Изучение ассоциации генетического полиморфизма RS1800629 гена TNFA с развитием иммунного микротромбоваскулита у взрослых в Узбекистане

дение профилактических прививок на фоне или сразу после ОРВИ,очаги хронической инфекции, укусы насекомых; травмы и др. [4]. Однако зачастую фактор, приведший к возникновению иммунного микротромбоваску-лита, установить невозможно.

До настоящего времени окончательно не расшифрованы и патогенетические механизмы развития иммунного микротромбоваску-лита [5].Анализлитературы свидетельствует о возрастающем интересе к изучению значимости молекулярно-генетических маркеров в формировании этого заболевания [6, 7, 8], в частности генов провоспалительных цито- кинов, таких как фактор некроза опухоли-α (TNF-α), участвующих в формировании иммунного ответа, и установлению их роли в развитии иммунного микротромбоваскули-та [9].

TNF-α является цитокином, продуцируемым в основном активированными макрофагами [10]. Данный цитокин участвует в системном воспалении и в патогенезе воспалительных заболеваний. По данным Y. H. Yang et al. (2002), TNF-α увеличивается во время острой стадии болезни Шенлейн-Гено-ха и может усиливать связывающую активность антител IgA против эндотелиальных клеток [11]. Была оценена потенциальная роль TNF-α (rs1800629) полиморфизма в патогенезе болезни Шенлейн-Геноха [3, 14]. Од-нако,некоторые авторы приводят данные об отсутствии связи между генетическим полиморфизмом TNF-α (rs1800629) и развитием заболевания [9], а другие, наоборот, утверждают о ее наличии [13].

Таким образом, результаты существующих на сегодня исследований противоречивы,что обосновывает необходимость проведения дальнейших исследований в этом направлении.

Материал и методы. Висследованиевклю-чено 75 взрослых (основная группа) неродственных пациентовузбекской национальности с установленным диагнозом иммунный микротромбоваскулит (ИМТВ) на основании современных классификационных критериев EULAR, PRINTO и PreS (2010) [11], наблюдавшиеся в консультативно-диагностической поликлинике Научно-исследовательского института Гематологии и переливания крови МзРУз в период с 2017 по 2018 г. г. Из 75 пациентов с иммунным микротромбоваскулитом 41 — находились в стадии разгара (подгруппа «А») и 34 — в стадии ремиссии (подгруппа «В»)заболевания (медиана возраста пациентов составила — 43,5 ± 3,8 лет). Контрольную группу составили 73 здоровых неродственных лица узбекской национальности без воспалительных, аллергических, системных и почечных заболеваний в анамнезе,соответ-ствовавших по полу и возрасту обследованной группе пациентов.

ДНК выделяли из лейкоцитов венозной крови в соответствие со стандартным протоколом выделения ДНК [16]. Детекцию полиморфизма rs1800629 гена TNFα проводилось методом SNP-ПЦР на программируемом термоциклере фирмы «Applied Biosystems» 2720 (США), с использованием тест-систем компании «Литех» (Россия), согласно инструкции производителя.

Специфичность и количество амплифици-рованных фрагментов проверяли методом электрофореза в агарозном геле ( рисунок 1 ).

Рисунок 1. Электрофореграмма детекции полиморфизма rs1800629 гена TNF-α в группе контроля и пациентов с иммунным микротромбоваскулитом.

Статистический анализ результатов проведен с использованием пакета статистических программ «OpenEpi 2009, Version 9.3».

Результаты и обсуждение. Нами исследован биаллельный полиморфизм rs1800629 гена TNF-α, который представляет собой замену единственного нуклеотида гуанина на аденин (G/A). В наших наблюдениях у об-24

следованных пациентов с иммунным ми-кротромбоваскулитом (n = 75) в сравнении с группой контроля частота встречаемости неблагоприятного аллеля A возрастает 1,7 раза — с 7.3 % (в популяции) до 12.7 % с колебаниями от 10.3 % у пациентов «В» подгруппы и до 14.6 % у пациентов «А» подгруппы ( таблица 1 ).

Таблица 1.

