Физиолого-биохимические показатели крови новорожденных телят при применении натрия нуклеината сухостойным коровам

Поиск новых источников повышения резистентности организма, нормализации обменных процессов и увеличения продуктивности животных остается весьма актуальным в ветеринарной практике. Вопросы иммунобиологического состояния организма новорожденных животных стоят на первом месте в обеспечении оптимального роста и развития их в ранний постнатальный период [3].

С учетом критических периодов в биологическом комплексе «мать-плод-новорожденный» использование иммуномодулирующих и адаптогенных препаратов, в т.ч. препаратов серии Полистим (ПС) и Prevention-NA повышает неспецифическую резистентность, профилактирует гинекологические болезни коров, положительно влияет на плод, т.е улучшает его развитие, а после отела повышает жизнеспособность и сохранность телят [5].

Добавление в основной рацион сухостойным коровам комбикорма, обогащенного экспериментальным 1 % премиксом П60-3/П и энергетическими кормовыми добавками на основе пропиленгликоля и кальциевых солей жирных кислот, приводило к повышению массовой доли белка в молозиве коров опытной группы [8].

Препарат ферорсел, содержащий в составе сукцинат железа с органическим селеном, при применении свиноматкам в последние 30 дней супоросности обеспечивает нормальное течение беременности, профилактирует у полученных поросят железодефицитную анемию и повышает иммунобиологическую реактивность их организма [4].

Выпаивание телятам коралловой воды стимулировало их окислительновосстановительные и гемопоэтические процессы, синтез и функциональную активность ферментов переаминирования, а также направленную изменчивость Mg2+, Na+, K+ - АТФ-аз эритроцитов крови и их общую активность. Происходило повышение количества эритроцитов, базофилов, уровня общего белка, в т.ч. альбуминовой и гамма-глобулиновой фракций, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, общего кальция, неорганического фосфора, фагоцитарной, бактерицидной и лизоцимной активности на 4,9-14,3 % [14].

Ноздрин Г.А., Ноздрин А.Г., Иванова А.Б. и др. (2012) установили, что применение пробиотиков Ветом 2.26 и Ветом 4.24 новорожденным телятам приводит к повышению среднесуточного прироста живой массы [11].

По данным Шуканова Р.А. (2016), назначение боровкам и хрячкам кормовых добавок «Комбиолакс», «Сувар», «Полистим», «Селенопиран», а также «ДАФС-25» оказало благоприятное действие на иммунофизиологическое состояние животных. Комплексное назначение свиньям биогенных соединений с учетом агропочвенных особенностей различных регионов обусловливает активизацию окислительновосстановительных процессов, усиление гемопоэтической функции, нормализацию биологического равновесия между активностью прооксидантной и противооксидантной систем, а также заметный ростостимулирующий эффект организма [14].

Ранее в проведенных исследованиях изучено влияние полиоксидония, тимогена, ронколейкина, синэстрола 2 % на состояние иммунной системы и неспецифической резистентности новорожденных телят в период после выпаивания молозива [1, 2].

Цель работы оценить физиологобиохимические показатели крови новорожденных телят до и после кормления молозивом при применении натрия нуклеината глубокостельным коровам за 3-9 дней перед отелом.

Нуклеиновые соли ДНК и РНК выполняют функции хранения, передачи и реализации генетической информации. Однако данные соединения также обладают биодинамическими эффектами, в том числе – воздействуют на различные звенья иммунной системы, на клетки с расстроенным метаболизмом [16].

Натрия нуклеинат – лекарственное средство природного происхождения. Оно состоит из низкомолекулярных фрагментов натриевой соли дрожжевой рибонуклеиновой кислоты, получаемой из грибов Saccharomyces cerevisiae. Натрия нуклеинат применяют для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, для устранения последствий стрессовых состояний. Натрия нуклеинат обладает широким спектром биологической активности, ускоряет процессы регенерации, стимулирует факторы естественной резистентности, лейкопоэз, миграцию и кооперацию Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарную активность макрофагов и нейтрофилов. Препарат повышает антиинфекционную резистентность организма, как при профилактическом, так и при терапевтическом применении, обладает антитоксическим действием. Ускоряет формирование поствакцинального иммунитета, повышая его напряженность и продолжительность. Увеличивает иммунологическую эффективность вакцинных препаратов, повышает протективные свойства сыворотки крови и устойчивость иммунизированных животных к заражению патогенными микроорганизмами. Натрия нуклеинат повышает содержание лизоцима, пропердина, β-лизина, уровень нормальных антител, индуцирует синтез интерферона [7].

