Интегральные показатели белых крыс при длительном использовании комплексного средства из природного сырья

На сегодняшний день существует множество подходов в лечении и профилактики незаразных болезней сельскохозяйственных животных, одним из которых является применение растительных препаратов, где в качестве исходного сырья могут выступать не только лекарственные растения, но и продукты пчеловодства, грибы, а также индивидуальные биологически активные вещества, полученные из природных составляющих. Безусловно, полностью заменить и исключить из имеющегося арсенала ветеринарных препаратов синтетические средства не представляется возможным, однако, минимизировать их использование и, как следствие, уменьшить вероятность возникновения побочных эффектов возможно за счет включения в схему лечения растительных препаратов. Актуальность их использования обусловлена множеством преимуществ по сравнению с синтетическими аналогами, главными из которых являются высокая фармакологическая активность и биодоступность при относительно низкой токсичности и простоте изготовления. Однако «условная» безвредность таких препаратов определяется наличием в их составе биологически активных веществ, которые при определенных условиях могут вызывать различные нежелательные реакции в организме. Учитывая вышеизложенное, все вновь разработанные фармакологические средства на основе природного сырья должны подвергаться доклиническим испытаниям, одной из ступенью которых является определение параметров хронической токсичности, позволяющей установить степень повреждающего действия фармакологического вещества при его длительном введении с определением наиболее чувствительных органов и систем организма [1, 8].

Исходя из этого, целью работы явилось изучение параметров хронической токсичности нового средства из природного сырья под лабораторным шифром «KN-73».

Материал и методы исследований. Предметом настоящих исследований послужило разработанное на кафедре фармакологии, токсикологии и радиобиологии Казанской ГАВМ комплексное средство из природных компонентов для парентерального применения. Оценку параметров токсичности на этапе доклинических испытаний проводили в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств, Правилами надлежащей лабораторной практики (Приказ МЗ РФ № 199н от 01.04.2016 г. «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики») и Директивой Европейского парламента и Совета Европейского Союза 2010/63/ЕС о защите животных, использующихся для научных целей [2, 7, 9, 12]. Согласно имеющимся рекомендациям, изучение хронической токсичности в первой серии опытов проводили в трех различных дозах на лабораторных белых крысах обоего пола массой тела 180,0 – 200,0 г., из числа которых было сформировано 6 групп, по 6 животных в каждой, соблюдая принцип пар-аналогов. Длительность эксперимента составила 30 суток, в течение которых крысам первой опытной группы средство инъецировали внутримышечно в дозе 0,5 мл на голову, что соответствует условнотерапевтической дозе, второй опытной в дозе 0,1 мл (1/50 от максимально допустимой дозы) и третьей опытной группе – 1,0 мл, в два раза превышающую условно-терапевтическую. Животным контрольных групп применяли воду для инъекций по аналогичной схеме в установленных дозах. В ходе экспериментального периода регистрировали гибель животных, общее состояние, процесс потребления корма и воды, акты мочеиспускания, дефекации и груминга, следили за динамикой массы тела путем взвешивания крыс в начале и по окончании исследований с вычислением абсолютного и среднесуточного приростов. На 30 сутки исследований животные всех подопытных групп подвергались эвтаназии с помощью эфира диэтилового для осуществления забора крови из яремной вены путем декапитации для определения биохимического профиля крови, а также вскрытия с целью изучения макрокартины и массы внутренних органов с определением массовых коэффициентов. Взвешивание животных осуществляли на электронных весах PKS 0618D, массу органов определяли на цифровых весах Аwdopplksa (точность измерения 0,5 г). Массовый коэффициент высчитывали по общепринятой формуле:

органа

МК = М —---* 100%

тела

Результат исследований .

Основной целью изучения хронической токсичности фармакологического вещества является выявление степени его повреждающего действия на отдельные органы или целые системы организма при длительном введении. Одним из показателей, характеризующих негативное влияние лекарственного препарата, является масса внутренних органов, которая, как известно, может меняться в зависимости от степени повреждающего действия [3]. В ходе проведенных исследований установлено, что длительное применение разработанного средства в трех различных дозах не влияет на массу органов, что подтверждается отсутствием достоверной разницы (Таблица 1). Масса изучаемых внутренних органов всех подопытных крыс находится в пределах физиологической нормы для данного вида животного. Топография их в подопытных группах не нарушена, кровоизлияния отсутствуют, макрокартина органов животных опытной группы в целом соответствует таковой в контроле. Однако отмечены визуальные изменения в макрокартине печени опытных крыс, проявляющиеся в появлении мозаичного рисунка с чередованием краснокоричневых участков со светлыми, в зависимости от дозы испытуемого средства. При этом, нижний острый край печени, в первой и третьей опытной группах животных несколько притуплен, но консистенция не нарушена. Данные изменения мы склонны связывать с выполняемыми печенью метаболическими и дезинтоксикационными функциями в ответ на длительное введение средства, в больших дозах [5, 6].

Массовый коэффициент – интегральный показатель, применяемый в токсикологии для оценки состояния внутренних органов, дает возможность обнаружить орган-мишень токсиканта и выявить эндокринно-связанные эффекты [4]. Опытным путем установлено, что данный показатель не имеет достоверной разницы между группами и соответствует референсным значениям для данного вида животного [10] (Таблица 2). Полученные результаты могут свидетельствовать об отсутствии токсического эффекта разработанного средства на отдельные органы-мишени и системы в целом.

Таблица 1 – Масса внутренних органов лабораторных крыс (n=6)

Таблица 2 – Массовые коэффициенты внутренних органов лабораторных крыс, % (n=6)

Масса тела животного – показатель, позволяющий оценить интенсивность обмена веществ, энергетические и анаболические процессы в организме. Данный параметр может изменяться по многим причинам, одной из которых является интоксикация организма и нарушение работы какого-либо органа или системы органов в ответ на применение лекарственного средства, обладающего токсическими свойствами [11].

Рисунок 1 – Динамика массы тела подопытных крыс при длительном использовании

• □    1 группа

• □    2 группа

• □    3 группа

комплексного средства «KN-73»

В ходе экспериментального периода нами отмечено увеличение массы тела у всех подопытных животных по сравнению с исходными данными, однако, при взвешивании установлена незначительная разница по изучаемому показателю между группами. В частности, наименьшая масса тела отмечена у третьей опытной группы с наибольшей дозой средства, которая составила 210,3±3,98, тогда как в первой и второй опытных группах данный параметр находился на уровне 219,2±4,56 и 227,0±5,08. При этом, среднесуточной прирост в третьей опытной группе составил всего 0,6 г при аналогичных показателях в двух других группах 0,85 и 1,3 г. Для сравнения, у крыс третьей контрольной группы, которым также вводили 1,0 мл, прирост составил 0,75 г, что превосходит опытных аналогов на 25 %. Полученные результаты мы склонны связывать с длительным введением изучаемого средства в дозе, превышающую условно-терапевтическую.

Заключение. В ходе проведенных исследований в первой серии опытов установлено, что разработанное нами средство на основе природных компонентов при парентеральном применении не оказывает выраженного токсического эффекта на отдельные органы и системы организма при его длительном введении, что находит подтверждение в полученных результатах. В частности, применение трех различных доз средства не вызывает гибели подопытных животных, не оказывает выраженного негативного влияния на основные физиологические параметры, включая массу тела, а также не вызывает выраженных измений массового коэффициента внутренних органов.