Анализ результатов исследования полиморфизма rs1800629 гена TNF-α в группах пациентов с иммунным микротромбоваскулитом и группе контроля

Группа	n	Частота аллелей				Частота распределения генотипов
		G		A		G/G		G/A		A/A
		n	%	n	%	N	%	n	%	n	%
Основная группа ИМТВ	75	131	87.3	19	12.7	56	74.7	19	25.3	0	0
«А» подгруппа	41	70	85.4	12	14.6	29	70.7	12	29.3	0	0
«В» подгруппа	34	61	89.7	7	10.3	27	79.4	7	20,6	0	0
Контрольная группа	73	135	92.3	11	7.3	62	84.9	11	15.1	-	0

Достоверное увеличение частоты носительства неблагоприятного аллеля A в основной группе пациентов с иммунным микротромбоваскулитом (χ2 = 3.21; Р = 0.073; OR = 2.0; 95 % CI 0.93–4.31), а в подгруппах пациентов «А» — до 14,6 % (χ2 = 4.89; Р = 0.027;

Таблица 2.

Ассоциативная связь между полиморфизмом rs 1800629 гена TNF-α и риском развития ИМТВ в сравнение с контролем

OR = 2.53; 95 % CI 1.09–5.89) и «В» — до 10.3 % (χ² = 0.46; Р = 0.50; OR = 1.41; 95 % CI 0.52–3.81) свидетельствует об ассоциации данного аллеля c повышенным риском развития иммунного микротромбоваскулита в «А» подгруппе ( табл. 2 ).

		Статистическое различие
Исследуемые	Аллели	Relativerisk		Oddsratio			p-value (достоверность)
группы	и генотипы	(относител	ьный риск)	(отношени	е шансов)	χ2
		RR	95 % CI:	OR	95 % CI:
	G	0.74	0.56–0.98	0.50	0.23–1.08	3.21	0.073
	A	1.34	1.02–1.78	2.00	0.93–4.31
Основная группа (n = 75)	G/G	0.71	0.52–0.97	0.46	0.20–1.03	3.65	0.056
	G/A	1.41	1.03–1.94	2.19	0.97–4.96
	A/A	—	—	—	—	—	—
ИМТВ	G	0.60	0.40–0.89	0.40	0.17–0.92	4.89	0.027*
	A*	1.67	1.12–2.49	2.53	1.09–5.89
с геморрагическим	G/G
синдромом		0.54	0.34–0.87	0.34	0.14–0.85	5.58	0.018*
(n = 41)	G/A*	1.85	1.15–2.95	2.92	1.18–7.26
	A/A	—	—	—	—	—	—
ИМТВ	G	0.80	0.43–1.48	0.71	0.26–1.92	0.46	0.50
	A	1.25	0.68–2.31	1.41	0.52–3.81
без геморрагического	G/G	0.78	0.40–1.51	0.68	0.24–1.96
синдрома						0.51	0.48
(n = 34)	G/A	1.28	0.66–2.48	1.46	0.51–4.18
	A/A	—	—	—	—	—	—

Примечание: * — статистическое различие по сравнению с контрольной группой.

Следует отметить,что в контрольной выборке иу пациентов с иммунным микротром-боваскулитом встречались только дикий G/G и гетерозиготный G/А генотипы,а носительство неблагоприятного редкого генотипа А/А не выявлено (таблица 1). Наряду с этим, в группе пациентов,в сравнении с контролем в 1,7 раза чаще регистрировали гетерозиготный G/А генотип (25.3 % % против 15.1 %), при этом наибольший процент носительства данного генотипа отмечался в «А» подгруппе пациентов (29.3 %).

Распределениечастоты носительства гетерозиготного генотипа G/А в основной группе пациентов с иммунным микротромбоваску-литом (25.3 % против 15.1; χ2 = 3.65; Р = 0.056; OR = 2.19; 95 % CI 0.97–4.96), а в подгруппах пациентов «А» (29.3 % против 15.1; χ2 = 5.58; Р = 0.018; OR = 2.92; 95 % CI 1.18–7.26) и «В» (20.6 % против 15.1 %; χ2 = 0.51; Р = 0.48; OR = 1.46; 95 %CI 0.51–4.18) свидетельствует обассоциацииданногоаллеля cповышенным риском развития иммунного микротромбо-васкулита в «А» подгруппе (таблица 2).