Материал и методы исследований . Научно-хозяйственный опыт выполнен в осенне-зимний период 2020 года на молочно-товарной ферме сельскохозяйственного производственного кооператива «Нижегородец» Нижегородской области. Объектами исследования были 10 глубокостельных коров чёрно-пёстрой породы, отобранные по принципу парных аналогов, которые были разделены на 2 группы (контрольная и опытная) по 5 животных в каждой, и полученные от них новорождённые телята. Коровам опытной группы за 3-9 дней перед отёлом вводили 0,2 % водный раствор натрия нуклеината в дозе 5 мл внутримышечно, однократно. Коровам контрольной группы вводили 0,9 % раствор хлорида натрия в дозе 5 мл внутримышечно, однократно.

Новорождённому теленку, сразу после появления сосательного рефлекса, выпаивали молозиво, полученное от его коровы-матери. Телята с 2-дневного возраста содержались вне помещений – в боксах-домиках («холодный метод выращивания»). Проводилось клиническое наблюдение за подопытными животными.

Пробы крови у новорожденных телят брали из ярёмной вены три раза: до кормления молозивом, через час после кормления и на 2-е сутки жизни (до кормления).

Исследования крови проводили с применением следующих методов:

– общий анализ крови (определение уровня гемоглобина, гематокрита, СОЭ, подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов) на гематологическом анализаторе HTI Micro-CC-20 Plus, USA;

– выведение лейкоцитарной формулы путем подсчёта в мазках крови лейкоцитов разных видов, окрашенных по Романовскому-Гимза;

• –    определение общего белка на анализаторе ICUBIO iMagic-V7;

• –    определение белковых фракций крови (альбумин, α-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины) на анализаторе Minicap, Sebia;

  – содержание Т-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и В-лимфоцитов – методом розеткообразования с эритроцитами быка в системе ЕАС-РОК (В.Г. Скопичев, Н.Н. Максимюк, 2009).

Полученный экспериментальный материал обработан методом вариационной статистики по Стентону Гланцу (1999), с помощью сервисных программ и статистических функций программы MicrosoftExcel операционной системы Windows 7. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента. Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения P≤0,05.

Анализы выполнялись на кафедре «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» ФГБОУ ВО Нижегородская ГСХА, лаборатории «Гемохелп» г. Нижний Новгород.

Результат исследований .

Полученные в эксперименте данные показали, что содержание эритроцитов (таблица 1) у телят контрольной и опытной групп до выпаивания молозива составило соответственно 6,72±0,36 и 6,99±0,41х1012/л и повышалось в первые часы жизни до 7,33±0,34 и 7,57±0,41х1012/л. На вторые сутки содержание эритроцитов у телят контрольной и опытной групп снизилось до 7,02±0,23 и 6,44±0,49х1012/л. Содержание эритроцитов у телят подопытных групп было выше в первые часы жизни, чем на вторые сутки.

Уровень гемоглобина у телят контрольной и опытной группы до выпаивания молозива составил соответственно 99,2±1,98 и 105,8±2,85 г/л, через один час после кормления уровень гемоглобина повышался соответственно до 106,4±1,29 и 112,6±2,01 г/л. На вторые сутки жизни уровень гемоглобина у телят контрольной и опытной групп понизился до 87,4±1,69 и 86,8±7,08 г/л. Уровень гемоглобина у телят подопытных групп был выше в первые часы жизни чем на вторые сутки. Достоверной разницы по этому показателю у телят контрольной и опытной групп не было выявлено.

