Бактерицидная активность слюны и сыворотки крови жвачных животных по отношению к различным видам тест-культур

Неспецифическую резистентность животных интегрально характеризует бактерицидная активность биологических жидкостей. Наибольшее количество работ посвящено определению этого показателя в сыворотке крови, тогда как применительно к слюне они немногочислены и осуществлены лишь на людях в экспериментальных исследованиях.

Бактерицидные свойства слюны обусловлены лизоцимом, комплементом, главными и минорными гликопротеинами, а также катионными антимикробными пептидами (дефензинами, гистатинами и кателицидинами) [4, 5]. Действие этих антибактериальных факторов может усиливаться благодаря синергизму и аддитивному взаимодействию [8].

Вышеизложенное свидетельствует о необходимости исследования бактерицидной активности слюны животных разных видов, а также повышения информативности данного показателя путем минимизации влияния методических факторов на его величину. Целью наших исследований явилось установление величины бактерицидной активности слюны и сыворотки крови коров и овец по отношению к различным видам тест-культур.

Материалы и методы. Слюну получали от клинически здоровых нестельных коров черно-пестрой породы в возрасте 4-6 лет массой от 300 до 400 кг (10 голов), содержавшихся на молочно-товарной ферме ООО «Серп и Молот», с. Шапши Высокогорского района РТ, благополучного по инфекционным заболеваниям, а также от овец в возрасте 2-х лет (10 голов) в условиях МУБП «Казанский зооботсад». Фармакологическую активацию секреции слюны проводили 1 %-ным раствором пилокарпина гидрохлорида в дозах 15 и 2,5 мл коровам и овцам, соответственно. Собранную слюну сразу же замораживали, после размораживания центрифугировали при 3 тыс. об./мин в течение 10 мин, а надосадочную жидкость фильтровали. Кровь у животных получали из яремной вены стерильно специальными системами во флаконы емкостью 250 мл. Сыворотку крови получали по методике Н.И. Гурьянова (1992), центрифугировали при 1,5 тыс. об./мин в течение 15 мин и замораживали. После размораживания ее пропускали через мембранные фильтры фирмы «Millipore» диаметром пор 0,22 мкм.

Бактерицидную активность слюны и сыворотки крови определяли по методике О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1966), используя в качестве тест-культуры микроорганизмы, относящиеся к разным группам по Граму – E.coli в дозе 5 млн. бак. клеток в пробе, B. subtilis и M. lysodeikticus - 150 и 5 млн. бак. клеток в пробе соответственно. Продолжительность инкубации проб слюны при использовании E.coli и B. subtilis составила 5 ч, M. lysodeikticus – 3 ч; сыворотки крови - при использовании E.coli – 5 ч, B. subtilis и M. lysodeikticus – 3 ч. В качестве основы питательной среды использовали гидролизат Хоттингера в количестве 5 мл в пробе.

Результаты исследования. Результаты исследования бактерицидной активности слюны и сыворотки крови животных представлены в таблице.

Влияние вида тест-микроба на величину бактерицидной активности (%) слюны и сыворотки крови жвачных животных

Примечание: *, ** - уровни достоверности различия, соответственно р≤0,001 и ≤ 0,01.

Как видно из таблицы, величина бактерицидной активности слюны при использовании культуры B. subtilis и M. lysodeikticus выше, чем культуры E.coli у коров на 10,3 и 14,1 %, у овец – на 16 и 20,5 % (во всех случаях р≤0,01) соотвтственно. Величина бактерицидной активности сыворотки крови при использовании культуры E.coli выше, чем культуры B. subtilis и M. lysodeikticus у коров на 48,4 и 44,6 %, у овец – на 52,5 и 48,1 % (во всех случаях р≤0,001). При использовании B. subtilis и M. lysodeikticus бактерицидная активность слюны достоверно (во всех случаях р≤0,001) выше, чем сыворотки крови: у коров на 36,9 и 35,1 %, у овец – на 41,7 и 39,8 % соответственно; при использовании E.coli, наоборот, достоверно (во всех случаях р≤0,001) ниже у коров и овец на 26,7 и 31,6 % соответственно. Величина бактерицидной активности сыворотки крови при использовании E.coli соответствует литературным данным (Плященко С.И., 1979). Величина бактерицидной активности слюны у коров и овец при использовании тест-культуры M. lysodeikticus достоверно выше, чем при использовании B. subtilis на 4,2 и 5,4 % (во всех случаях р≤0,01) соответственно; сыворотки крови – достоверно выше на 6,9 и 8,4 % (во всех случаях р≤0,01) соответственно .

