Динамика окислительной модификации белков и липидов плазмы крови у больных алкоголизмом в процессе терапии

При алкоголизме часто формируется окислительный стресс (ОС), в условиях которого белки, липиды, углеводы, нуклеиновые кислоты подвергаются окислительной модификации, теряя способность нормально функционировать [1, 2, 3, 4]. Продукты такой модификации – карбонилированные, нитрозилированные и гликированные белки; агрегаты, полученные в результате кросс-линкинга белковых молекул; продукты перекисного окисления липидов; разные гибридные аддукты, дигидрогуанозин, гомоцистеин и др. служат маркерами окислительного стресса [5, 6]. Согласно данным литературы, состояние ОС формируется при разных патологиях, и зачастую терапевтические стратегии предполагают подавление ОС [7]. Так, например, хорошо известно о применении антиоксидантов в медицинской практике. Рядом авторов, в частности, показано, что применение антиоксидантов в комплексном антиалкогольном лечении больных алкогольной зависимостью приводит к снижению выраженности ОС у пациентов [8, 9, 10].

С другой стороны, установлено, что ОС для организма необходим, так как он играет существенную роль в иммунном ответе [11]. Высказывается также мнение, что в незначительных дозах окислительный стресс является полезным, так как проводит своеоб- разную тренировку организма и готовит его к встрече с более интенсивными стрессовыми условиями [12]. В ряде работ приводятся сведения о том, что не все окислительные модификации биомолекул вредны для организма, что карбонилирование, S-нитрозилирование и нитрование белков могут играть важную роль в процессе деградации поврежденных белков, что необходимо для нормального функционирования здоровых клеток [13, 14, 15]. Таким образом, купирование ОС не всегда может быть полезно для организма.

Ранее нами было отмечено, что использование антиоксидантной терапии при лечении больных алкогольной зависимостью может приводить к индукции ОС [16, 17].

С целью развития представлений об окислительном стрессе в клинике алкоголизма и повышения эффективности противоалкогольного лечения проведено расширенное исследование динамики маркеров окислительного стресса – карбонилов белков и продуктов ПОЛ – в плазме крови больных алкоголизмом до и после антиалкогольной терапии в зависимости от исходного оксидативного статуса пациентов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В исследовании приняли участие 46 больных алкоголизмом мужчин, поступивших в отделение ад-диктивных состояний НИИ психического здоровья Томского НИМЦ с диагнозом: Психические и поведенческие расстройства, вызванные употреблением алкоголя; абстинентное состояние (F10.302). Средний возраст пациентов составил 46,3±1,4 года.

Забор крови осуществляли дважды: первый раз – при поступлении больного в состоянии абстиненции до лечения, второй раз – через 2 недели, в течение которых проводили дезинтоксикацию. Медикаментозная терапия на этом этапе представлена церебро-, ангио- и гепатопротекторными средствами, антиоксидантами, тимолептическими препаратами – серотонинергическими антидепрессантами и антиконвульсантами для снижения патологического влечения к психоактивному веществу.

Для оценки оксидативного статуса пациентов до и после терапии в плазме крови определяли содержание продуктов окислительной модификации белков (ОМБ), измеряя карбонилированные белки по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином [18], и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) с использованием тиобарбитуровой кислоты [19]. Измерение оптической плотности проб проводили на приборе Epoch (BioTek, США). За 100% принимали средние показатели продуктов ОМБ и ПОЛ плазмы крови, полученной от 34 мужчин, составивших группу контроля. В эту группу включали здоровых мужчин, которые не состояли на учете у психиатра или нарколога, не имели хронических соматических заболеваний в стадии обострения и не употребляли алкоголь, по крайней мере последние 10 суток перед исследованием. Средний возраст в группе контроля составил 42,8±1,8 года (разница со средним возрастом пациентов не достоверна, р=0,187). Контрольное значение для продуктов ОМБ составило 0,37±0,01 нмоль/мг, для продуктов ПОЛ – 2,56±0,10 нмоль/мл. Если у пациента уровень продуктов ПОЛ и/или ОМБ превышал средние контрольные значения более чем на 20%, мы полагали наличие у больного состояние окислительного стресса. О купировании/активации ОС после проведенной терапии судили по сниже-нию/повышению продуктов ОМБ и ПОЛ в плазме крови.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета компьютерных программ «Statistica», версия 10 для Windows. Для проверки согласия с нормальным законом распределения количественных показателей использовали критерий Шапиро-Уилка. Данные рассчитывали по медиане (Me) и межквартильному интервалу (QL– QU). Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Манна-Уитни (Mann-Whitney, U test), для зависимой выборки – тест Вилкоксана (Wilcoxon). Статистически значимыми различия считали при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