Вышеописанная частота распределения генотипов полиморфизма rs1800629 гена TNFα (H obs ) как в основной группе больных, так и в контрольной группе соответствовала ожидаемому распределению (H_exp) согласно равновесию Харди-Вайнберга.

При этом замечено,что у пациентов с иммунным микротромбоваскулитом индекс гетерозиготного дефицита при полиморфизме rs1800629 гена TNFα имеет не очень высокий уровень (от 0.25 до 0.22, соответственно), ав контрольнойвыборке — низкий(значение H obs от H_exp были равны 0.15 и 0.14, соответственно), подтверждающие низкий уровень гетерозиготности этого локуса в контроле. При этом, относительное отклонение ожидаемой гетерозиготности от наблюдаемой в обеих группах оказалось положительным (+0.13 и +0.07).

Данное обстоятельство позволяет утверж-дать,что гетерозиготный G/А генотип полиморфизма rs1800629 гена TNF-α достоверно ассоциирован с развитием иммунного ми-кротромбоваскулита у лиц узбекской наци-ональности.Вероятно,это связано с потерей протективного эффекта дикого G/G генотипа у лиц с гетерозиготным типом полиморфизма гена TNF-α (rs1800629), вследствие чего могут развиваться повреждение эндотелия микрососудов.

Носительство редкого гомозиготного генотипа А/А в исследованных группах не вы-явлено,что вероятно связано с эффектом «селективного отбора против неблагоприятного генотипа», т. к. этот полиморфный вариант гена TNF-α ассоциирован с ранним проявлением множественных патологий.

Таким образом, полученные результаты показывают ассоциацию гетерозиготного варианта G/A гена TNFα (rs1800629) с развитием стадии разгара иммунного микротромбо-васкулита у лиц узбекской национальности. Эти результаты вносят вклад в формирование фундаментальных представлений о мо- лекулярно-генетических основах и патогенетических механизмах развития иммунного микротромбоваскулита в Узбекистане.

Заключение. Иммунный микротромбова-скулит является заболеванием, этиопатоге-нетические механизмы которого до настоящего времени до конца не изучены [2, 5]. На сегодня существуют ряд мнений и утверждений, что решающую роль в патогенезе иммунного микротромбоваскулита определяют генетические полиморфизмы [7, 8] . До настоящего времени проведено множество молекулярно-генетических исследований по изучению роли генов в формировании иммунного микротромбоваскулита. Однако данные проведенных исследований в разных популяциях носят противоречивый характер, что возможно связано с этническими различиями с предрасположенностью к развитию данного заболевания.В литературе описываются результаты исследований по изучению роли гена фактора некроза опухоли-α (TNF-α) — провоспалительного цитокина,принимающего участие в системном воспалении и в патогенезе воспалительных заболеваний [11]. По данным Ding GX et al.(2016) [13] аллельА полиморфизма G308A гена TNF-α увеличивает риск развития иммунного микротролмбоваскулита, тогда как другие авторы не обнаружили ассоциацию гена TNF-α с развитием заболевания [9].

В настоящем исследовании изучена генетическая ассоциация между развитием иммунного микротромбоваскулита и полиморфизмом гена TNF — α (rs1800629). Результаты наших исследований показали, что частота встречаемости аллеля А (14.6 % против 7.3 %) и гетерозиготного G/А генотипа (29.3 % против 15.1 %) гена TNF — α (rs1800629) в группе пациентов с иммунным микротромбоваскулитом в стадии разгара значимо выше по отношению к контрольной группе,что в свою очередь свидетельствует о возможном участии указанного полиморфизма в патогенезе заболевания.

Анализируя на сегодняшний день результаты проведенных исследований по изучению молекулярно-генетических механизмов развития иммунного микротромбоваскули-та, учитывая их противоречивый характер очевидно, что генетический механизм развития заболевания является весьма сложным и до конца не изученным.