Хемилюминесценция плазмы крови коров при эндометрите

При различных воспалительных заболеваниях, в том числе органов репродуктивной системы, образуется и накапливается ряд медиаторов, инициирующих или ингибирующих процессы свободнорадикального окисления [1].

Отдельные сведения указывают на повышение прооксидантной и понижение антиоксидантной активности сыворотки крови и соответственно рост коэффициента их соотношения у коров с острым послеродовым эндометритом в форме гнойнокатарального [2]. У животных с патологией инволюционных процессов матки в послеродовый период повышены показатели светосуммы и максимальной светимости хемилюминесценции [3]. Эти данные свидетельствуют о важной роли интенсификации свободнорадикальных процессов в патогенезе заболеваний органов репродуктивной системы. В то же время практически отсутствуют данные об интенсивности свободнорадикальных процессов у коров при эндометрите в разные стадии воспалительного процесса и послеродового периода, неясно, какой эффект оказывает лекарственная терапия на показатели хемилюминесценции. Достаточно высокий уровень распространенности гинекологических заболеваний у высокопродуктивных коров, независимо от технологии их содержания [4], свидетельствует о необходимости уточнения вопросов патогенеза, роли своднорадикальных процессов при заболеваниях репродуктивных органов.

Объекты и методы исследования

Исследования проведены в летний период на базе хозяйств Омской области: ООО «Лузинское молоко» и ФГУП ОПХ «Омское».

Изучены биохимические показатели крови и сырого молока коров черно-пестрой голштинизированной породы, 2–3 лактации, массой 600–650 кг со среднегодовой молочной продуктивностью 6850–7130 кг при одинаковых условиях содержания животных.

В соответствии с анамнестическими данными, результатами вагинальных и ректальных исследований коров распределили на четыре группы:

I группа (контрольная) состояла из клинически здоровых животных (10–15-е сутки после отела), с нормальной температурой тела, при исследовании отсутствовали гнойные и некротические выделения (n = 17).

II группа (ОПЭ) – коровы с диагнозом «острый послеродовой эндометрит» (10– 12-е сутки после отела) (n = 21).

• III    группа (ХЭ) – коровы с диагнозом «хронический эндометрит» (27–30-е сутки после отела, n = 15).

• IV    группа (БКПЭ) – животные без клинических проявлений эндометрита после лечения (29–31-е сутки после отела, n = 17).

В исследуемых группах количество животных из разных хозяйств представлено в равной степени.

Коровы II–IV групп получали комплексные препараты антимикробного и противовоспалительного действия. Из этих групп исключены животные с осложненным разрывом наружных половых органов и другими заболеваниями.

Для исследований забор крови из яремной вены проводили в утреннее время до кормления в вакуумные пробирки одновременно от животных всех исследуемых групп. В качестве антикоагулянта использовали гепарин.

В качестве метода оценки интенсивности свободнорадикального окисления была применена железоиндуцированная люминолзависимая хемилюминесценция. Регистрацию свечения проводили с помощью прибора хемилюминомера ХЛ-003. В работе анализировали следующие параметры хемилюминесценции: интенсивность спонтанной светимости, амплитуду быстрой вспышки свечения, максимальную светимость, свето-сумму [5].

Для оценки антиоксидантных свойств плазмы крови в качестве модельной системы использовали желточные липопротеины и инициировали реакции перекисного окисления липидов сульфатом железа [6].

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ Statistic 6.0 [7]. При несоответствии признака закону нормального распределения в группах определяли медиану (Ме) и межквартильные интервалы [Q 1 и Q 3 ]. Оценку статистической значимости различий проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни (U). Критический уровень значимости при проверке нулевых гипотез был принят на уровне р = 0,05.

Результаты исследований

В нашей работе с помощью хемилюминомера ХЛ-003 определены следующие параметры Fe2+ индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции: светосумма, спонтанная светимость, амплитуда медленной и быстрой вспышки плазмы крови коров.

Сравнение параметров хемилюминесценции плазмы крови коров разных групп выявило, что значение спонтанной светимости плазмы крови коров с острым послеродовым (ОПЭ) и хроническим эндометритом (ХЭ) выше в 1,45 и 2,12 раза соответственно по сравнению с контрольной группой животных. Данный факт указывает на то, что уровень свободных радикалов без добавления инициирующих веществ в плазме крови коров выше при остром послеродовом эндометрите, и особенно при хроническом эндометрите. В группе животных после лечения без клинических проявлений эндометрита (БКПЭ) интенсивность спонтанной светимости не отличалась от данных контроля (табл. 1).

