Гистологическая характеристика миокарда цыплят-бройлеров при применении нуклеостима

В последние годы на птицеводческих предприятиях России, в производстве мясной продукции широко используются бройлеры, но их морфология и возрастная динамика не изучены. Наибольшей популярностью пользуются бройлеры кросса «РОСС 308», позволяющие набрать максимальную массу и развитие к 40 суткам постинкубационного онтогенеза. Сердце является одним из самых важных органов животных, что связано с ролью этого органа в процессе кровообращения, передвижение крови с питательными веществами и кислородом, и регуляцией нормального функционирования и роста всех органов и организма в целом. Изучение морфологии сердца позволяет не только раскрыть вопрос об особенностях возрастной морфологии, топографии развития данного органа у домашних птиц и животных, но и до настоящего времени остается актуальным. Раскрытие закономерностей морфофункциональной адаптации сердечнососудистой системы и всего организма к воздействию гиподинамии при клеточном содержании – физиологически значимых стрессоров и применение иммуномодули-ющих, иммуностимлирующих и противовирусных препаратов, является актуальной и для разработки обоснованных методов профилактики повреждения миокарда, а также для поиска наиболее эффективных методов, обеспечивающих структурную стабилизацию сердечно-сосудистой системы, и повышение резистентности организма в целом. Актуальность исследования обуславливается не только определением возрастных особенностей постинкубационного развития сердца бройлеров, но и влияния нового биологического стимулятора Нуклеостим при выращивании бройлеров.

Материал и методы исследований. В данной работе мы представили описания материала и методов исследований, использованных для более глубокого изучения влияния биопрепарата Нукле-остим на организм цыплят-бройлеров. Для проведения исследований было использовано 50 цыплят-бройлеров кросса «РОСС 308». Опытные и контрольная группы животных содержались в одинаковых условиях на специальном, сбалансированном пищевом рационе со свободным доступом к воде. В работе использованы: биологический стимулятор Нуклеостим. Данный препарат вводили в рацион птиц в нужных концентрациях и задавали вместе с кормом согласно инструкции по применению. Биологический материал фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145 (Германия), которые окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону.

Результаты исследований. В целом миокард цыплят-бройлеров был представлен мышечными волокнами, состоящими из кардиомиоцитов, которые контактировали между собой посредством характерных для миокарда вставочных дисков. Клетки были расположены в одновек- торном порядке и имели достаточно высокую клеточную плотность. Межволоконные промежутки и периваскулярные пространства были несколько расширены, ве- роятно, вследствие межуточного отека. В них располагались лимфоциты, макрофаги, эритроциты.

Рисунок 1 - Миокард цыплят-бройлеров до применения нуклеостима. Межуточный отек, скопления эозинофилов. Окраска гематокси-

Рисунок 2 - Миокард цыплят-бройлеров до применения нуклеостима. Межуточный отек, скопления псевдоэозинофилов. Окраска ге- лином и эозином.

матоксилином и эозином.

Рисунок 3 - Эндомизий в миокарде цыплят-бройлеров до применения нуклеостма. Окраска по ван-Гизон.

Рисунок 4 - Миокард цыплят-бройлеров после применения нуклеостима. Окраска гематоксилином и эозином

В миокарде обнаруживались признаки воспаления. Встречались обширные скопления псевдоэозинофилов, геморрагическое пропитывание эритроцитами межволоконных промежутков. В кровеносных сосудах признаков стаза и сладжа форменных элементов крови не выявлено.

Эндомизий при окраске по Ван-Гизону обнаруживался в виде тонких прослоек коллагеновых волокон, как между мышечными волокнами, так и возле кровеносных сосудов, в основном, артериального бассейна. После применения нукле-остима, при исследовании, было выявлено, что инфильтрация воспалительными клетками была значительно снижена. В интерстициальных пространствах выявлялись единичные лимфоциты и эритроциты. Скоплений эозинофилов не обнаружива- лось. Явлений отека не выявлялось. Мышечные клетки плотно прилегали друг к другу. Между ними четко определялись вставочные диски. Клетки сохраняли периодичную поперечную исчерченность. Между волокнами выявлялись тонкие коллагеновые волокна, представляющие эндо - и перимизий миокарда без признаков склерозирования. Кровеносные сосуды и периваскулярный бассейн был без особенностей. При иммуногистохимическом выявлении Timp-2+ клеток в миокарде цыплят-бройлеров, установлено, что в опытной группе количество позитивно окрашенных клеток трехкратно превосходило значения контрольной. Так, медиана в контроле составляла - 2,78 (2-4), в опыте - медиана 6,14 (3-9) клеток в поле зрения (Рисунок 5, 6, 7, 8). при p <0,05.

