Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ
Автор: Дутова Светлана Вячеславовна, Неделькина Наталья Петровна, Мяделец Марина Алесандровна, Ростовцева Юлия Владимировна, Карпова Мария Ростиславовна
Рубрика: Фундаментальная медицина
Статья в выпуске: 5-4 т.16, 2014 года.
Бесплатный доступ
На мышах линии CBA/CaLac исследовано влияние фракций сухого экстракта Coluria geoides ( Rosaceae ) на различные стадии клеточного иммунного ответа в реакции гиперчувствительности замедленного типа. Фракция водорастворимых биологически активных соединений наиболее активно стимулировала синтез провоспалительных цитокинов на стадии разрешения ГЗТ. В составе фракций идентифицированы фенолокислоты и флавоноиды. Считаем выделение из сухого экстракта C.geoides комплекса действующих веществ нецелесообразным, так как цельный экстракт обладает совокупными фармакологическими эффектами фракций.
Клеточный иммунитет, лекарственные растения, иммунотропное действие
Короткий адрес: https://sciup.org/148101908
IDR: 148101908
Текст научной статьи Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ
Состояние современных пациентов часто Цель исследования: оценить влияние
осложняется иммунодефицитами и нуждается в иммунокоррекции [6], поэтому важной задачей экспериментальной фармакологии является поиск новых и использование уже изученных лекарственных растений, обладающих иммуностимулирующим и иммунокорригирующим свойствами. Эфирномасличное растение сибирской флоры Coluria geoides (Pall.) Ledeb. ( Rosaceae ) – является перспективным источником биологически активных соединений (БАС) с противомикробной, иммуностимулирующей и иммунокорригирующей активностью, протек-тивным действием при стафилококковой инфекции [1-4]. Сухой экстракт этого растения проявил стимулирующее действие в отношении клеточного иммунного ответа [5], что представляется важным и интересным фактом, так как влияние на клеточный иммунитет может лежать в основе протективного действия препарата против внутриклеточных паразитов и опухолевого перерождения клеток. При разработке любого фитопрепарата обязательно встает вопрос о природе действующих веществ.
фракций сухого экстракта C. geoides, содержащих липо- и гидрофильные БАС, на различные стадии клеточного иммунного ответа.
Методика исследования. Сухой экстракт из сырья C. geoides (подземной и надземной части, собранных в июле 2013 г. в окр. д. Казановка, Республика Хакасия) получали методом перколяции 40% этанолом, высушивали до постоянной массы, стандартизовали по содержанию m-кумаровой кислоты (8,6%). Комплексы БАС получали из сухого экстракта последовательным фракционированием: С-1Е – 96% этанолом, С-1А – водой. Изучение состава фенольных соединений фракций проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе «Agilent 1200» с диодноматричным детектором и системой ChemStation. Для идентификации фенольных соединений использовали стандартные образцы фенолокислот, кумаринов и флавоноидов. Методом внутренней нормализации определяли относительное содержание отдельных идентифицированных фенольных веществ в исследуемом образце. Количественное содержание компонентов приводится в пересчете на государственный стандартный образец (ГСО) кверцетина.
Влияние фракций на клеточный иммунный ответ изучали на 60 мышах-самках линии CBA/CaLac массой 18-20 г в возрасте 2-2,5 месяцев, полученных из отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии им. Е.Д. Гольдберга» СО РАМН
На стадии сенсибилизации фракции С-1А и С-1Е достоверно угнетали процесс формирования клона антигенспецифических Т-лимфоцитов (табл. 1), что привело к снижению индекса воспаления в 2,1 и 4,3 раза соответственно. На стадии разрешения введение животным фракции С-1А привело к достоверной стимуляции воспалительной реакции: увеличению индекса воспаления в 2,1 раза. Введение фракции С-1Е несколько увеличивало индекс воспаления, но недостоверно. Сравнение полученных данных с результатами ранее проведенных исследований [5] свидетельствует о том, что фракции БАС сухого экстракта C.geoides влияют на клеточноопосредованный иммунный ответ в целом так же, как цельный экстракт, однако угнетающее действие на сенсибилизирующей стадии иммунного ответа выражено сильнее. Кроме того, фракция С-1А, содержащая гидрофильные БАС, проявляет более выраженное стимулирующее действие, направленное на синтез провоспали-тельных цитокинов на разрешающей стадии иммунного ответа.
Результаты исследования. В результате проведенных исследований было выявлено, что фракции сухого экстракта C.geoides оказывают влияние на развитие ГЗТ, выраженное на стадии сенсибилизации и на стадии разрешения (табл. 1).
