Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ

Автор: Дутова Светлана Вячеславовна, Неделькина Наталья Петровна, Мяделец Марина Алесандровна, Ростовцева Юлия Владимировна, Карпова Мария Ростиславовна

Журнал: Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Социальные, гуманитарные, медико-биологические науки @izvestiya-ssc-human

Рубрика: Фундаментальная медицина

Статья в выпуске: 5-4 т.16, 2014 года.

Бесплатный доступ

На мышах линии CBA/CaLac исследовано влияние фракций сухого экстракта Coluria geoides ( Rosaceae ) на различные стадии клеточного иммунного ответа в реакции гиперчувствительности замедленного типа. Фракция водорастворимых биологически активных соединений наиболее активно стимулировала синтез провоспалительных цитокинов на стадии разрешения ГЗТ. В составе фракций идентифицированы фенолокислоты и флавоноиды. Считаем выделение из сухого экстракта C.geoides комплекса действующих веществ нецелесообразным, так как цельный экстракт обладает совокупными фармакологическими эффектами фракций.

Клеточный иммунитет, лекарственные растения, иммунотропное действие

Короткий адрес: https://sciup.org/148101908

IDR: 148101908

Текст научной статьи Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ

Состояние современных пациентов часто        Цель исследования: оценить влияние

осложняется иммунодефицитами и нуждается в иммунокоррекции [6], поэтому важной задачей экспериментальной фармакологии является поиск новых и использование уже изученных лекарственных растений, обладающих иммуностимулирующим и иммунокорригирующим свойствами. Эфирномасличное растение сибирской флоры Coluria geoides (Pall.) Ledeb. ( Rosaceae ) – является перспективным источником биологически активных соединений (БАС) с противомикробной, иммуностимулирующей и иммунокорригирующей активностью, протек-тивным действием при стафилококковой инфекции [1-4]. Сухой экстракт этого растения проявил стимулирующее действие в отношении клеточного иммунного ответа [5], что представляется важным и интересным фактом, так как влияние на клеточный иммунитет может лежать в основе протективного действия препарата против внутриклеточных паразитов и опухолевого перерождения клеток. При разработке любого фитопрепарата обязательно встает вопрос о природе действующих веществ.

фракций сухого экстракта C. geoides, содержащих липо- и гидрофильные БАС, на различные стадии клеточного иммунного ответа.

Методика исследования. Сухой экстракт из сырья C. geoides (подземной и надземной части, собранных в июле 2013 г. в окр. д. Казановка, Республика Хакасия) получали методом перколяции 40% этанолом, высушивали до постоянной массы, стандартизовали по содержанию m-кумаровой кислоты (8,6%). Комплексы БАС получали из сухого экстракта последовательным фракционированием: С-1Е – 96% этанолом, С-1А – водой. Изучение состава фенольных соединений фракций проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе «Agilent 1200» с диодноматричным детектором и системой ChemStation. Для идентификации фенольных соединений использовали стандартные образцы фенолокислот, кумаринов и флавоноидов. Методом внутренней нормализации определяли относительное содержание отдельных идентифицированных фенольных веществ в исследуемом образце. Количественное содержание компонентов приводится в пересчете на государственный стандартный образец (ГСО) кверцетина.

Влияние фракций на клеточный иммунный ответ изучали на 60 мышах-самках линии CBA/CaLac массой 18-20 г в возрасте 2-2,5 месяцев, полученных из отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии им. Е.Д. Гольдберга» СО РАМН

На стадии сенсибилизации фракции С-1А и С-1Е достоверно угнетали процесс формирования клона антигенспецифических Т-лимфоцитов (табл. 1), что привело к снижению индекса воспаления в 2,1 и 4,3 раза соответственно. На стадии разрешения введение животным фракции С-1А привело к достоверной стимуляции воспалительной реакции: увеличению индекса воспаления в 2,1 раза. Введение фракции С-1Е несколько увеличивало индекс воспаления, но недостоверно. Сравнение полученных данных с результатами ранее проведенных исследований [5] свидетельствует о том, что фракции БАС сухого экстракта C.geoides влияют на клеточноопосредованный иммунный ответ в целом так же, как цельный экстракт, однако угнетающее действие на сенсибилизирующей стадии иммунного ответа выражено сильнее. Кроме того, фракция С-1А, содержащая гидрофильные БАС, проявляет более выраженное стимулирующее действие, направленное на синтез провоспали-тельных цитокинов на разрешающей стадии иммунного ответа.

Результаты исследования. В результате проведенных исследований было выявлено, что фракции сухого экстракта C.geoides оказывают влияние на развитие ГЗТ, выраженное на стадии сенсибилизации и на стадии разрешения (табл. 1).

