Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия силосной кормовой добавки микробиологического происхождения

Силос используется в кормлении жвачных животных в качестве источника легко высвобождаемой энергии и легкоусвояемой клетчатки, главным образом в молочном скотоводстве. Таким образом, сохранение или даже улучшение питательной ценности корма в процессе силосования представляет интерес для производителей молочной продукции. Сохранение качества силоса требует ограничения протеолитической активности микроорганизмов и развития аэробных условий [16]. Для консервации кормового сырья существуют препараты химического и биологического происхождения. В составе химических консервантов содержатся органические кислоты (муравьиная, уксусная, пропионовая), которые способствуют снижению рН консервируемой массы, увеличению содержания водорастворимых углеводов и обладают бактериостатическими свойствами. Однако химические консерванты требуют жесткого соблюдения условий хранения, транспортировки и применения, могут вызывать ожоги, имеют резкий и неприятный запах, обладают летучестью [11, 12, 16].

В последние годы большое внимание уделяется биологическим препаратам. Известно, что входящие в их состав микроорганизмы не только усиливают ферментацию силоса, но и улучшают эффективность использования корма, что отражается на увеличении молочной и мясной продуктивности скота

[3, 9]. Наблюдаемые эффекты можно объяснить способностью микроорганизмов, входящих в состав препаратов, ингибировать жизнедеятельность патогенной микрофлоры и улучшать функциональную активность желудочно-кишечного тракта [2-4, 13-15].

Консерванты на основе микроорганизмов, как правило, безопасны, поскольку не оказывают токсического действия, не вызывают раздражающего эффекта при контакте с кожей и слизистыми оболочками, не подвергают коррозии металлы [8].

Целью данного исследования является оценка раздражающего и сенсибилизирующего действия новой силосной кормовой добавки, что является обязательным при выполнении токсикологических исследований вновь разрабатываемых препаратов [1, 5-7, 10].

Материал и методы исследований. Исследования проведены в лаборатории ветеринарной биотехнологии отделения биотехнологии ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Опыты по определению раздражающего действия на кожу, конъюнктиву глаз и изучению сенсибилизирующих свойств кормовой добавки осуществляли в соответствии с требованиями, приведенными в нормативном документе [4].

Исследование раздражающего действия препарата на кожу проводили на пяти кроликах (самцах) живой массой от 2,5 кг до 3,0 кг каждый. Использовались животные со здоровой, неповрежденной кожей. За 24 часа до испытания выстригали шерсть на участках размерами 70×50 мм по обеим сторонам спины для выполнения аппликации и наблюдения. Препарат наносили в объеме 0,5 мл и распределяли на участке кожи 25×25 мм на левой стороне спинной поверхности туловища животных Правая необработанная сторона служила контролем, на нее наносили дистиллированную воду. Кожные реакции оценивали через 1, 24, 48 и 72 ч.

Оценку степени раздражения слизистых оболочек глаз проводили на пяти кроликах (самцах) живой массой от 2,5 кг до 3,0 кг каждый. Использовали животных без аномалий глаза. После осторожного отведения нижнего века от глазного яблока в конъюнктивальный мешок правого глаза каждого кролика закапывали 0,1 мл рабочего раствора препарата. Левый глаз, который оставался необработанным, служил в качестве контроля. Реакции, включая помутнение роговицы, покраснение или хемоз конъюнктивы, аномалии радужки, наличие выделений оценивали через 1, 24, 48 и 72 ч.