Таблица 1. Влияние препаратов C. geoides на клеточный иммунный ответ при постановке реакции ГЗТ (Медиана (25%÷75%), n=8-10)
Условия стимуляции |
Индекс воспаления в реакции ГЗТ, % |
1 схема ГЗТ |
|
Без стимуляции (контроль) |
13,14 (8,36÷18,31) |
С-1А |
6,13 (4,38÷7,70)* |
С-1Е |
3,05 (0,96÷5,12)* |
2 схема ГЗТ |
|
Без стимуляции (контроль) |
12,25 (10,12÷15,45) |
С-1А |
25,60 (15,60÷37,70)* |
С-1Е |
16,70 (13,20÷20,00) |
Примечание: * - различие достоверно при р ≤≤0,05 с показателями контроля
Далее исследовали химический состав водной и этанольной фракций сухого экстракта C.geoides. По времени удерживания стандартных веществ и УФ-спектрам 7 соединений были идентифицированы как гликозиды кверцетина и кемпферола, ванилиновая, галловая, м -кумаровая, п -кумаровая, ванилиновая, эллаговая кислоты (табл. 2).
Следует отметить, что в водную фракцию в значительной степени переходит соединение II (81,0%), эллаговая (61,78), галловая (53,67) и м -кумаровая кислоты (43,19%), 20-гидро-ксиэкдизон (100%); в этанольную фракцию сухого экстракта – соединение III (25,43%) кемпферол (16,88%), м -кумаровая кислота (36,41%). В составе изученных фракций БАС преобладают фенолокислоты (в том числе простые фенилпро-паноиды – фенолкарбоновые кислоты), извлекаемые и этанолом, и водой. Эти вещества могут отвечать за фармакологическую активность изучаемых фитопрепаратов.
Выводы: считаем выделение из сухого экстракта C.geoides комплекса действующих веществ нецелесообразным, так как цельный экстракт обладает совокупными фармакологическими эффектами фракций.
Таблица 2. Содержание фенольных соединений фракций сухого экстракта C. Geoides
Соединение |
Время удерживания (t R ), мин |
Спектральные данные λmax, нм |
Содержание (% от общего содержания в сухом экстракте) |
|
водная фракция С-1А |
этанольная фракция С-1Е |
|||
галловая кислота |
1,55 |
220, 280 |
53,67 |
18,27 |
м -кумаровая кислота |
1,82 |
235, 320 |
43,19 |
36,41 |
ванилиновая кислота |
4,83 |
210, 250, 290 |
19,54 |
8,42 |
соединение I |
6,53 |
260, 330 |
31,65 |
21,46 |
п -кумаровая кислота |
8,39 |
210, 290, 310 |
12,00 |
6,13 |
эллаговая кислота |
21,60 |
255, 370 |
61,78 |
21,92 |
соединение II |
32,18 |
290, 340 |
81,00 |
19,00 |
соединение III |
36,90 |
255, 290 |
11,86 |
25,43 |
кверцетин |
40,25 |
256, 370 |
11,64 |
6,30 |
соединение IV |
44,45 |
220, 370 |
8,77 |
13,08 |
кемпферол |
47,49 |
250, 360 |
11,13 |
16,88 |
соединение V |
49,20 |
220, 370 |
17,68 |
3,92 |
соединение VI |
51,80 |
255, 370 |
6,10 |
15,67 |
Список литературы Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ
- Водолазова, С.В. Влияние препаратов колюрии гравилатовидной на фагоцитарную активность и цитокинпродуцирующую способность лейкоцитов периферической крови/С.В. Водолазова, Е.С. Агеева, Ю.В. Саранчина//Дни иммунологии в Сибири: мат-лы Всеросс. научно-практ. конф. с межд. участием (Абакан, 26-27 апреля 2011 г.). С. 192-194.
- Водолазова, С.В. Антимикробная активность эфирных масел и водных извлечений из лекарственных растений Хакасии/С.В. Водолазова, М.А. Мяделец, М.Р. Карпова, Ю.В. Саранчина//Сибирский медицинский журнал. 2011. Т. 2. С.54-58.
- Дутова, С.В. Иммунокорригирующее действие препаратов колюрии гравилатовидной при цитостатической болезни/С.В. Дутова, М.Р. Карпова, М.А. Мяделец//Дни иммунологии в Сибири: мат. Всеросс. научно-практ. конф. (г. Кызыл, 20-21 июня 2013 г.). С. 54-56.
- Дутова, С.В. Протективное действие настойки Coluria geoides (Rosaceae) на модели генерализованной стафилококковой инфекции/С.В. Дутова, Н.П. Неделькина, М.Р. Карпова, В.Ю. Чумаков//Российский иммунологический журнал. 2012. Т. 3. С. 74-75.
- Дутова, С.В. Влияние препаратов Сoluria geoides (Rosaceae) на клеточный иммунитет/С.В. Дутова, М.Р. Карпова, М.А. Мяделец//Российский иммунологический журнал. 2014. Т. 8(17), № 2 (1). С. 51-53.
- Лусс Л.В. Вторичная иммунная недостаточность и иммунокомпрометированный пациент. В чем проблемы?//Аллергология и иммунология в педиатрии. 2007. № 2 (11). С. 3-10.
- Хаитов, Р.М. Методические указания по изучению иммунотропной активности фармакологических веществ. В кн: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/Р.М. Хаитов, И.С. Гущин, Б.В. Пинегин, А.И. Зебров. -М.: Медицина, 2005. С. 505-506.