Таблица 1. Влияние препаратов C. geoides на клеточный иммунный ответ при постановке реакции ГЗТ (Медиана (25%÷75%), n=8-10)

Условия стимуляции

Индекс воспаления в реакции ГЗТ, %

1 схема ГЗТ

Без стимуляции (контроль)

13,14 (8,36÷18,31)

С-1А

6,13 (4,38÷7,70)*

С-1Е

3,05 (0,96÷5,12)*

2 схема ГЗТ

Без стимуляции (контроль)

12,25 (10,12÷15,45)

С-1А

25,60 (15,60÷37,70)*

С-1Е

16,70 (13,20÷20,00)

Примечание: * - различие достоверно при р ≤≤0,05 с показателями контроля

Далее исследовали химический состав водной и этанольной фракций сухого экстракта C.geoides. По времени удерживания стандартных веществ и УФ-спектрам 7 соединений были идентифицированы как гликозиды кверцетина и кемпферола, ванилиновая, галловая, м -кумаровая, п -кумаровая, ванилиновая, эллаговая кислоты (табл. 2).

Следует отметить, что в водную фракцию в значительной степени переходит соединение II (81,0%), эллаговая (61,78), галловая (53,67) и м -кумаровая кислоты (43,19%), 20-гидро-ксиэкдизон (100%); в этанольную фракцию сухого экстракта – соединение III (25,43%) кемпферол (16,88%), м -кумаровая кислота (36,41%). В составе изученных фракций БАС преобладают фенолокислоты (в том числе простые фенилпро-паноиды – фенолкарбоновые кислоты), извлекаемые и этанолом, и водой. Эти вещества могут отвечать за фармакологическую активность изучаемых фитопрепаратов.

Выводы: считаем выделение из сухого экстракта C.geoides комплекса действующих веществ нецелесообразным, так как цельный экстракт обладает совокупными фармакологическими эффектами фракций.

Таблица 2. Содержание фенольных соединений фракций сухого экстракта C. Geoides

Соединение

Время удерживания (t R ), мин

Спектральные данные λmax, нм

Содержание (% от общего содержания в сухом экстракте)

водная фракция С-1А

этанольная фракция С-1Е

галловая кислота

1,55

220, 280

53,67

18,27

м -кумаровая кислота

1,82

235, 320

43,19

36,41

ванилиновая кислота

4,83

210, 250, 290

19,54

8,42

соединение I

6,53

260, 330

31,65

21,46

п -кумаровая кислота

8,39

210, 290, 310

12,00

6,13

эллаговая кислота

21,60

255, 370

61,78

21,92

соединение II

32,18

290, 340

81,00

19,00

соединение III

36,90

255, 290

11,86

25,43

кверцетин

40,25

256, 370

11,64

6,30

соединение IV

44,45

220, 370

8,77

13,08

кемпферол

47,49

250, 360

11,13

16,88

соединение V

49,20

220, 370

17,68

3,92

соединение VI

51,80

255, 370

6,10

15,67

Список литературы Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ

  • Водолазова, С.В. Влияние препаратов колюрии гравилатовидной на фагоцитарную активность и цитокинпродуцирующую способность лейкоцитов периферической крови/С.В. Водолазова, Е.С. Агеева, Ю.В. Саранчина//Дни иммунологии в Сибири: мат-лы Всеросс. научно-практ. конф. с межд. участием (Абакан, 26-27 апреля 2011 г.). С. 192-194.
  • Водолазова, С.В. Антимикробная активность эфирных масел и водных извлечений из лекарственных растений Хакасии/С.В. Водолазова, М.А. Мяделец, М.Р. Карпова, Ю.В. Саранчина//Сибирский медицинский журнал. 2011. Т. 2. С.54-58.
  • Дутова, С.В. Иммунокорригирующее действие препаратов колюрии гравилатовидной при цитостатической болезни/С.В. Дутова, М.Р. Карпова, М.А. Мяделец//Дни иммунологии в Сибири: мат. Всеросс. научно-практ. конф. (г. Кызыл, 20-21 июня 2013 г.). С. 54-56.
  • Дутова, С.В. Протективное действие настойки Coluria geoides (Rosaceae) на модели генерализованной стафилококковой инфекции/С.В. Дутова, Н.П. Неделькина, М.Р. Карпова, В.Ю. Чумаков//Российский иммунологический журнал. 2012. Т. 3. С. 74-75.
  • Дутова, С.В. Влияние препаратов Сoluria geoides (Rosaceae) на клеточный иммунитет/С.В. Дутова, М.Р. Карпова, М.А. Мяделец//Российский иммунологический журнал. 2014. Т. 8(17), № 2 (1). С. 51-53.
  • Лусс Л.В. Вторичная иммунная недостаточность и иммунокомпрометированный пациент. В чем проблемы?//Аллергология и иммунология в педиатрии. 2007. № 2 (11). С. 3-10.
  • Хаитов, Р.М. Методические указания по изучению иммунотропной активности фармакологических веществ. В кн: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/Р.М. Хаитов, И.С. Гущин, Б.В. Пинегин, А.И. Зебров. -М.: Медицина, 2005. С. 505-506.
Еще
Статья научная