Физиолого- биохимические и морфологические показатели крови новорожденных телят после применения риботана глубокостельным коровам

Поиск новых источников повышения резистентности организма, нормализации обменных процессов и увеличения продуктивности животных остается весьма актуальным в ветеринарной практике. Вопросы иммунобиологического состояния организма новорожденных животных стоят на первом месте в обеспечении оптимального роста и развития их в ранний постнатальный период.

Стимуляция защитных механизмов организма и поддержание на высоком уровне резистентности животных к инфекционным заболеваниям и другим неблагоприятным факторам окружающей среды в критические периоды онтогенеза остаются важнейшими задачами современного животноводства. С целью повышения колострального иммунитета, естественной резистентности и сохранности молодняка крупного рогатого скота изучено множество препаратов [3, 4, 11, 12].

Алексеев И.А., Волков А.М., Кадиков И.Р. (2015) изучали естественную резистентность телят при использовании пробиотического препарата Споробактерина в дозе 1,5 мл. Препарат давали телятам с первых суток жизни до 30-суточного возраста. Авторами установлено улучшение морфологического и биохимического состава крови телят. Повышалось количество эритроцитов, гемоглобина, лимфоцитов, в т.ч. Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной активности на 7,16%, гамма-глобулинов на 10,8% [2].

Позов С.А., Порублев В.А., Родин В.В., Орлова Н.Е. (2015) изучали влияние микроэлементов солей меди, йода и кобальта на продуктивность животных и резистентность телят. Микроэлементы давали с кормом телятам или вводили в рацион стельных коров. Авторами установлено, что введение в рацион стельных коров силоса, обогащенного этими микроэлементами, положительно влияло на новорожденных телят и молочную продуктивность коров. Отмечено повышение фагоцитарной активности и фагоцитарного индекса у телят на 45 и 60 сутки, соответственно на 29,0 и 9,89 %; 27,3 и 13,5 %. Также была выше бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови, повышалось количество лейкоцитов, уровень общего белка и гамма-глобулинов [8].

Яковлев Г.А., Шуканов А.А. (2013) изучали корригирующее действие препаратов «Седимин-Se+» и «Трепел» на клинико-физиологическое состояние, рост тела, естественную резистентность и обмен веществ у бычков в возрастном аспекте. Бычкам второй группы ежедневно скармливали трепел с 90-суточного возраста, бычкам третьей группы – внутримышечно вводили «Седимин-Se+» и с 90-суточного возраста скармливали трепел. У опытных бычков в конце периода выращивания, доращивания и откорма отмечено повышение количества эритроцитов, лейкоцитов, уровня гемоглобина, АБОК, содержания общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов, иммуноглобулинов на 2,9-45,6 % (P<0,05) [13].

Семенов В.Г., Петрянкин Ф.П., Яковлев С.Г., Анин А.Н. (2009); Семенов В.Г., Герасимова Н.И. (2015) проводили изучение влияния препаратов серии PS-1, PS-2, Prevention-N-A на физиологическое состояние, морфологический и биохимический профили крови, неспецифическую резистентность организма в биологической цепи «корова – теленок – молодняк». Авторами установлено повышение количества эритроцитов, уровня гемоглобина, показателей неспецифической резистентности, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов [6, 10].

Смоленцев С.Ю., Папуниди Э.К. (2017) изучали влияние иммуностимуляторов миксоферон, иммуноферон и гамавит на иммунитет новорожденных телят. Авторами установлено повышение у телят опытных групп иммуноглобулинов классов A, M, G, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарного числа и индекса. Происходило повышение относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов [9].

В ветеринарной медицине используется иммуномодулирующий препарат Риботан, который в качестве действующего вещества содержит смесь низкомолекулярных пептидов и фрагментов дрожжевой РНК [7].

Целью исследования стало изучение влияния риботана на морфологические и биохимические показатели крови новорожденных телят после его парентерального введения глубокостельным коровам, а также на образование и накопление в молочной железе коров иммуноглобулинов и выделение их в составе молозива.

Материал и методы исследований. Научно-хозяйственный опыт выполнен в осенне-зимний период на молочнотоварной ферме сельскохозяйственного производственного кооператива «Нижегородец» Нижегородской области.