Таблица 1 Показатели хемилюминесценции плазмы крови коров при эндометрите, Ме [Q 1 ; Q 3 ]

Показатель, усл. ед.	I группа (контроль) n = 17	II группа (ОПЭ) n = 21	III группа (ХЭ) n = 15	IV группа (БКПЭ) n = 17
Спонтанная светимость	2,23 (1,98; 2,42)	3,23 (2,65; 3,60) Р 1 = 0,038	4,73 (3,69; 4,98) Р 1 = 0,02 Р 2 = 0,046	2,54 (2,34; 2,89) Р 1 > 0,05 Р 2 > 0,05
Светосумма	59,32 (57,82; 61,35)	68,96 (64,01; 76,35) Р 1 = 0,003	71,85 (65,37; 78,23) Р 1 < 0,001 Р 2 > 0,05	61,73 (55,45; 65,76) Р 1 > 0,05 Р 2 > 0,05
Быстрая вспышка	18,01 (17,32; 18,45)	18,07 (17,42; 19,38) Р 1 > 0,05	19,21 (18,23; 19,97) Р 1 > 0,05 Р 2 > 0,05	18,54 (17,93; 18,92) Р 1 > 0,05 Р 2 > 0,05
Максимальная светимость	10,84 (10,02; 11,54)	15,56 (13,98; 16,87) Р 1 < 0,001	16,23 (14,86; 18,01) Р 1 < 0,001 Р 2 > 0,05	12,32 (11,76; 13,23) Р 1 = 0,048 Р 2 = 0,043

Примечание . Значения р 1 в сравнении с данными контрольной группы; значения р 2 – в сравнении с группой ОПЭ (непараметрический критерий Манна-Уитни).

Установлено возрастание показателя светосуммы хемилюминесценции плазмы крови животных с острым послеродовым и хроническим эндометритом. Наибольшие изменения определены для животных с хроническим эндометритом – повышение на 21,1%, а в группе коров с острым послеродовым эндометритом на 16,3% в сравнении с показателями контрольной группы. Данный факт указывает на увеличение способности компонентов системы плазмы крови больных животных этих групп подвергаться процессам свободнорадикального окисления.

Наблюдались аналогичные изменения значений максимальной светимости плазмы крови коров групп с ОПЭ и ХЭ: максимально возможная интенсивность перекисного окисления липидов выше на 43,5 и 49,7% в сравнении с показателями контрольной группы.

При определении показателей хемилюминесценции плазмы крови коров после лечения, без клинических проявлений эндометрита значительных отклонений не выявлено, кроме максимальной светимости, значение которой были существенно ниже показателей группы с хроническим эндометритом, но еще сохранялись повышенными на 13,7% в сравнении с показателями контрольной группы.

Таким образом, все исследуемые показатели хемилюминесцентного анализа у животных, больных острым послеродовым и хроническим эндометритом, выше контрольных значений, кроме значений амплитуды быстрой вспышки. Это может указывать на то, что компоненты плазмы крови больных животных больше подвержены окислительным процессам, но существенных изменений содержания гидроперекисей в плазме не установлено. В группе коров без клинических признаков эндометрита (БКПЭ) после лечения остается повышенной только максимально возможная интенсивность процес- сов липидпероксидации. Результаты определения хемилюминесценции подтверждаются данными Н.Н. Горб с соавторами (2012) [2], которые констатируют повышение про-оксидантной активности сыворотки крови коров, больных гнойно-катаральным послеродовым эндометритом. Авторами статьи установлены изменения показателей хемилюминесценции плазмы крови: спонтанной светимости, светосуммы, быстрой вспышки, максимальной светимости. По мнению Ю.А. Владимирова (2009) [5], хемилюминесцентный анализ является одним из наиболее специфичных и чувствительных методов изучения свободнорадикальных процессов.

В следующей серии исследований определялась антиокислительная активность плазмы крови по способности угнетать хемилюминесценцию модельной системы, полученной из липопротеинов куриного желтка (табл. 2). Этот показатель имеет высокую чувствительность, так как антиокислительная активность даже молока коров отличается в разных эколого-географических зонах [8].

Таблица 2

Антиокислительная активность плазмы крови коров при эндометрите, Ме [Q 1 ; Q 3 ]

Показатель	I группа (контроль) n = 17	II группа (ОПЭ) n = 21	III группа (ХЭ) n = 15	IV группа (БКПЭ) n = 17
Снижение светосуммы, %	39,62 (38,21; 42,70)	31,77 (29,25; 34,59) Р 1 = 0,003	24,77 (20,19; 28,95) Р 1 < 0,001 Р 2 > 0,05	36,37 (34,99; 37,78) Р 1 = 0,0403 Р 2 = 0,0471

Примечание . Значения р 1 – в сравнении с данными контрольной группы; значения р 2 – в сравнении с группой ОПЭ (непараметрический критерий Манна-Уитни).

Результаты исследования свидетельствуют, что антиокислительная активность плазмы крови коров, больных эндометритом, снижается по сравнению с контрольной группой: на 19,8% у животных с острым послеродовым эндометритом и на 37,5% в группе животных с хроническим эндометритом. У коров после лечения, без клинических проявлений эндометрита антиоксидантная активность плазмы крови значимо выше, чем в группах с ОПЭ и ХЭ, и приближается к значениям контрольной группы, однако остаётся ещё ниже на 8,2%.

Заключение

Полученные данные хемилюминесцентного анализа указывают на то, что при развитии послеродового эндометрита увеличивается образование свободных радикалов и снижается антиокислительная активность плазмы крови. Наиболее высокая интенсивность свободнорадикальных процессов и наиболее низкая способность противостоять окислительным процессам в плазме крови коров с хроническим эндометритом. В плазме крови коров без клинических проявлений эндометрита после лечения наблюдается нормализация показателей хемилюминесценции.

N.A. Pogorelova, V.Y. Vysokogorskiy, T.D. Voronova

Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk

Chemiluminescence of blood plasma of cows with endometritis