Хромато-масс-спектрометрический анализ периферической крови для диагностической и прогностической оценки больных механической желтухой
Автор: Бекбауов Са, Липницкий Е.М., Истратов В.Г.
Журнал: Вестник Национального медико-хирургического центра им. Н.И. Пирогова @vestnik-pirogov-center
Рубрика: Оригинальные статьи
Статья в выпуске: 1 т.8, 2013 года.
Бесплатный доступ
В статье авторами изучены возможности хромато-масс-спектрометрического анализа и проанализированы ее диагностическая и прогностическая оценка для определения степени печеночной недостаточности у 120 больных механической желтухой.
Механическая желтуха, токсические кишечные метаболиты, хромато-масс-спектрометрический анализ, печеночная недостаточность
Короткий адрес: https://sciup.org/140188144
IDR: 140188144
Текст научной статьи Хромато-масс-спектрометрический анализ периферической крови для диагностической и прогностической оценки больных механической желтухой
Известно, что у больных механической желтухой происходят выраженные изменения не только в печеночном звене (холестаз, холемия,холангит, печеночная энцефалопатия), но и глубокие дисбиотические нарушения вследствие ахолии, токсические метаболиты которых приводят к бактериальной транслокации и эндотоксемии, усугубляя при этом печеночную недостаточность.
Целью исследования – изучить возможности хромато-масс-спектрометрического анализа периферической крови для диагностической и прогностической оценки больных механической желтухой.
Газохромато-масс-спектрометрические исследования токсических кишечных метаболитов проводили у 120 больных разного пола и возраста по 4-м направлениям: (1) исследование летучих жирных кислот (жирные кислоты с короткой цепью, далее, короткоцепочечные жирные кислоты – КЖК) и токсических метаболитов в сыворотке крови с определением хроматографического показателя интоксикации; (2) определение производных билирубина и короткоцепочечных жирных кислот непосредственно в желчи у больных; (3) выявление аммиака и его токсических производных в сыворотке крови и (4) определение сигнальных молекул чувства кворума (Quorum Sensing) – активаторов кооперативного поведения микроорганизмов: лактонов, хинолонов, фурановых эфиров и родственных соединений в сыворотке крови.
Предварительно была разработана рабочая схема хроматографического и масс-спектрометрического исследования биологического материала у больных механической желтухой различного генеза. При исследовании периферической крови осуществляли пробоподготовку с экстракцией соединений с помощью диэтилового эфира и гексана. Этим методом определяли КЖК и метаболиты группы фенолов и крезолов, фенилкарбоновые и оксифенилкарбоновые кислоты, ди- и полиамины, ароматические амины, изожирные высшие кислоты.
Для определения молекул QS-системы использовали масс-селективный детектор MSD- 5375 с определением масс-спектров сигнальных соединений и скрининговым исследованием больных (лактоны, хинолоны и фурановые эфиры). Желчь больных исследовали с помощью экстракции на твердофазном носителе и экстракцией диэтиловым эфиром с прямым вводом в хромотографах, также осуществляли перевод в триметил-силильные соединения (ТМС) с последующей хромато-масс-спектро-метрией метаболитов билирубина. Аммиак и его производные определяли по методике Branhova M. et al. (1978) в модификации Ежелевой А.Е с соавт. (1978).
Результаты и обсуждение
На основании использования методов многомерной статистики был выстроен приоритетный ряд хроматографических показателей, используемых нами в данной работе (табл. 1).
По величине удельного веса (на основании факторного анализа) на первые 15 мест претендуют следующие хроматографические показатели: на места 1-е, 3-е и 5-е с величинами удельного веса – 0,976, -0,943 и 0,937 соответственно определены оксифенилкарбоновые кислоты, ароматические амины и изожирные высшие кислоты, определяющие по нашему мнению степень гипоксических изменений в ткани печени (оксифенилкарбоновые кислоты), а также метаболические нарушения на фоне печеночной недостаточности (ароматические амины) и наличием септического компонента (изожирные высшие
Бекбауов С.А., Липницкий Е.М., Истратов В.Г.
ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ И ПРОГНОСТИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ БОЛЬНЫХ МЕХАНИЧЕСКОЙ ЖЕЛТУХОЙ
Табл. 1. Приоритетный ряд основных хроматографических показателей у больных механической желтухой (по данным факторного анализа)
генов патогенности и развития генерализованного инфекционного процесса 14-е и 15-е места с величинами удельного веса 0,841 и 0,836 соответственно занимает фенолы и крезолы, определяющие степень развития почечной недостаточности.
Существенную роль в патогенезе септических процессов у больных механической желтухой играет полиорганная недостаточность, и прежде всего печеночно-почечная (фенолы и крезолы), а также ди-, и полиамины , и N-N-диметил-алкил-амин, которые претендовали на 19-е и 20-е места с величинами удельного веса – 0,803 и 0,798 соответственно. На 21-е, 22-е, 24-е, 26-е, 27-е и 28-е места претендовали ассоциированные с альбумином формы билирубина, билирубин диглюкоронид, билирубин моно-2-глюкоронид, мезобилирубин, комплексы билирубина с фосфолипидами и комплексы билирубина с пироллами с величинами удельного веса – 0,767; 0,763; 0,732; 0,721; 0,711 и 0,703 соответственно. Эти соединения определяли достаточно сложные механизмы связывания и выведения билирубина из организма, особенности его метаболизма в организме.
Заключение
Таким образом, хроматографические и хромато-масс-спектрометрические исследования периферической крови у больных механической желтухой позволяют оценить степень печеночной недостаточности, участие токсических метаболитов кишечной микрофлоры в патологическом процессе с опасностью развития генерализованной инфекции активизированной собственной дисбиозной грампо-ложительной и грамотрицательной микрофлорой.
Список литературы Хромато-масс-спектрометрический анализ периферической крови для диагностической и прогностической оценки больных механической желтухой
- Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.
- Петров Л.Н., Бондаренко В.М, Вахитов Т.Я., Воробьев А.А. QS-системы у бактерий и перспективы разработки новых метаболитных пробиотических препаратов. Вестн. РАМН, 2006, 1: 38-45.
- Ежелева А.Е., Малыгина Л.С., Чурбанов М.Ф. Журн. аналит. химии, 1978, Т. 35.
- Хромотография. Практическое приложение и методы. Под ред.Э.Хартмана, М., Мир. 1986, -422с.
- Branhova M., Minarovie G., Blahovec B. Chem.Prim. 1978, Vol. 28, -P. 568.
- Eberhard A., Burlingame A.L., C. Eberhard et al. Structural identification of autoinducer of Photobacterium fischeri luciferase//Biochemistry. -1981. -Vol. 20 -p. 2444-2449.
- Federle M.J., Bassler B.L. Interspecies communication in bacteria//J. Clin. Invest. -2003. -Vol. 112, № 9. -Р. 1291-1299.
- Fuqua W.C., Winans S.C., Greenberg E.P. Quorum sensing in bacteria: the LuxR-LuxI family of cell density-responsive transcriptional regulators//J. Bacteriol. -1994. -Vol. 176, № 2. -P. 269-275.
- Parsek M.R., Val, D.L., Hanzelka, B.L. et al. Acyl homoserine-lactone quorum-sensing signal generation//PNAS USA -1999. -Vol.96. -P. 4360-4365.
- Schauder S., Shokat K., Surette M. G. et al. The LuxS family of bacterial autoinducers: biosynthesis of a novel quorum sensing signal molecule//Mol. Microbiol. -2001. -Vol. 41, № 2. -Р. 463-476.