Характеристика трансплантата клеток костного мозга по уровню его энергетического потенциала.

Целью выполненной работы была разработка метода оценки качества трансплантата клеток костного мозга (ККМ) по изменению их энергетического состояния с помощью витального флуоресцентного потенциал-чувствительного зонда иодида 2[п-(диметиламино)стирил]-1-метилпиридиния (2-Di-1-ASP). Экспериментальные исследования выполнены на образцах суспензии нативных ККМ20 доноров в стандартном растворе стабилизатора, которые хранились при комнатной температуре. После перемешивания суспензии клеток из нее отбирали пробы: исходнуюи через 1, 2, 3, 4, 5, 24, 48, 72 часа хранения,окрашивали с помощью зонда 2-Di-1-ASP и исследовали на люминесцентном микроскопе. Регистрировали величину интенсивности флуоресценции каждой индивидуальной клетки. В каждом препарате измеряли флуоресценцию 70-100 клеток и рассчитывали среднюю интенсивность флуоресценции ККМ (F усл. ед.); определяли количество ядросодержащих клеток (NC,%). Для оценки количества клеток с неповрежденными цитоплазматическими мембранами использовали тест с трипановым синим. Наличие митозовв суспензии через 6 и 24 часа хранения показано в мазках ККМ, окрашенных по методу Романовского. Статистический анализ динамики изменений F и NC в каждом образце осуществляли при помощи дисперсионного анализа зависимых выборок ANOVA Repeated Measures.По всем образцам проведен кластерный анализ (метрика Эвклида, стратегия ближайшего среднего). Во всех образцах ККМ через 3 часа храненияпри комнатной температуре регистрировалсярост F, обусловленный увеличением количества клеток с интенсивностью флуоресценции выше 100 усл.ед. (NF>100) по сравнениюс исходными значениями, при этом степеньэтого нарастания коррелировала с увеличением Nf>100. Показано, что чем выше NF>100 через3 часа хранения, тем больше прирост концентрации ядросодержащих клеток в суспензии,который начинался через 5 часов хранения.Этот факт может свидетельствовать о способности исследуемых клеток к делению. При возрастании NF>100 через 3 часа хранения ККМ менее чем в 1,66 раза по сравнению с исходной величиной, концентрация ядросодержащих клеток практически не изменялась, что свидетельствовало об утрате способности клеток к делению в данных условиях. Предложен метод оценки качества трансплантата ККМ с помощью витального флуоресцентного потенциал-чувствительного зонда 2-Di-1-ASP при комнатной температуре в растворе стандартного стабилизатора.