Изучение антибактериальной и фунгистатической активности средства для лечения и профилактики эндометритов у коров

Интенсификация молочного скотоводства, увеличение концентрации поголовья на ограниченных территориях способствуют снижению устойчивости организма животных к различным негативным агентам и создают неблагоприятные условия для воспроизводства стада. Отрицательное влияние на производительность предприятий оказывают акушерско-гинекологические заболевания животных, такие как эндометрит. Эндометрит является одной из основных причин бесплодия у коров, приводящей к высоким экономическим потерям [8, 11]. Воспалительные явления в матке у коров в послеродовый период составляют от 45 % до 60 % от общего числа заболеваний, что ведет к возникновению существенного экономического ущерба в сельском хозяйстве и снижению уровня развития современного животноводства [6].

Причинами возникновения эндометритов являются как инфекционные, так и неинфекционные факторы, основными из которых являются: снижение иммунитета, инфекции близлежащих органов, травмирование слизистой оболочки половых путей при отеле, нарушения при отделении последа, некачественное обеззараживание инструментов для родовспоможения, эндокринные и гормональные нарушения у животных во время беременности и родов [1-5, 7, 9, 10].

В практической ветеринарии большое внимание уделяется вопросам профилактики и лечения послеродовых эндометритов, основывающихся на применении антибактериальных средств, в частности антибиотиков, гормональных и других биологически активных препаратов. Однако несмотря на это их лечебная эффективность составляет не более 70-80 %. Заметим, что применение животным синтетических        антибактериальных препаратов способствует развитию антибиотикорезистентности, увеличению срока ожидания для использования в пищевых целях молока и мяса, что негативно        сказывается        на производительности сельскохозяйственных      предприятий.

Помимо этого, необходимость введения животным сразу нескольких препаратов значительно повышает трудоемкость процесса.

Все вышесказанное обуславливает значительный интерес зооветеринарных специалистов       к       акушерско- гинекологической патологии, считающих разработку        и        проведение профилактических     и     лечебных мероприятий по борьбе с бесплодием актуальной и серьезной проблемой.

Целью исследования явилось изучение      антибактериальной      и фунгистатической активности нового комплексного средства «Эндосептам» предназначенного для терапии и профилактики эндометритов у коров.

Материал и методы исследований. Экспериментальные исследования проведены в лаборатории ветеринарной биотехнологии ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань).

Исследованию подвергали новое комплексное средство «Эндосептам», предназначенное для профилактики и лечения эндометритов у животных, которое имеет в своем составе антисептический компонент из класса четвертичных аммониевых соединений, а также вспомогательные вещества, обеспечивающие миотропное, ранозаживляющее и противовоспалительное действия.

Антибактериальную и фунгистатическую активность средства определяли in vitro методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ, среда Китта-Тароцци, Сабуро бульон) с использованием полевых изолятов микроорганизмов, выделенных из вагинальной слизи больных эндометритом коров сельхозпредприятия Кукморского района Республики Татарстан. В качестве контроля использовали питательную среду с тестируемыми микроорганизмами без добавления композиции.

Для проведения эксперимента культуры бактерий-аэробов выращивали при температуре (37±1) ºС в течение 18- 24 часов на агаризованной среде МПА, содержащей (на 1000 см3 дистиллированной воды): пептон сухой ферментативный для бактериологических целей – 10,0 г, мясная вода – 10,0 мл, натрия хлорид – 5,0 г, агар микробиологический – 15,0 г. Анаэробные бактерии выращивали в вакууме при остаточном давлении 5-6 мм ртутного столба на кровяном сахарном агаре, содержащем (на 1000 см3 дистиллированной воды): триптоза – 10,0 г, мясной экстракт – 3,0 г, глюкоза – 10,0 г, NaCl – 5,0 г, агар – 15,0 г, дефибринированная кровь барана – 5 % при температуре (37 ± 1) ºС в течение 18-24 ч.

Культуры грибов выращивали в аэробных условиях при температуре от 27 ºС до 28 ºС в течение 48 ч на скошенном

Сабуро-агаре, содержащем (на 1000 см3 дистиллированной воды): глюкозу – 10,0 г; пептон – 10,0 г; дрожжевой экстракт – 5,0 г; NaCl – 0,25 г; агар – 20,0 г.

Для получения разведений жидкую среду разливали в стерильных условиях в 10 пробирок, в каждую по 2 см3. В первую пробирку вносили раствор испытуемой композиции в объеме 2 см3. После перемешивания из первой пробирки отбирали 2 см3 раствора и переносили в следующую пробирку, и так последовательно до предпоследней пробирки. В последнюю пробирку испытуемое средство не вносили, она служила контролем роста культуры.

Далее во все без исключения пробирки вносили по 0,2 см3 взвеси культур тест-бактерий, содержащей по стандарту мутности 2 млрд микр. клеток/см3. Пробирки встряхивали и помещали в термостат при 37 °С на 18- 24 часов. Учет результата вели по наличию или отсутствию роста бактерий в опытных пробирках.