Опыты проводились на физиологически здоровых коровах и телятах. Животные отбирались по принципу пар аналогов с учетом породности, живой массы, возраста, продуктивности и клиникофизиологического состояния. Десять глубокостельных коров черно-пестрой породы были разделены на 2 группы – контрольную и опытную по 5 животных в каждой, от которых получили соответствующее количество новорожденных телят. Глубокостельным коровам опытной группы внутримышечно вводили препарат «Риботан» в дозе 5 мл на животное, за 3-9 дней до отела, однократно. Коровам контрольной группы вводили 0,9 % раствор Натрия хлорида. Новорожденные телята распределялись в соответствующие коровам-матерям группы. Телятам исследуемых групп выпаивали молозиво, полученное от их коров-матерей не позднее 30–40 минут после рождения.

На молочно-товарной ферме применяется «холодный метод выращивания», поэтому телята с 2-дневного возраста содержались вне помещений – в боксах-домиках. Проводилось клиническое наблюдение за подопытными животными.

Пробы крови для исследования морфологического и биохимического состава у телят брали из яремной вены на 2-е и 10-е сутки жизни. Качество молозива коров контрольной и опытной групп оценивали по уровню общих иммуноглобулинов и титруемой кислотности. Отбиралась средняя проба молозива объемом 100 мл из 1, 2, 3, 4 и 5-го удоя.

Общий анализ крови (определение уровня гемоглобина, подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов) проводился на гематологическом анализаторе HTI Micro-CC-20 Plus, USA. Лейкоцитарную формулу выводили путем подсчёта лейкоцитов разных видов в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза.

Содержание Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и В-лимфоцитов – методом розеткообразования с эритроцитами быка в системе ЕАС-РОК (В.Г. Скопичев, Н.Н. Максимюк, 2009).

С помощью автоматического биохимического анализатора ICUBIO iMagic-V7 определяли общее количество белка. Для определения белковых фракций крови (альбумин, α-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины) применялся анализатор Minicap, Sebia. Титруемую кислотность молозива по Тернеру и содержание иммунных глобулинов (Ig) в молозиве (молоке) с натрия сульфитом определяли по методике, изложенной в справочнике И.П. Кондрахина (И.П. Кондрахин и соавт., 2004). Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом; определение глюкозы в крови по цветной реакции с ортотолуидином (И.П. Кондрахин и соавт., 2004).Цифровые данные, полученные в ходе эксперимента, обрабатывались статистическим методом (Н.А. Плохинский, 1967) на персональном компьютере с установленным пакетом программ Microsoft Excel 2007. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента. Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения P≤0,05. Исследования отобранного материала выполнялись на кафедре «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни», в межкафедральной лаборатории ФГБОУ ВО Нижегородская ГСХА и на базе лаборатории «Гемохелп» г. Нижнего Новгорода.

Получено решение о выдаче патента Российской Федерации на изобретение от 13.12.2021 г. по заявке № 2021109981.

Результат исследований . В ходе эксперимента от клинически-здоровых коров исследуемых групп было получено молозиво хорошего качества. Уровень иммуноглобулинов и титруемая кислотность были максимальными в молозиве первого удоя и с каждым доением постепенно снижались, но в течение всего периода исследований были более высокими у коров опытной группы (Таблица 1). Установлено, что молозиво 1-го и 2-го удоя коров опытной группы содержало большее количество иммуноглобулинов соответственно на 30,9 и 15,9 % по сравнению с контрольной группой, что, видимо, говорит о повышении образования этих белков в организме, вследствие усиления иммунореактивности под действием риботана. Титруемая кислотность была высокой, значения находились в пределах физиологической нормы. Титруемая кислотность молозива 1-го и 2-го удоя коров опытной группы была выше соответственно на 13,8 и 10 %. Этот показатель обусловлен в основном кислотным характером казеина, которого в молозиве коров опытной группы, видимо, было больше.

Таблица 1 – Содержание иммуноглобулинов в молозиве, титруемая кислотность молозива подопытных коров, M±m, n=5

Показатель                     \	Контрольная группа    \	Опытная группа
Иммуноглобулины, г/л
1 удой	58,2±1,68	76,2±1,32*
2 удой	31,44±1,01	36,44±0,79*
3 удой	14,8±0,47	15,12±0,55
4 удой	11,08±0,4	11,48±0,49
5 удой	8,64±0,23	9,38±0,33
Титруемая кислотность, °Т
1 удой	41,8±0,66	47,6±1,16*
2 удой	31,8±0,66	35,0±0,7*
3 удой	30,0±0,7	28,6±1,16
4 удой	27,0±0,7	24,2±1,11
5 удой	22,8±0,86	21,2±1,15

Примечание: здесь и далее в таблицах * – Р<0,05 по парному критерию при сравнении с контролем

Количество эритроцитов и уровень гемоглобина у телят контрольной и опытной групп были сходными между собой на вторые и десятые сутки жизни.