Цветной показатель (ЦП) отражает относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. Установлено, что у новорожденных телят контрольной и опытной групп до кормления молозивом ЦП был соответственно равен 0,88 и 0,9; через один час после кормления молозивом – 0,87 и 0,89; на вторые сутки жизни – 0,74 и 0,8, т.е. за период наблюдения за подопытными животными содержание гемоглобина в их эритроцитах понижалось. Видимо, это связано с переходом организма новорожденных на легочное дыхание. До рождения газообмен у плода происходит посредством плаценты, двух пупочных артерий и пупочной вены. Кислород захватывается эритроцитами плода только в ворсинах плаценты, поэтому степень насыщения фетальной крови кислородом ниже, чем у взрослых животных. В связи с особенностями работы системы кровообращения и газообмена эритроциты плода содержат фетальный гемоглобин, который имеет более высокое сродство к кислороду по сравнению с гемоглобином взрослых животных. После рождения легкие плода расправляются, происходит морфофункциональная перестройка сердечнососудистой системы, новорожденные получают больше кислорода, чем во внутриутробный период, их организм не приспособлен к высокому поступлению кислорода. Поэтому на вторые сутки жизни происходит снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов. К подобному выводу пришли Стрижиков В.К. и Сытько В.В. (2014) при изучении динамики содержания эритроцитов и гемоглобина у новорожденных поросят [13].

При распаде эритроцитов гемоглобин связывается белком гаптоглобином (фракция альфа-глобулинов). При разрушении гемоглобина порфириновые кольца окисляются с образованием желчных пигментов, освобождающееся железо превращается в окисную форму, после чего связывается с белком переносчиком - трансферрином (фракция бета-глобулинов) и транспортируется в красный костный мозг для образования нового гемоглобина или запасается в печени, селезенке в виде ферритина.

По данным литературы, молозиво коров содержит много легкоусвояемого железа, в молоке его существенно меньше. У взрослых клинически здоровых животных при нормальном рационе железо усваивается из рациона на 5-10 %, при повышенном эритропоэзе, истощении запасов железа в организме усвояемость железа повышается до 15-20 %. Молодняк усваивает железо из молока на 15-25 % [6].

Количество лейкоцитов у новорожденных телят контрольной и опытной групп до выпаивания молозива было понижено и составило 6,7±0,41 и 7,38±0,66х109/л, достоверных различий не было. Через один час после выпаивания молозива количество лейкоцитов у телят контрольной и опытной групп повысилось до 7,48±0,2 и 8,32±0,1х109/л соответственно, причем, у телят опытной группы их было больше на 11,2 % (P<0,05), на вторые сутки жизни количество лейкоцитов продолжало повышаться и составило соответственно 7,74±0,54 и 9,7±0,38х109/л, в это время их было больше у телят опытной группы на 25,3 % (P<0,05).

Повышение количества эритроцитов и лейкоцитов в венозной крови у подопытных телят в первые часы жизни происходило под действием повышенного уровня катехоламинов, в т.ч. адреналина, гормона мозгового вещества надпочечников, в ответ на резко меняющиеся условия жизни телят при рождении.

По данным Кузнецова А.И., Васильевой Т.А. (2019), при действии дозированного стрессового раздражителя на организм стрессчувствительных животных происходило повышение количества эритроцитов, лейкоцитов, уровня гематокрита [9].

Эозинофилы служат одним из показателей адаптации организма. Количество эозинофилов в крови подопытных животных со временем возрастало. На 2-е сутки жизни их было больше у животных опытной группы.

Относительное количество палочкоядерных нейтрофилов у животных опытной группы до и после выпойки молозива было меньше на 15,8 и 16 %. Количество сегментоядерных нейтрофилов было сходным. На 2-е сутки жизни относительное количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов у телят опытной группы было меньше соответственно на 22 и 13 %.

Абсолютное количество нейтрофилов в крови телят исследуемых групп возрастало в первые сутки жизни. До выпойки и через час после поения молозивом содержание нейтрофилов у опытных телят составило 3,98±0,4 и 4,11±0,3х109/л, что было выше на 8,45 и 5,93 % по сравнению с контролем. На вторые сутки жизни данный показатель у телят опытной группы превышал контрольных животных на 7,1 %.