Обсуждение. Бактерицидные системы и слюны, и сыворотки крови тесно взаимосвязаны (Shugars D., 1999; Ouhara K. et al., 2005; Боровиков О.В. и др., 1985); лишение одного из факторов бактерицидности вызывает изменение содержания других. Установлено, что каждый из этих компонентов отвечает за литическую активность биологической жидкости в отношении к определенному (или нескольким) виду бактерий. Угнетение или отсутствие того или иного компонента ведет к изменению бактерицидной активности исследуемой жидкости к тому или иному микробу.

Можно предположить, что при определении бактерицидной активности слюны и сыворотки крови с использованием в качестве тест-культуры грамотрицательного микроорганизма косвенно оценивается уровень комплемента и пропердина в них, а при использовании грамположительного – лизоцима. Следовательно колебания активности или титра комплемента, лизоцима, пропердина, а также бета-лизинов и катионных антимикробных пептидов, обусловливающих бактерицидную активность слюны и сыворотки крови, будут сказываться на величине последних.

Выводы. При использовании культуры B. subtilis и M. lysodeikticus бактерицидная активность слюны жвачных выше, чем сыворотки крови, а при использовании E.coli, наоборот, ниже. При этом величина данного показателя в слюне и сыворотке крови у коров выше, чем у овец. В случае параллельной оценки бактерицидной и лизоцимной активности для унификации методов желательно использовать в качестве грамположительной тест-культуры M. lysodeikticus.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Гурьянов, Н.И. Усовершенствование технологий получения сывороток крови кур, бычков, эмбрионов коров и изучение их свойств при культивировании клеток и вирусов: Автореф. дисс. … канд. биол. наук / Н.И. Гурьянов-Казань, 1992. - 19 с. 2. Плященко, С.И. Естественная резистентность организма животных / С.И. Плященко, В.Т. Сидоров.- Л.: Колос. Ленингр. отд-ние, 1979. - 184 с. 3. Смирнова, О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О.В.Смирнова, Т.А. Кузьмина // ЖМЭИ. - 1966. - № 4. - С. 8-11. 4. Ahmad, M. Immunocytochemical localization of histatins in human salivary glands / М. Ahmad, М. Piludu, F. Oppenheim, Е. Helmerhorst, А.

Hand // J. Histochem. Cytochem. - 2004. - V. 52. - P. 361-370. 5. Nieuw Amerongen, A. Salivary mucins: protective functions in relation to their diversity / А. Nieuw Amerongen, J. Bolscher, Е. Veerman // Glycobiology. -1995. - V. 5. - P. 733-740. 6. Nieuw Amerongen, A. Saliva – the defender of the oral cavity / А. Nieuw Amerongen, Е. Veerman // Oral Dis. - 2002. - V. 8. -P. 12-22. 7. Ouhara, K.. Susceptibilities of periodontopathogenic and cariogenic bacteria to antibacterial peptides, β-defensins and LL37, produced by human epithelial cells / К. Ouhara, Н. Komatsuzawa, S. Yamada et al. // J. Antimicrob. Chemother. - 2005.- V. 55. - P. 888-896. 8. Shugars, D . Endogenous mucosal antiviral factors of the oral cavity / D . Shugars // J. Infect. Dis. - 1999. - V. 179.-Suppl. 3 . - P. 431-43 5 .

БАКТЕРИЦИДНАЯ АКТИВНОСТЬ СЛЮНЫ И СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ ПО ОТНОШЕНИЮ К РАЗЛИЧНЫМ ВИДАМ ТЕСТ-КУЛЬТУР

Покровская Е.С., Хуснутдинов Н.Н., Караганова Н.С.

Резюме

Установлена величина бактерицидной активности слюны и сыворотки крови коров и овец по отношению к разным видам тест-культур. При использовании культуры B. subtilis и M. lysodeikticus бактерицидная активность слюны жвачных выше, чем сыворотки крови, а при использовании E.coli, наоборот, ниже. В случае параллельной оценки бактерицидной и лизоцимной активности для унификации методов желательно использовать в качестве грамположительной тест-культуры M. lysodeikticus.

BACTERICIDAL ACTIVITY OF SALIVA AND BLOOD SERUM OF RUMINANT ANIMALS AGAINST DIFFERENT TYPES OF TEST-MICROBE

Pokrovskaya E.S., Husnutdinov N.N., Karaganova N.S.