Результаты, полученные в ходе исследования, показали, что у телят опытной группы через сутки после рождения наблюдалось большее количество лейкоцитов на 69 % по сравнению с контрольной группой. С возрастом данный показатель у животных исследуемых групп увеличился, при этом количество лейкоцитов на 10-е сутки жизни было больше у опытных телят на 42 % по сравнению с контролем (Р<0,05) (Таблица 2).

Полученные лейкограммы крови телят позволили определить тип развивающихся адаптационных реакций у новорожденных телят по процентному содержанию лимфоцитов и их соотношению к сегментоядерным нейтрофилам. Остальные форменные элементы крови и общее число лейкоцитов, являлись лишь дополнительными признаками реакций, свидетельствующими о степени их полноценности, напряженности (Л.Х. Гаркави и др., 1982, 1990). На вторые сутки жизни у подопытных телят отмечали реакцию тренировки.

Таблица 2 – Морфологические показатели крови подопытных телят, M±m, n=5

Показатель	На 2 сутки жизни		На 10 сутки жизни
	контрольная группа	опытная группа	контрольная группа	опытная группа
Эритроциты, млн./мкл	6,85±0,23	6,61±0,25	6,21±0,21	5,62±0,07
Лейкоциты, тыс./ мкл	7,10±0,39	12,0±0,15*	8,52±0,10	12,1±0,13*
Лейкоформула, %
Эозинофилы	1,6±0,5	1,0±0,4	0,6±0,2	0,8±0,3
Базофилы	0	0	0,2±0,2	0,4±0,2
Палочкоядерные нейтрофилы	6,8±0,5	5,6±0,4	5,8±0,2	4,6±0,4
Сегментоядерные нейтрофилы	38,8±0,5	45,0±0,4	44,8±0,6	43,0±0,4
Нейтрофилы, тыс./мкл	3,23±0,17	6,07±0,09	4,31±0,11	5,76±0,10
Моноциты	2,6±0,2	2,0±0,6	3,0±0,4	2,6±0,4
Лимфоциты	50,2±0,9	46,4±0,5	45,6±0,5	48,6±0,4
Лимфоциты, тыс./мкл	3,57±0,24	5,54±0,07	3,86±0,08	5,88±0,06
Лимфоциты/сегментоядерные нейтрофилы	1,29±0,04	1,02±0,03	1,0±0,03	1,12±0,02
Нейтрофилы/лимфоциты	0,90±0,03	1,1±0,03	1,1±0,02	0,97±0,02

Таблица 3 – Содержание T- и B-лимфоцитов в крови подопытных телят, M±m, n=5

Показатель	На 2 сутки жизни		На 10 сутки жизни
	контрольная группа	опытная группа	контрольная группа	опытная группа
Т-клетки, %	61,0±0,44	68,0±1,3	62,4±0,5	64,4±0,6
тыс./мкл	2,17±0,15	3,75±0,07	2,4±0,06	3,78±0,03
В-клетки, %	19,2±0,37	17,0±1,41	23,4±0,24	19,6±0,5
В-клетки, тыс./мкл	0,67±0,05	0,92±0,04	0,89±0,02	1,13±0,03

Адаптация организма к условиям внешней среды быстрее проходила у телят опытной группы, о чем говорит повышение на 12 % индекса лимфоциты/сегментоядерные нейтрофилы на 10-е сутки жизни

Абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов на 2-е сутки жизни повысилось у телят опытной группы соответственно на 72,8 и 11,4 %. Относительное количество B-лимфоцитов в крови опытных телят было ниже чем у контрольных на 11,4 % через сутки после рождения, а абсолютное количество было более высоким. Через 10 суток относительное количество Т-лимфоцитов у телят опытной группы было сходным с контролем, а абсолютное количество было выше на 57,5 %. Относительное количество В-лимфоцитов у опытных телят было ниже, а абсолютное повышено. Таким образом, применение препарата «Риботан»

глубокостельным коровам за 3-9 дней до отела оказывает влияние на клеточный иммунитет и ускоряет пролиферацию Т-лимфоцитов у полученных новорожденных телят.