Моноцитов в крови новорожденных телят было мало. По мере роста и развития их количество незначительно увеличивалось.

Относительное количество лимфоцитов у подопытных телят до и через час после кормления молозивом было сходным, затем на вторые сутки жизни их было больше у телят опытной группы на 13,6 %. Отчасти, повышение количества лимфоцитов в крови новорожденных телят может происходить за счет лимфоцитов молозива.

Скопичев В.Г. и Панова Н.А. (2019) в опытах на новорожденных мышатах самцах установили присутствие лимфоцитов с тельцами Barra в их крови и костном мозге после выпаивания материнского молозива. Таким образом осуществляется передача иммунитета не только пассивно, но и закладывается фундамент для нормального функционирования иммунной системы новорожденного мышонка-самца в дальнейшем [12]. Также есть данные о количестве лейкоцитов с тельцами Barra в      материнским молозивом, их количество крови бычков после кормления      составило 9 % от всех лейкоцитов [10].

Таблица 1 - Морфологические показатели крови новорожденных телят после применения Натрия нуклеината (M±m, n=5) Показатель Группа До выпойки молозива Через 1 час после выпойки молозива На 2 сутки жизни Гемоглобин, г/л Контрольная 99,2±1,98 106,4±1,29 87,4±1,69 Опытная 105,8±2,85 112,6±2,01 86,8±7,08 Эритроциты, х1012/л Контрольная 6,72±0,36 7,33±0,34 7,02±0,23 Опытная 6,99±0,41 7,57±0,41 6,44±0,49 Лейкоциты, х109/л Контрольная 6,7±0,41 7,48±0,2 7,74±0,54 Опытная 7,38±0,66 8,32±0,1* 9,7±0,38* Лейкоцитарная формула, % Эозинофилы Контрольная 0,6±0,24 0,8±0,2 0,6±0,24 Опытная 0,2±0,2 0,6±0,24 1,0±0,2 Базофилы Контрольная 0±0 0±0 0±0 Опытная 0±0 0±0 0±0 Палочкоядерные нейтрофилы Контрольная 3,8±0,73 5,0±0,7 8,2±0,37 Опытная 3,2±0,37 4,2±0,37 6,4±0,6 Сегментоядерные нейтрофилы Контрольная 51±0,95 46,8±0,92 42,8±0,8 Опытная 50,6±0,93 45,2±0,86 37,2±0,96 Нейтрофилы, х109/л Контрольная 3,67±0,22 3,88±0,32 3,94±0,3 Опытная 3,98±0,4 4,11±0,35 4,22±0,14 Моноциты Контрольная 1,6±0,93 2,8±0,2 1,4±0,24 Опытная 0,8±0,2 2,4±0,4 2,0±0,31 Лимфоциты Контрольная 43±1,22 44,8±0,8 47,0±0,7 Опытная 45,2±0,8 47,6±0,81 53,4±0,5 Лимфоциты, х109/л Контрольная 2,87±0,14 3,35±0,28 3,62±0,23 Опытная 3,32±0,26 3,95±0,3 5,18±0,22 Лимфоциты/сегментоядер ные нейтрофилы Контрольная 0,85±0,04 0,96±0,03 1,09±0,03 Опытная 0,9±0,03 1,06±0,03 1,43±0,05 Нейтрофилы/лимфоциты Контрольная 1,28±0,05 1,16±0,03 1,08±0,02 Опытная 1,19±0,04 1,04±0,03 0,79±0,02 Т-клетки, % Контрольная 53,6±0,5 55,4±0,68 57,0±0,7 Опытная 56,4±0,4* 57,8±0,37* 63,0±0,7* Т-клетки, х109/л Контрольная 1,54±0,08 1,86±0,16 2,05±0,15 Опытная 1,88±0,15* 2,29±0,18* 3,26±0,1* В-клетки, % Контрольная 17,6±0,5 19,2±0,49 22,4±0,81 Опытная 17,2±0,58 18,4±0,6 20,0±1,04 В-клетки, х109/л Контрольная 0,51±0,04 0,65±0,06 0,81±0,07 Опытная 0,57±0,05 0,73±0,07 1,03±0,08 Примечание:* - Р < 0,05 по парному критерию по сравнению с контролем Индекс               лимфоциты/      соответственно на 5,88; 10,42 и 31,2 %, чем сегментоядерные  нейтрофилы у телят      в контрольной группе. опытной группы до, после приема молозива           Количество   Т-лимфоцитов   у и на 2-е сутки жизни оказался выше     животных контрольной и опытной групп увеличивалось на протяжении всего периода исследований. Относительное и абсолютное их содержание было выше у телят опытной группы во все периоды исследования соответственно на 4,3-10,5 % и 22-59 %.

