Исследование биологически активных веществ сухого экстракта Coluria geoides (Rosaceae), стимулирующих клеточный иммунный ответ

Состояние современных пациентов часто        Цель исследования: оценить влияние

осложняется иммунодефицитами и нуждается в иммунокоррекции [6], поэтому важной задачей экспериментальной фармакологии является поиск новых и использование уже изученных лекарственных растений, обладающих иммуностимулирующим и иммунокорригирующим свойствами. Эфирномасличное растение сибирской флоры Coluria geoides (Pall.) Ledeb. ( Rosaceae ) – является перспективным источником биологически активных соединений (БАС) с противомикробной, иммуностимулирующей и иммунокорригирующей активностью, протек-тивным действием при стафилококковой инфекции [1-4]. Сухой экстракт этого растения проявил стимулирующее действие в отношении клеточного иммунного ответа [5], что представляется важным и интересным фактом, так как влияние на клеточный иммунитет может лежать в основе протективного действия препарата против внутриклеточных паразитов и опухолевого перерождения клеток. При разработке любого фитопрепарата обязательно встает вопрос о природе действующих веществ.

фракций сухого экстракта C. geoides, содержащих липо- и гидрофильные БАС, на различные стадии клеточного иммунного ответа.

Методика исследования. Сухой экстракт из сырья C. geoides (подземной и надземной части, собранных в июле 2013 г. в окр. д. Казановка, Республика Хакасия) получали методом перколяции 40% этанолом, высушивали до постоянной массы, стандартизовали по содержанию m-кумаровой кислоты (8,6%). Комплексы БАС получали из сухого экстракта последовательным фракционированием: С-1Е – 96% этанолом, С-1А – водой. Изучение состава фенольных соединений фракций проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на приборе «Agilent 1200» с диодноматричным детектором и системой ChemStation. Для идентификации фенольных соединений использовали стандартные образцы фенолокислот, кумаринов и флавоноидов. Методом внутренней нормализации определяли относительное содержание отдельных идентифицированных фенольных веществ в исследуемом образце. Количественное содержание компонентов приводится в пересчете на государственный стандартный образец (ГСО) кверцетина.

Влияние фракций на клеточный иммунный ответ изучали на 60 мышах-самках линии CBA/CaLac массой 18-20 г в возрасте 2-2,5 месяцев, полученных из отдела экспериментального биомедицинского моделирования ФГБУ «НИИ фармакологии им. Е.Д. Гольдберга» СО РАМН

На стадии сенсибилизации фракции С-1А и С-1Е достоверно угнетали процесс формирования клона антигенспецифических Т-лимфоцитов (табл. 1), что привело к снижению индекса воспаления в 2,1 и 4,3 раза соответственно. На стадии разрешения введение животным фракции С-1А привело к достоверной стимуляции воспалительной реакции: увеличению индекса воспаления в 2,1 раза. Введение фракции С-1Е несколько увеличивало индекс воспаления, но недостоверно. Сравнение полученных данных с результатами ранее проведенных исследований [5] свидетельствует о том, что фракции БАС сухого экстракта C.geoides влияют на клеточноопосредованный иммунный ответ в целом так же, как цельный экстракт, однако угнетающее действие на сенсибилизирующей стадии иммунного ответа выражено сильнее. Кроме того, фракция С-1А, содержащая гидрофильные БАС, проявляет более выраженное стимулирующее действие, направленное на синтез провоспали-тельных цитокинов на разрешающей стадии иммунного ответа.

Результаты исследования. В результате проведенных исследований было выявлено, что фракции сухого экстракта C.geoides оказывают влияние на развитие ГЗТ, выраженное на стадии сенсибилизации и на стадии разрешения (табл. 1).

Таблица 1. Влияние препаратов C. geoides на клеточный иммунный ответ при постановке реакции ГЗТ (Медиана (25%÷75%), n=8-10)

Примечание: * - различие достоверно при р ≤≤0,05 с показателями контроля

Далее исследовали химический состав водной и этанольной фракций сухого экстракта C.geoides. По времени удерживания стандартных веществ и УФ-спектрам 7 соединений были идентифицированы как гликозиды кверцетина и кемпферола, ванилиновая, галловая, м -кумаровая, п -кумаровая, ванилиновая, эллаговая кислоты (табл. 2).

Следует отметить, что в водную фракцию в значительной степени переходит соединение II (81,0%), эллаговая (61,78), галловая (53,67) и м -кумаровая кислоты (43,19%), 20-гидро-ксиэкдизон (100%); в этанольную фракцию сухого экстракта – соединение III (25,43%) кемпферол (16,88%), м -кумаровая кислота (36,41%). В составе изученных фракций БАС преобладают фенолокислоты (в том числе простые фенилпро-паноиды – фенолкарбоновые кислоты), извлекаемые и этанолом, и водой. Эти вещества могут отвечать за фармакологическую активность изучаемых фитопрепаратов.

Выводы: считаем выделение из сухого экстракта C.geoides комплекса действующих веществ нецелесообразным, так как цельный экстракт обладает совокупными фармакологическими эффектами фракций.

Таблица 2. Содержание фенольных соединений фракций сухого экстракта C. Geoides