Таблица 4 – Иммунобиохимические показатели крови подопытных телят, M±m, n=5

Показатель	На 2 сутки жизни		На 10 сутки жизни
	контрольная группа	опытная группа	контрольная группа	опытная группа
Общий белок, г/л	59,76±0,61	71,98±0,41*	57,86±0,50	68,42±2,04*
Альбумины, г/л	21,25±0,63	22,3±0,34	22,64±0,67	24,8±0,46*
α-глобулины, г/л	18,56±0,59	18,74±0,47	15,18±0,32	15,62±0,60
β-глобулины, г/л	5,34±0,40	6,96±0,16*	7,86±0,68	8,74±0,48
γ-глобулины, г/л	14,38±0,73	23,98±0,53*	12,16±0,47	19,26±1,54*
Гемоглобин, г/л	84,6±1,3	87,0±1,3	85,4±1,6	85,8±0,8
Мочевина, ммоль/л	3,41±0,15	3,63±0,1	3,52±0,16	3,73±0,18
Глюкоза, ммоль/л	4,4±0,14	4,8±0,07	4,6±0,15	4,8±0,1

Белковый состав плазмы крови взаимосвязан с физиологическим состоянием и резистентностью организма, а также играет важную роль в метаболических процессах. Так уровень общего белка в крови является высокоинформативным показателем, характеризующим гомеостатическое состояние организма. Установлено, что на 2-е сутки жизни у телят опытной группы был выше уровень общего белка сыворотки крови на 20,4 %, в большей степени за счет гамма-глобулинов и бета-глобулинов, их уровень был выше соответственно на 66,7 и 30,3 % (Р<0,05).

У телят опытной группы в течение десяти суток после рождения отмечалась тенденция к повышению уровней мочевины и глюкозы в крови, что может говорить о более интенсивном белковом и углеводном обмене (Р>0,05).

Фракция гамма-глобулинов включает в себя иммуноглобулины различных классов. Основными в сыворотке крови телят являются иммуноглобулины классов A, M, G. Это полифункциональные белки, которые специфически распознают разнообразные антигены и гаптены, взаимодействуют с другими иммунокомпетентными клетками, имеющими к ним рецепторы, активируют систему комплемента, обезвреживают антигены. Повышение количества гамма- глобулинов в сыворотке крови телят опытной группы связано с их большим поступлением с молозивом. Поэтому, инъецированный стельным коровам за 3-9 дней до отела препарат «Риботан» способствует повышению уровня колострального иммунитета у полученных от них телят.

Основными белками фракции бета-глобулинов являются трансферрин, обеспечивающий транспорт железа; гемопексин, белок, связывающий гем и предотвращающий потерю железа через выделительную систему; компоненты комплимента и бета-липопротеиды, участвующие в транспорте холестерина.

Альбумины обеспечивают транспорт продуктов метаболизма, после предварительного гидролиза освобождают аминокислоты, которые принимают участие в синтезе специфических белков. Поэтому повышенное содержание этой фракции белка напрямую связано с продуктивностью и ростом телят.

На 10-е сутки жизни уровень общего белка у телят подопытных групп незначительно снизился за счет фракции альфа- и гамма-глобулинов, уровень бета-глобулинов и альбумина с возрастом незначительно повысился. Концентрация общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов была выше у телят опытной группы соответственно на 18,2; 9,5 и 58,3 %

(Р<0,05).

Заключение . Применение риботана в дозе 5 мл коровам в предотельный период способствовало накоплению в молочной железе иммуноглобулинов и выделению их с молозивом. В молозиве первого и второго удоя коров опытной группы их концентрация была выше соответственно на 30,9 и 15,9 % по сравнению с контролем, при этом не исключается образование в организме, накопление и выделение других факторов иммунитета. После выкармливания такого молозива у телят, полученных от коров опытной группы, в крови повысилось количество лейкоцитов, при этом на вторые сутки жизни было больше сегментоядерных нейтрофилов, а на десятые - происходило повышение лимфоцитов. Уровень общего белка был выше на вторые и десятые сутки жизни соответственно на 20,4 и 18,2 % в основном за счет фракции гамма-глобулинов, концентрация которых также была выше в это время соответственно на 66,7 и 58,3 %.

Резюме

Особенности деятельности органов и систем у новорожденных животных определяются степенью их функциональной зрелости в ранний постнатальный период онтогенеза. Рождение резистентного потомства и получение молозива с высоким уровнем иммуноглобулинов и их широкой противомикробной специфичностью является одной из приоритетных задач в современном животноводстве. Целью исследования стало изучение влияния риботана, инъецированного коровам в предотельный период в дозе 5 мл, на морфологические и биохимические показатели крови новорожденных телят. Работа выполнена на базе СПК «Нижегородец» Нижегородской области. В ходе опыта определяли титруемую кислотность и уровень общих иммуноглобулинов молозива, проводили морфологический и биохимический анализ крови новорожденных телят на 2-е и 10-е сутки после рождения. В результате было отмечено увеличение количества лейкоцитов, общего белка, альбуминов и гамма-глобулинов в крови телят опытной группы, а также более высокий уровень иммуноглобулинов и титруемая кислотность молозива коров опытной группы.