Box Plot (Spreadsheet! 10v*15c)

Median; Box: 25%-75%; Whisker: Non-Outlier Range

Median

I Non-Outlier Range о Outliers ж Extremes контроль

Рисунок 5 – Численность Timp2+ клеток в миокарде цыплят-бройлеровв контрольной и опытной группах в полях зрения при увеличении в 400 раз. Ось y – количество клеток (штуки), ось x – экспериментальные группы

Рисунок 6 – Timp-2+ клетки в миокарде опытной группы. Иммуногистохимическое окрашивание антителами к Timp-2. Непрямая стрептавидин-биотиновая система детекции c докраской гематоксилином

Рисунок 7 – Timp-2+ клетки в просвете кровеносного сосуда. Миокард опытной группы. Иммуногистохимическое окрашивание антителами к Timp-2. Непрямая стрептави-дин-биотиновая система детекции c докрас-кой гематоксилином

Рисунок 8 – Timp-2+ клетки в просвете кровеносного сосуда и позитивное окрашивание цитоплазмы кардиомиоцитов. Иммуногистохимическое окрашивание антителами к Timp-2. Непрямая стрептавидин-биотиновая система детекции c докраской гематоксилином

Box Plot (Spreadsheet! 10v*26c)

□ Median

□ 25%-75%

I Noп-Outlier Range о Outliers

He Extremes

Рисунок 9 – Численность PCNA+ клеток в миокарде в полях зрения при ув. Х650. Ось y- ко-

личество клеток (штуки), ось x- экспериментальные группы.

Рисунок 10 – PCNA+ клетки в миокарде контрольной группе. Иммуногистохимическое окрашивание антителами к ядерному антигену пролиферирующих клеток PCNA. Непрямая стрептавидин-биотиновая система детекции c докраской гематоксилином

Рисунок 11 – PCNA+ клетки в миокарде опытной группе. Иммуногистохимическое окрашивание антителами к ядерному антигену пролиферирующих клеток PCNA. Непрямая стрептавидин-биотиновая система детекции c докраской гематоксилином

При исследовании пролиферативно активных ядер кардиомиоцитов – PCNA, которые часто встречаются в делящихся клетках у молодых особей птиц при гипертрофии миокарда, были выявлены количественные отличия между экспериментальными группами. Так, в контрольной группе количество делящихся ядер в миокарде было двукратно ниже, чем в опытной группе. Медиана в контрольной группе составила 40,28 (34-49), в опытной 82 (61111) (p <0,05) (Рисунок 9, 10, 11).

Таким образом, после применения нуклеостима выявлялись признаки снижения воспалительной инфильтрации, исчезновения отека. Численность PCNA+ позитивных клеток была увеличена в два раза, что свидетельствовало об активации внутриклеточного кардиомиогенеза – гипертрофии кардиомиоцитов. Клетки стромы и кардиомиоциты секретировали Timp-2 в три раза активней, чем в контрольной группе, что способствовало кардиопротекции, инициированой использованием нук-леостина.

Заключение. Использование биологического стимулятора Нуклеостим оптимизирует структуру миокарда, препятствует развитию в органе нарушений клеточных механизмов метаболизма, ведущих к развитию структурных изменений. Результаты исследований показывают, что при применении Нуклеостима инфильтрация воспалительными клетками значительно снижается, это говорит о том, что биопрепарат способствует снижению риска возникновения воспалительных процессов в миокарде. Также видно, что мышечные клетки плотно прилегают друг к другу и сохраняют периодичную поперечную исчерченность, это подтверждает то, что применение нуклеостима не влияет на структуру миокарда цыплят-бройлеров.

Резюме

В статье представлены результаты исследований применения биологического стимулятора Нуклеостим при выращивании цыплят-бройлеров кросса РОСС-308. Особое внимание уделяется морфологической характеристике миокарда цыплят-бройлеров, а также влиянию на миокард биостимулятора Нуклеостим на тканевом и клеточном уровне. Проведенные гистологические исследования показали, что биологический стимулятор Нуклеостим оптимизирует структуру миокарда, препятствует развитию в органе нарушений клеточных механизмов метаболизма, ведущих к развитию структурных изменений.