Изучение фунгистатической активности проводили по аналогичной схеме, в жидкой питательной среде Сабуро. В качестве тест-культур использовали изоляты грибов рода Candida и Aspergillus , выделенные из влагалищной слизи коров. Пробирки встряхивали, помещали в термостат при 27 °С и наблюдали наличие роста в течение 2-7 суток.

За минимальную ингибирующую концентрацию принимали концентрацию средства, полностью предотвращающую формирование колоний при высеве на плотные питательные среды.

Сроки развития резистентности у микроорганизмов к разрабатываемому средству изучали путем последовательных пассажей на жидких питательных средах с концентрацией препарата (0,38 мкг/см3), предшествующей МИК, и контрольными посевами на плотные питательные среды, с внесением в лунки испытуемых составов. Учет результатов вели по размеру диаметра зоны задержки роста тест-организма.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ Microsoft Excel с применением дополнительной функции «анализ данных».

Результат         исследований.

Результаты                исследования антибактериальной и фунгистатической активности средства «Эндосептам» в отношении грамположительных, грамотрицательных бактерий и грибов представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Антибактериальная и фунгистатическая активность средства «Эндосептам» в отношении микроорганизмов, выделенных из вагинальной слизи больных эндометритом коров

Наименование патогена	Наличие / отсутствие роста, концентрация исследуемого средства (мкг/см3)										Кол-во пробирок ингибирования
	100	50	25	12,5	6,25	3,12	1,5	0,75	0,38	К
Escherichia coli	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	6
Proteus mirabilis	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	8
Proteus vulgaris	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	8
Staphylococcus aureus	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	8
Streptococcus pyogenes	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+	7
Fusobacterium necrophorum	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	8
Candida krusei	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+	8
Aspergillus fumigatus	-	-	-	-	-	-	-	+	+	+	7

Примечание: 1 «+» - рост бактерий; 2 «-» - отсутствие роста

По результатам проведенных исследований установлено, что исследуемая композиция обладает выраженным антибактериальным и фунгистатическим действием в отношении микроорганизмов, изолированных от больных эндометритом коров.

Так, минимальная ингибирующая концентрация в отношении E. coli,

P. mirabilis, P. vulgaris, Staph. aureus, F. necrophorum, C. krusei составила 0,75 мкг/см³. В отношении Strept. pyogenes и A. fumigatus 1,5 мкг/см³.

Далее проведено определение сроков развития резистентности у микроорганизмов к разработанному средству. Результаты представлены в т а б лице 2.

Таблица 2 - Развитие резистентности у микроорганизмов к Эндосептаму (n=3)

Тест-микроорганизм	Диаметр зоны задержки роста, мм / пассаж
	3	6	9
E. coli	13,3±0,41	13,0±0,0	12,7±0,41
S. aureus	11,3±0,82	10,7±1,63	10,3±1,47
C. krusei	16,3±0,41	16,0±0,0	16,0±0,41

Установлено, что развитие устойчивости к данному средству у тест-микроорганизмов в течение всего периода эксперимента не наступает.

Заключение. Новое комплексное средство «Эндосептам» обладает выраженным антибактериальным и фунгистатическим действием в отношении микроорганизмов, являющихся возбудителями эндометритов у коров в сельхозпредприятиях. Минимальная ингибирующая концентрация в отношении исследуемых микроорганизмов составила 0,75-1,5 мкг/см3. В течение 9 пассажей тест-микроорганизмы E. coli, S. aureus и C. krusei, выделенные из слизи больных эндометритом коров, резистентности к средству «Эндосептам» не приобретали.

Результаты могут быть использованы при разработке эффективных средств и методов профилактики и терапии эндометритов у коров, для повышения эффективности ведения молочного скотоводства сельскохозяйственными предприятиями.

Резюме

Акушерско-гинекологические заболевания широко распространены среди молочного скота. Целью исследования явилось изучение антибактериальной и фунгистатической активности нового средства для лечения и профилактики эндометритов у коров. По результатам проведенных исследований установлено, что исследуемая композиция обладает выраженным антибактериальным и фунгистатическим действием в отношении микроорганизмов, изолированных от больных эндометритом коров. Так, минимальная ингибирующая концентрация в отношении E. coli, P. mirabilis, P. vulgaris, Staph. aureus, F. necrophorum, C. krusei составила 0,75 мкг/см³. В отношении Strept. pyogenes и A. fumigatus 1,5 мкг/см³. В течение 9 пассажей тест-микроорганизмы E. coli, S. aureus и C. krusei, выделенные из слизи больных эндометритом коров, резистентности к средству «Эндосептам» не приобретали. Полученные результаты могут быть использованы при разработке эффективных средств и методов профилактики и терапии эндометритов у коров, для повышения эффективности ведения молочного скотоводства сельскохозяйственными предприятиями.