Биоцидное действие дезинфицирующего препарата на основе надуксусной кислоты

На сегодняшний день, как показывает мировой опыт, наиболее эффективными и экологически безопасными дезинфектантами являются препараты на основе надуксусной кислоты (НУК). Эти современные препараты представляют собой оптимизированный, четырехкомпонентный стабилизированный продукт уксусной кислоты, воды, перекиси водорода и надуксусной кислоты [1,2,3].

За рубежом препараты на основе надуксусной кислоты успешно применяются в пищевой промышленности в качестве дезинфектантов, для антимикробной обработки фруктов и овощей, а также для дезинфекции питьевой воды, в системах обратного осмоса и фильтрации. Кроме того, их широко используют в ветеринарии, медицине и там, где требуется особая микробиологическая чистота и стерильность. В нашей стране также созданы препараты на основе надуксусной кислоты, но большинство из них не обладает высокой стабильностью активных веществ и имеет низкую концентрацию НУК (5-7%) [1,6].

Эту проблему удалось решить путем введения новых стабилизаторов, обладающих специфической способностью к формированию стабильных комплексов, способствующих сохранности высоко реакционноспособных смесей, за счет удаления присутствующих в микроколичествах ионов металлов, добавление новых стабилизаторов также повышает концентрацию надуксусной кислоты. В результате было создано новое стабильное средство с высоким содержанием надуксусной кислоты (15-20%).[4,5].

В связи с изложенным, целью наших исследований явилось изучение эрадикационных свойств новой дезинфицирующей композиции на основе надуксусной кислоты.

Материал и методы. Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики; утв. ГУВ МСХ СССР 27.12.87г, методическими рекомендациями по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфицирующим средства от 10.01.2002 г.

В опытах использовали рабочий раствор новой дезинфицирующей композиции в концентрации 0,1% и экспозициях 5,10,15 минут, опыты проводили без органической защиты.

Тест-культуры бактерий: E. coli шт. К-12, St. aureus шт. 209-Р.

Для исследования бактериальной активности препарата использовали кусочки обезжиренного батиста, размером 0.5 – 1.0 см, стерилизованного в автоклаве. Нужное для исследования количество стерильного батиста клали в стерильную чашку Петри и заливали 10 –

20 мл 2 – х – миллиардной бактериальной взвеси. После внесения импрегнированных культурой тест – объектов в дезинфицирующий раствор и экспозиции (5,10,15 мин), проводили промывку “носителей” в стерильной дистиллированной воде. Далее производили посев на питательную среду (МПА), с последующей инкубацией в термостате.

В качестве контроля бактерицидного действия нового дезосредства использовали стерильный изотонический раствор NaCl.

Для изучения обеззараживающих свойств нового препарата использовали трансмиссионную электронную микроскопию. Для этого образцы фиксировали в 4%-ном растворе параформальдегида при +4оС в течение 48 ч. Бактериальную взвесь центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин. Тест - образцы разрезали на две части, которые складывали стопкой. Затем тест – образцы и полученный после центрифугирования осадок дофиксировали 1%-ным раствором осмиевой кислоты, обезвоживали по стандартной методике в растворах этилового спирта возрастающей концентрации и ацетоне, и заливали в смесь эпон-аралдит. Ультратонкие срезы готовили на микротоме Райхерт-Янг (Австрия). Срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Исследовали в электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония), фотосъемку проводили с помощью встроенной цифровой камеры Jeol и цифровой камеры бокового ввода Veleta (SIS, Германия).

Результаты исследований и их обсуждение. В отношении E. сoli бактерицидный эффект препарата отмечен при 10 минутной экспозиции, на St. аureus губительное действие оказывала 15 минутная экспозиции (таблица).

Таблица - Дезинфицирующие свойства нового препарата на основе надуксусной кислоты

Концентрация, в % (по препарату)	Экспозиция, мин	Культуры микроорганизмов
		E. coli шт.К-12	St. aureus шт. 209-Р
0,1	5	+	+
	10	-	+
	15	-	-

Контроль 0,9% раствор NaCl

Примечание: (+)-рост; (-)- отсутствие роста.

При электронно-микроскопическом исследовании нативных препаратов тест-культур в полях зрения определяли округлые и палочковидные профили, нормально структурированных микробных клеток. Отчетливо просматривались основные морфологические

Рис. 1. Е. coli - контроль.              Рис. 2. St. aureus контроль.