В исследовании выявления гиперчувствительности замедленного типа оценивали потенциальную способность биопрепарата оказывать кожное сенсибилизирующее действие на экспериментальных животных. Применяли метод закрытых накожных аппликаций. Тест проводили на здоровых молодых половозрелых морских свинках, обоего пола, массой 350-500 г, которых разделили на две группы: контрольную группу (n = 10, 5/пол) и группу, получавшую эпикутанные аппликации препарата (n = 20, 10/пол). Шерсть на изучаемых участках кожи тщательно выстригали за 24 ч до начала эксперимента размерами 20×20 мм. Далее исследуемым препаратом пропитывали гигроскопичную марлевую подушечку соответствующих размеров, прикладывали ее к выстриженному участку и фиксировали окклюзионной повязкой на 6 ч. Повторяли эту процедуру последовательно три дня в неделю в течение трех недель. Контрольным животным проводили все процедуры в том же режиме, используя при этом только контрольный раствор (дистиллированная вода). Через 14 дней после местной индукционной фазы проводили провокационную пробу на животных обеих групп способом однократной местной аппликации на выстриженный, интактный участок кожи каждого животного, используя исследуемый препарат. Удаляли фиксирующие приспособления и повязку через 6 ч. Через 24 ч оценивали состояние исследуемых участков. Повторный осмотр проводили через 48 ч после провокационного воздействия. Описывали и оценивали степень кожной реакции, включая эритему и отек, по Magnusson и Kligman [3].

Статистическую значимость различий между контрольной и опытными группами определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Статистическую значимость оценивали на уровне P≤0,05.

Результат исследований. При оценке раздражающего действия исследуемой кормовой добавки на кожу каких-либо реакций, в том числе отека и эритемы, отмечено не было. Рост шерсти на выстриженных участках по обеим сторонам спины у всех подопытных животных был сопоставимым. Чувствительность кожи к внешним раздражителям была сохранена.

Краткое изложение результатов опыта с раздражением слизистой оболочки глаз представлено в таблице 1. Любые наблюдаемые реакции регистрировали и давали оценку в соответствии с классификацией, представленной в ГОСТ Р ИСО 10993-10-2011. Через 48 ч после закапывания препарата у одного животного наблюдалась диффузная область помутнения роговицы (детали радужки хорошо различимы), а у другого кролика выявлено помутнение роговицы (детали радужки слегка затемнены), в то время как через 72 ч наблюдения обработанный глаз лишь одного животного показал диффузную область помутнения, при этом детали радужки были четко видны. Кормовая добавка через 24 ч после закапывания в конъюнктивальный мешок вызывала покраснение конъюнктивы и гиперемию кровеносных сосудов, но при дальнейших осмотрах наблюдали отсутствие покраснения и нормальное состояние сосудов, хемоза конъюнктивы и выделений из глаз отмечено не было.

Результаты оценки сенсибилизирующего действия кормовой добавки на экспериментальных животных приведены в таблице 2.

Таблица 1 – Результаты исследования раздражающих свойств кормовой добавки при постановке конъюнктивальной пробы

Таблица 2 – Результаты выявления гиперчувствительности замедленного типа методом закрытых накожных аппликаций

Примечание: * – Оценка степени кожной реакции проводилась по Magnusson и Kligman.

Средний балл реакции кожи = общий балл / n .

После проведения провокационной фазы опыта у животных контрольной группы кожных реакций не наблюдали. В опытной группе через 24 ч после провокации исследуемой кормовой добавкой у двух морских свинок отмечали умеренную, а у одной – очаговую (точечную) эритему. Спустя 48 ч наблюдения умеренная эритема сохранилась у одного животного, а у другого просматривалась дискретная (неоднородная) эритема.

Таким образом исследуемая кормовая добавка не вызывала раздражения кожи или проявления повышенной чувствительности у тестируемых животных, а при постановке конъюнктивальной пробы индуцировала минимальную и полностью обратимую реакцию.

Заключение. По результатам проведенных исследований было установлено, что испытуемая силосная кормовая добавка микробиологического происхождения      не      оказывает раздражающего и сенсибилизирующего действия.

Резюме

В статье представлены результаты исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия силосной кормовой добавки микробиологического происхождения в опытах на лабораторных кроликах и морских свинках. В исследовании раздражающего действия на кожу наблюдали отсутствие реакции. При постановке конъюнктивальной пробы отмечали минимальный и полностью обратимый ответ на препарат. При выявлении гиперчувствительности замедленного типа методом закрытых накожных аппликаций повышенная чувствительность к исследуемой кормовой добавке у тестируемых животных отсутствовала.