При оценке оксидативного статуса больных алкогольной зависимостью, поступивших на лечение в состоянии абстиненции, было обнаружено, что из 46 пациентов, принимавших участие в исследовании, у 14 человек оба показателя, характеризующих окислительную модификацию биомолекул (и продукты ОМБ, и продукты ПОЛ), не превышали средние контрольные значения более чем на 20%, то есть у этих больных окислительный стресс не был выявлен (группа «Без ОС»). У других 32 пациентов было констатировано наличие окислительного стресса, причем у 14 из них оба измеряемые показателя (как ОМБ, так и ПОЛ) превышали средние контрольные значения более чем на 20% (группа «ОС по ОМБ и ПОЛ»). У 12 человек только показатель ПОЛ был выше контрольного уровня более чем на 20%. При этом по ОМБ такого превышения не выявлено (группа «ОС по ПОЛ»). У 6 пациентов, напротив, такое превышение зафиксировано только по показателю ОМБ, но не по ПОЛ (группа «ОС по ОМБ»). После проведения антиалкогольного лечения у всех пациентов вновь измерили маркеры ОС в плазме крови, а затем в каждой группе пациентов провели статистическую оценку их динамики за время лечения. Результаты исследования представлены в таблице.

Таблица

Динамика показателей ОМБ и ПОЛ плазмы крови пациентов алкогольной зависимостью в процессе лечения (1-я точка – до лечения, 2-я точка – после лечения, n – количество человек в группе)

Примечание. # – Сравнение контроля и соответствующей точки; * – сравнение значений 1-й и 2-й точек.

Согласно полученным результатам, в общей группе больных при поступлении (1-я точка) измеряемые показатели статистически значимо превышают соответствующие показатели в группе контроля (повышение статистически значимо как для ОМБ, так и для ПОЛ, в обоих случаях р<0,001). После лечения (2-я точка) в общей группе пациентов наблюдается снижение как ОМБ, так и ПОЛ (для обоих параметров различия между 1-й и 2-й точками статистически значимы, р<0,001). При этом значение ПОЛ остается достоверно выше контроля (р=0,013), в то время как для ОМБ различия с контрольными значениями становятся статистически не значимыми (р=0,072). Эти результаты хорошо согласуются с данными литературы.

В частности в ранее опубликованных работах нами было показано, что антиалкогольное лечение больных алкоголизмом с включением антиоксиданта карнозина купирует окислительный стресс [7, 8]. О снижении выраженности ОС в процессе терапии сообщается также и в других работах [4, 9, 20].

В группах пациентов, которые поступили в отделение с окислительным стрессом, в процессе терапии произошли следующие изменения измеряемых показателей (см. таблицу). В группе с ОС по обоим показателям (ПОЛ и ОМБ) произошло снижение как значений ОМБ, так и ПОЛ, однако они и после терапии оставались достоверно выше контроля (р<0,001). В группе с ОС по показателю ПОЛ произошло снижение ПОЛ, при этом и после лечения этот показатель превышал контрольное значение (р=0,041). Показатель ОМБ в этой группе изменился статистически незначимо за время лечения, обнаружив лишь тенденцию к снижению. В группе больных с ОС по ОМБ произошло статистически значимое снижение ОМБ (р=0,043). При этом после лечения этот показатель достоверно не отличался от такового в группе контроля (р=0,508). Показатель ПОЛ в этой группе в 1-й точке статистически значимо не отличался от контроля. За время лечения он практически не изменился.

В группе без ОС измеряемые показатели изменялись в процессе терапии по-иному. Так, до лечения (в 1-й точке) в этой группе как показатель ПОЛ, так и показатель ОМБ достоверно не отличались от такового в группе контроля. За время лечения оба показателя несколько увеличились. При этом показатель ОМБ во 2-й точке достоверно вырос относительно 1-й точки (р=0,03), а увеличение ПОЛ было недостоверным, однако во 2-й точке этот показатель стал достоверно превышать таковой в группе контроля (р=0,031).

ЗАКЮЧЕНИЕ

Таким образом, в процессе антиалкогольной терапии в различных группах пациентов, отличающихся исходным оксидативным статусом, изменение маркеров окислительного стресса происходит разнонаправлено: при отсутствии у больного состояния окислительного стресса за время лечения может произойти его индукция, в то время как при выраженном окислительном стрессе в процессе персонализированной антиоксидантной терапии происходит его купирование.