Нормальная морфология бактериальных клеток.

После 10 минутной воздействия дезинфектанта на Е. coli наблюдалась сегрегация цитоплазмы бактериальной клетки. Центральная ее зона выглядела оптически пустой, определялись

Рис. 3. Е. coli

Рис. 4. St. aureus

компоненты микробной клетки: клеточная стенка, плазмолемма, мелкозернистый матрикс рибосомальной системы и нуклеоид, представленный более светлой областью цитоплазмы (рис. 1, 2).

только фрагменты оболочек и хлопьевидный материал, что было следствием преобладания процесса полного лизиса бактериальных клеток (рис. 3).

Лизированные бактерии

Деструкция клеточной стенки (черная стрелка) вакуолизация цитоплазмы (белые стрелки).

Губительный эффект на золотистый стафилококк после использования 15 минутной экспозиции дезинфицирующего препарата сопровождался: деструкцией клеточной стенки и вакуолизацией цитоплазмы бактериальных клеток (рис. 4) эти дегенеративные изменения приводили к дальнейшему лизису St aureus (рис. 5).

Рис. 5. Лизис St. aureus

Выводы. 1. Новый дезинфицирующий препарат обладает           2. Новый дезинфицирующий препарат оказывает деструктивное эрадикационным действием в концентрации 0,1% в отношении E. сoli действие на клеточную стенку и цитоплазму бактерий. и St. аureus при 10 и 15 минутной экспозиции соответственно.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Белова, В.И. Основные направления исследований по разработке дезинфицирующих препаратов / В.И. Белова, Л.И. Арефьева, В.Е. Лиманов и др. // Актуальные вопросы совершенствования дезинфекционных и стерилизационных мероприятий. Ч.2 – М., 1990. С. 137 – 141. 2. Гусев, А.А. Надуксусная кислота для деконтаминации сальмонелл на тушках птицы / А.А. Гусев, Т.Х. Чурукба, С.И. Козак / Ветеринария. – 1998. – №2. – С. 44 – 46. 3. Софронов, В.Г., Аржаков, П.В. Изучение спороцидного действия нового биоцидного препарата «Бакдез». // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2014. Т. 218. № 2. С. 252-255. 4. Саливерстов В.В. Дезинфекция в системе ветеринарно-санитарных мероприятий / В.В. Селиверстов, И. А. Дудницкий, Н.И. Попов // Ветеринария. – 1999. - №2. – С.3. 5. Barnes, E.M. Psychrophilic spoilage bacteria of poulty / E.M. Barnes, C.S. Impey // J. Appl. Bacterial. – 1968. - №31. – P. 97-107. 6. Holah, J.T. Malthus based surface disinfection test for food hygiene / J.T. Holah, C. Higgs, S. Robinson // Letters in Applied Microbiology. – 1990. – № 11. – P. 255 – 259.

БИОЦИДНОЕ ДЕЙСТВИЕ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ НАДУКСУСНОЙ КИСЛОТЫ

Софронов В.Г., Михайловская А.С., Аржаков В.Н Резюме

Установлено, что новый препарат обладает биоцидным действием в отношении кишечной палочки и золотистого стафилококка при воздействии низкой концентрации и малой экспозиции. На основании данных полученных при проведении трансмиссионной электронной микроскопии установлено, что в отношении кишечной палочки наблюдалась сегрегация цитоплазмы бактериальной клетки, центральная ее зона выглядела оптически пустой, определялись только фрагменты оболочек и хлопьевидный материал, что было следствием преобладания процесса полного лизиса бактериальных клеток. Губительный эффект на золотистый стафилококк после использования нового дезинфицирующего препарата сопровождался: деструкцией клеточной стенки и вакуолизацией цитоплазмы бактериальных клеток эти дегенеративные изменения приводили к дальнейшему лизису золотистого стафилококка. В результате проведенных исследований можно сделать вывод, о том, что новый дезинфицирующий препарат оказывает деструктивное действие на клеточную стенку и цитоплазму бактерий.

BIOCIDAL DISINFECTANT BASED ON PERACETIC ACID

Sоfronov V.G., Mihajlovskya A.S., Arzhakov V.N