Исследование почвы на загрязненность возбудителями кишечных паразитозов

Эпидемические данные о пораженности токсокарозом населения довольно противоречивы, хотя по очевидным причинам, все авторы сходятся в том, что пораженность сельского населения значительно выше, чем городского, так же как обсемененность почвы токсокарами [1, 5, 6, 7].

Наиболее часто используемым методом исследования почвы, с целью выявления яиц гельминтов, является комбинированный метод И.А. Романенко, где в качестве флотационной жидкости используется насыщенный раствор нитрата натрия [2].

На основании ранее примененного нами подхода для диагностики паразитозов [3], в данной работе была поставлена задача разработать новый метод выявления яиц гельминтов и простейших в пробах почвы.

Целью работы являлось улучшение выявления яиц гельминтов в пробах почвы, осуществление количественной оценки степени загрязненности почвы яйцами паразитических червей.

При использовании разработанной методики был проведён сравнительный анализ методов исследования почвы: метода И.А. Романенко и разработанного нами метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца Ascaris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 яиц на г песка. Яйца были получены из матки самки аскарид.

Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводили по следующей схеме: вначале готовили комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: 1. насыщенный раствор цинка хлорида (2 кг ZnCl 2 на 1 л воды); 2. насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды); 3. глицерин (Ч). Далее эти три компонента смешивали в соотношении 1:1:1. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляли. После центрифугирования (для этой цели пригодна центрифуга марки ЦЛС-3) в течение 3 мин при 800 – 1000 об/мин воду сливали, а в пробирки добавляли 150 мл трехкомпонентной флотационной смеси. Перемешивали палочкой и вновь центрифугировали 3 мин.

Пробирки устанавливали в штатив, доливали тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывали обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости.

Через 20 – 30 мин стекло снимали и микроскопировали. С целью повышения эффективности выявления яиц снятие препарата повторяли 2–3 раза.

При искусственном внесении в пробу почвы 100 яиц на грамм песка, не содержавшего яиц гельминтов или насекомых, метод Н.А. Романенко в нашем опыте позволил выявить от 1 до 5 яиц аскарида, авторский метод - от 7 до 12 яиц.

Недостатком данного метода является низкая удельная плотность флотационного раствора. Кроме того, насыщенный раствор нитрата натрия, а так же альтернативные растворы, предлагаемые в литературе (тиосульфата натрия и натриевой селитры) очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает выявление яиц гельминтов.

Эффективность выявления яиц в почве статистически достоверно отличается при оценке по критерию Стьюдента (уровне значимости 0,95) [6].

Таблица 1 - Результаты исследования проб почвы авторским методом

Район	Место сбора	Комбинированный метод
Московский	ДП	sp. Toxocara – 3 яйца
	ДС «Энже»	sp. Toxocara – 1 яйцо
	ДС комбинированного вида 314	sp. Toxocara – 3 яйца; пыльца американсокго клена
	ДС 291 (Жилплощадка)	sp. Toxocara – 1 неоплодотворенное яйцо
	ДП Парк моторостроителей	0
Кировский	ДС 313	sp. Strongylata – 2; яйца сободноживущих беспозвоночных.
	ДС 169	Споры грибов
	ДС 356	sp. Toxocara – 1
	ДС комбинированного вида 417	0
Авиастроительный	ДС 36	Свободноживущий червь
	ДС 172	0
	ДС 392	0
Вахитовский	ДС 255	пыльца
	ДС 312	Свободноживущий червь
	ДС 34	Пыльца Свободноживущий червь
Приволжский	ДС 373	Циста простейшего sp. Toxocara – 1, sp. Trichocephalus – 1.
	ДС 27	Пыльца
	ДС комбинированного вида 42	Яйца сободноживущих беспозвоночных
	ДП	sp. Strongylata – яйцо
Новосавиновский	ДC 122	sp. Trichostrongylus
	ДС 93	0
	ДС комбинированного вида 337	Свободноживущий червь
Советский	ДС 305	sp. Strongylata – яйцо и червь.
	ДС 352	0
	ДС 290	0

ДС – детский сад, ДП – песочница на детской площадке.

Разработанный нами метод позволил дополнительно     выявить     большее количество яиц аскарид, по сравнению с методом И.А. Романенко, что обусловлено использованием многокомпонентной флотационной смеси. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушали морфологию яиц паразитов и не создавали затруднений с морфологической идентификацией возбудителя. Каждый из них выполнял определенную функцию: хлористый цинк повышал плотность раствора, глицерин снижал время кристаллизации, увеличивая качество исследования, хлорид натрия снижал себестоимость анализа. Как правило, применение такого рода смесей позволяет повысить выявление яиц, ооцист и цист простейших, но требует проведение оптимизации состава смеси к каждому конкретному случаю [5, 8, 3, 4].

Кроме того предлагаемый нами способ позволяет вдвое сократить время проведения анализа. Это делает оправданным использование предлагаемого метода на практике и для проведения научных исследований.

Данный метод был применен для обследования песочниц в детских садах и на детских площадках различных районов города Казани, с целью выявления эпидемической и эпизоотологической картины загрязненности данных объектов яйцами геогельминтов (табл. 1).

Детские песочницы Казани являются потенциальным источником заражения токсокарозом, трихоцефалезом и аскаридозом.При практическом испытании данного метода в почве нами были выявлены яйца токсокар, трихоцефал, яйца членистоногих, а так же обнаруживались свободноживущие черви.

При исследовании данных проб почвы методом И.А.Романенко, лишь в песке с детской дворовой площадки из Московского района, были обнаружены яйца геогельминтов.

Кроме того, в г. Казани нами были исследованы пробы почвы с официальных пляжей: «Локомотив», «Изумрудный», «Глубокое озеро». Пляжи города нельзя считать безопасными с точки зрения возможности заражения токсокарами, так как яйца данных возбудителей не были нами обнаружены лишь на пляже «Голубое озеро».

Таким образом, предлагаемый способ позволяет     значительно     повысить эффективность выявления яиц в пробах почвы по сравнению с методом Н. А. Романенко и может использоваться на практике и при проведении научных исследований.

санитарно-паразитологических исследований».

эффективность               различных гельминтоовоскопических методов для диагностики неоаскаридоза телят. // Тр. ВИГИС. – Т. 41. – М. – 2005. – С. 2005. – С. 154 – 160.

эпидемиологическом анализе. –   М.:

«МЕДпресс-информ», 2004. – С. 21 – 26.

распространения     токсокароза     на территориях сельского и городского типов. // Мед. паразитол. – 2005. – № 3. – С. 36 – 39.

Метод исследования с использованием флотационной жидкости, состоящий из насыщенных растворов цинка хлорида и натрия хлорида, а также глицерина является эффективным для выявления яиц пробах почвы.

Lutfullin M. H, Lutfullinа N.A., Gizzatullin R. R., Dolbin D. A. Summary

The method of investigation using the flotation liquid consisting of saturated solutions of sodium chloride and zinc chloride, and glycerin is effective to identify eggs soil samples.