обусловлено особенностями рассматриваемой выборки.

Таким образом, носительство аллеля -786С полиморфизма T-786C гена NOS3 и аллеля 1565C полиморфизма T1565C гена ITGB3 сопряжено с риском развития ИБС среди жителей Западно-Сибирского региона. Пациенты с генотипом -786CC гена NOS3 составляют группу риска прогрессирования стенокардии.

Таблица 2

Ассоциация полиморфизма T-786C гена NOS3 с тяжестью течения ИБС

Показатели	Генотипы больных ИБС			p
	TT	TC	CC
Возраст, годы	59 (54; 65) (n=87)	57 (51; 63) (n=120)	56 (53; 61) (n=35)	0,270
Стенокардия напряжения, I / II / III ФК, n (%)	22 (28,9)	24 (21,2)	4 (12,1)	0,044
	25 (32,9)	59 (52,2)	15 (45,5)
	29 (38,2)	30 (26,6)	14 (42,4)
ХСН, I / II / III ФК, n (%)	21 (25,6)	30 (25,6)	12 (35,3)	0,412
	40 (48,8)	65 (55,6)	13 (38,2)
	21 (25,6)	22 (18,8)	9 (26,5)
Фракция выброса ЛЖ,%	64 (57; 67) (n=68)	61 (54; 65) (n=98)	63 (60; 65) (n=28)	0,033

Примечание: p – уровень значимости различий между группами носителей генотипов TT, TC, CC.

Таблица 3

Ассоциация полиморфизма T1565C гена ITGB3 с тяжестью течения ИБС

Показатели	Генотипы больных ИБС				p; p1
	TT	TC	CC	TC+CC
Возраст, годы	57 (52; 64) (n=157)	58 (53; 63) (n=80)	57 (54; 58) (n=5)	58 (53; 63) (n=85)	0,823; 0,555
Стенокардия напряжения, I / II / III ФК, n (%)	35 (23,8)	14 (19,7)	1 (25,0)	15 (20,0)	0,881; 0,801
	65 (44,2)	33 (46,5)	1 (25,0)	34 (45,3)
	47 (32,0)	24 (33,8)	2 (50,0)	26 (34,7)
ХСН, I / II / III ФК, n (%)	39 (25,7)	22 (29,0)	2 (40,0)	24 (29,6)	0,289; 0,227
	83 (54,6)	34 (44,7)	1 (20,0)	35 (43,2)
	30 (19,7)	20 (26,3)	2 (40,0)	22 (27,2)
Фракция выброса ЛЖ,%	62 (56; 65) (n=123)	62 (55; 65) (n=67)	65 (58; 68) (n=4)	63 (55; 65) (n=71)	0,731; 0,961

Примечание: p – уровень значимости различий между группами носителей генотипов TT, TC, CC; р1 – уровень значимости различий между группами TT и TC+CC.