Количество В-лимфоцитов у животных контрольной и опытной групп с возрастом повышалось. Относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов крови было сходным у телят контрольной и опытной групп. Выявленные изменения в лейкоцитарной формуле, влияние на клеточный иммунитет и ускорение пролиферации Т-лимфоцитов свидетельствуют о стимуляции иммунной системы организма новорожденных телят после применения Натрия нуклеината стельным коровам за 3–9 суток перед отелом.

Таблица 2 – Биохимические показатели крови новорожденных телят после применения

Натрия нуклеината (M±m, n=5)

Показатель	Группа	До выпойки молозива	Через 1 час после выпойки молозива	На 2 сутки жизни
Общий белок, г/л	Контрольная	42,02±1,31	42,34±0,79	62,36±0,58
	Опытная	41,78±0,31	43,7±0,41	73,6±2,58*
Альбумины, г/л	Контрольная	18,92±0,89	19,32±0,65	21,38±0,42
	Опытная	19,12±0,24	19,76±0,17	24,92±1,07*
α-глобулины, г/л	Контрольная	18,5±0,62	17,68±0,58	18,78±0,93
	Опытная	18,26±0,36	17,72±0,35	17,4±1,02
β-глобулины, г/л	Контрольная	3,72±0,18	3,96±0,24	5,8±0,37
	Опытная	3,48±0,19	4,12±0,13	6,1±0,49
γ-глобулины, г/л	Контрольная	0,88±0,11	1,38±0,25	16,4±0,97
	Опытная	0,92±0,11	2,1±0,36*	25,18±2,43*
Мочевина, ммоль/л	Контрольная	3,34±0,14	3,45±0,13	3,54±0,15
	Опытная	3,39±0,11	3,66±0,1	3,79±0,09
Глюкоза, ммоль/л	Контрольная	4,4±0,11	4,8±0,11	3,8±0,09
	Опытная	4,5±0,12	4,9±0,14	3,6±0,1

Примечание:* – Р<0,05 по парному критерию по сравнению с контролем

При изучении биохимических показателей выявлено, что у телят контрольной группы до первой выпойки молозива концентрация общего белка находилась в пределах 42,02±1,31, у телят опытной группы 41,78±0,31 г/л. После приема молозива содержание общего белка в крови животных исследуемых групп увеличивается, но у опытных телят этот показатель был выше на 3,21 %. На 2-е сутки жизни у телят опытной группы отмечали повышение уровня общего белка крови на 18 % (Р<0,05) в основном за счет фракции гамма-глобулинов и альбуминов. Глобулины служат источником иммунных тел, альбумины выполняют пластическую роль.

Уровень альбуминов до выпойки молозива у телят контрольной и опытной групп составил 18,92±0,89 и 19,12±0,24 г/л соответственно. После приема молозива их количество увеличилось и показатель в опытной группе превышал контрольных аналогов на 2,3 %. На 2-е сутки жизни у телят исследуемых групп уровень альбуминов значительно возрастает, у телят опытной группы достоверно был выше на 16,5 % по сравнению с контрольной (Р<0,05).

Содержание альфа-глобулинов крови телят контрольной группы в первые дни жизни варьировало в узком диапазоне от 17,68±0,58 до 18,78±0,93 г/л, а у телят опытной группы несколько понижалось с 18,26±0,36 до 17,4±1,02 г/л и на уровне тенденции было ниже на 4,7% по сравнению с контрольной группой (P>0,05).

Фракция альфа-глобулинов не однородна и включает альфа-1-глобулины и альфа-2-глобулины. Основными белками фракции альфа-1-глобулинов являются альфа-1-антитрипсин, альфа-1-липопротеин, альфа-1-кислый гликопротеин. Это белки острой фазы воспаления, они могут отражать как уровень антигенной нагрузки на организм, так и состояние здоровья. Во фракцию альфа-2-глобулинов входят альфа-2-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобин, эритропоэтин, которые ответственны за эритропоэз, обмен гемоглобина, динамику концентрации свободных радикалов кислорода.

Содержание бета-глобулинов в крови у телят контрольной и опытной групп до выпойки молозива было низким и составило соответственно 3,72±0,18 и 3,48±0,19 г/л, со временем постепенно повышалось и составило на 2-е сутки жизни соответственно 5,8±0,37 и 6,1± 0,49 г/л. Достоверные различия между телятами контрольной и опытной групп отсутствовали.

Фракция бета-глобулинов делится на бета-1-глобулины и бета-2-глобулины. Бета-1-глобулины включают в себя трансферрин, гемопексин, компоненты комплемента. Основную часть бета-2-глобулиновой фракции составляет бета-липопротеин.

До кормления теленка молозивом уровень гамма-глобулинов был незначительным, так как плод находился в стерильных условиях - в матке, также плацента крупного рогатого скота при нормально протекающей стельности непроницаема для материнских иммуноглобулинов. После выпаивания молозива уровень гамма-глобулинов повышался у подопытных телят, при этом наблюдался более интенсивный рост у телят опытной группы, что говорит об усилении всасывания иммуноглобулинов молозива в желудочно-кишечном тракте. Содержание гамма-глобулинов крови телят опытной группы через час после выпаивания молозива и на 2-е сутки жизни было больше соответственно на 52,1 и 53,5 % (Р<0,05).

Уровень мочевины у подопытных телят постепенно повышался и на уровне тенденции был выше у телят опытной группы через час после выпаивания молозива и на 2-е сутки жизни соответственно на 6,0 и 7,0 %. Содержание глюкозы было повышено в первые часы жизни у подопытных телят, а на 2-е сутки понижалось. Достоверных различий между животными контрольной и опытной группы не было.

Заключение . Таким образом применение коровам до отела натрия нуклеината в дозе 5 мл внутримышечно приводит к достоверному повышению количества лейкоцитов на 11,2-25,3 %, нейтрофилов и лимфоцитов, относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов, общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов у новорожденных телят через час после выпаивания молозива и на вторые сутки жизни, что свидетельствует об усилении работы иммунной системы. Телята опытной группы были более крепкими и активными, у них быстрее реализовалась уверенная поза стояния и возникал сосательный рефлекс.

Резюме

Цель работы – оценить физиолого-биохимические показатели крови новорожденных телят до и после кормления молозивом при применении натрия нуклеината глубокостельным коровам за 3-9 дней перед отелом. Научно-хозяйственный опыт выполнен в осенне-зимний период на молочно-товарной ферме сельскохозяйственного производственного кооператива «Нижегородец» Нижегородской области. Объектами исследования были 10 глубокостельных коров чёрно-пёстрой породы, отобранные по принципу парных аналогов, которые были разделены на 2 группы (контрольная и опытная) по 5 животных в каждой, и полученные от них новорождённые телята. Коровам опытной группы за 3-9 дней перед отёлом вводили 0,2 % водный раствор нуклеината натрия в дозе 5 мл внутримышечно, однократно. Коровам контрольной группы вводили 0,9 % раствор хлорида натрия. Натрия нуклеинат – иммуномодулирующий препарат, содержащий смесь натриевых солей нуклеиновых кислот, получаемую из монокультуры пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae путём гидролиза биомассы и дальнейшей её очистки. Применение коровам до отела натрия нуклеината внутримышечно в дозе 5 мл приводит к достоверному повышению количества лейкоцитов на 11,2-25,3 %, нейтрофилов и лимфоцитов, относительного и абсолютного количества      Т- лимфоцитов, общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов у полученных новорожденных телят через час после выпаивания молозива и на вторые сутки жизни.