Изучение фармакологических свойств нового средства для профилактики микотоксикозов

В современных реалиях добавление ветеринарных препаратов и кормовых добавок, обладающих антитоксическими свойствами, к основному рациону сельскохозяйственных птиц и животных стало рутиной [6]. Вместе с тем, разнообразие эффективных средств профилактики микотоксикозов ограничено, поэтому разработка профилактических схем, включающих фармакологические композиции, способные восстанавливать нарушенные функции снижать детоксикацию организма животных является значимым научным вопросом [4].

Животноводческая отрасль очень сильно нуждается в комплексных препаратах, обладающих способностью уменьшать содержание и биологическую активность микотоксинов; нормализовывать процессы, происходящие в организме продуктивных животных; имеющих иммуностимулирующее, детоксицирующее, гепатопротективное свойства [5]. Использование средств с широким спектром фармакологической активности способствует не только снижению токсического воздействия микотоксинов и увеличению устойчивости организма животных к желудочнокишечным заболеваниям; снижению последствий стрессовых ситуаций (отъем, перевод в новую технологическую группу, смена рецептуры кормления); увеличению конверсии корма, продуктивности и сохранности животных [3].

В последнее время большое внимание уделяется ферментам, обладающим оксидоредуктазной, гидролитической и трансферазной активностью, за счет чего проявляется их свойство трансформировать микотоксины. Для консервации комбикормов и зерна, изготовлении силоса применяются органические кислоты, это позволяет снизить концентрацию водородных ионов, рост микроорганизмов [7].

Материал и методы исследований. Основной объект исследований – разработанное средство, предназначенное для профилактики микотоксикозов у животных и обладающее антимикробными свойствами.

Исследуемое средство состоит из адсорбента клиноптилолита древних залежей органоминерального происхождения, обработанного в микронизаторе и имеющего более широкий спектр адсорбции, и органических кислот, подобранных по совместимости и их механизму действия.

Определение общей токсичности кормов проводилось в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсичности кормов, кормовых добавок и сырья для производства кормов в биопробе на лабораторных животных» [2]. Микологические исследования кормов осуществляли в соответствии с «Методическими указаниями по выделению и количественному учету микроскопических грибов в кормах, кормовых добавках и сырье для производства кормов» [1]. Анализ кормов на содержание микотоксинов проводили по методикам, разработанным во ВНИИВСГЭ методом ИФА.

Биохимические исследования показателей крови проводились на биохимическом анализаторе согласно методическим рекомендациям по применению наборов реагентов «ДиаВетТест» для биохимических исследований сыворотки (плазмы) крови животных на автоматических и полуавтоматических анализаторах. – Москва: ФГБУ ЦНМВЛ, Россельхознадзор, 2018. Руководство пользователя. Автоматический биохимический анализатор DIRUI CS-600 (Dirui Industrial Co., Ltd, Китай), № 220600BCS0014K, 2021.

Гематологические исследования проводились согласно руководству пользователя. Анализатор гематологический автоматический URIT-5160 Vet (URIT Medical Electronic Co., Китай). Госреестр № 76807-19.

Кормление проводилось согласно методикам содержания лабораторных животных. Ежедневно в течение всего опытного периода проводились наблюдения за физиологическим состоянием животных всех групп (контроль массы тела, учет сохранности).

В опыте для изучения фармакологических свойств и выявления эффективной дозы разработанного средства был смоделирован сочетанный микотоксикоз с содержанием двух микотоксинов – Афлатоксина В1 с концентрацией 0,001 мг/кг и Т-2 токсин с концентрацией 0,04 мг/кг, что соответствует предельно допустимым концентрациям.

Для эксперимента по принципу аналогов было сформировано пять групп по 10 крыс в каждой со сходной массой тела, физиологическим состоянием и возрастом: первой группе крыс (контрольной) скармливался доброкачественный корм; второй группе – корм, содержащий микотоксины; третьей группе – корм с содержанием микотоксинов, в который вводилось исследуемое средство в дозе 1,0 г/кг корма; четвертая группа – корм с содержанием микотоксинов и исследуемым средством в дозе 2,0 г/кг корма; пятая группа – корм с содержанием микотоксинов, в который вводилось исследуемое средство в дозе 3,0 г/кг корма. Продолжительность опыта составила 30 дней.

Ежедневно проводилось наблюдение за состоянием животных, участвующих в эксперименте, контроль массы тела осуществлялся на 15 и 30 дни опыта. По окончанию исследований осуществляли взятие проб крови у пяти животных из каждой группы с целью оценки гематологического и биохимического гомеостаза.

По результатам изучения динамики массы животных, участвующих в эксперименте (Таблица 1), было установлено, что минимальная прибавка в весе за время проведения опыта была во второй опытной группе и составила 0,99 г в сутки.

Малый набор массы тела у животных второй опытной группы обусловлен токсическим воздействием продуктов метаболизма грибов, который проявляется ослаблением аппетита, нарушением функционирования органов пищеварения, истощением компенсаторных функций организма и поражением жизненно важных органов. В контрольной группе прирост массы тела составил 2,89 г в сутки, в третьей опытной группе –1,39 г в сутки, в четвертой и пятой опытных группах – 1,75 и 2,22 г в сутки соответственно.

Таким образом, наибольший прирост массы тела крыс регистрировался в четвертой и пятой группах, где применялось исследуемое средство в дозе

2,0 и 3,0 г на килограмм корма.

К концу экспериментального периода межгрупповые различия массы тела крыс второй опытной группы относительно контрольных аналогов составили 25,6 %, третьей опытной группы – 19,7 %; четвертой опытной группы – 15,2 % и пятой опытной группы 8,49 % соответственно в сторону их снижения.

Результаты гематологических исследований крови крыс представлены в таблице 2.

Таблица 1 – Динамика массы тела крыс на фоне содержания микотоксинов в основном рационе и применении средства клиноцил (M±m; n=10)

Группа	Масса тела (г)
	День эксперимента
	1	15	30
1 – Контрольная, корм без микотоксинов	133,7±0,35	179,3±0,96	220,4±0,97
2 – Опытная (корм содержащий микотоксины)	134,1±0,33	148,7±1,46	163,9±2,9
3 – Опытная (корм, содержащий микотоксины) + средство 1,0 г /кг	135,3±0,21	163,2±0,95*	177,1±1,11
4 – Опытная (корм содержащий микотоксины) + средство 2,0 г /кг	134,3±0,23	168,3±1,10	186,9±1,05
5 – Опытная (корм содержащий микотоксины) + средство 3,0 г /кг	135,0±0,11	176,1±0,82	201,7±0,72

Примечание: степень достоверности *Р≤0,05 по отношению к контролю

Таблица 2 – Гематологические показатели на фоне содержания микотоксинов в основном рационе с применением исследуемого средства (М±m; n=10)

Показатели	Группы
	1 контрольная	2 опытная	3 опытная	4 опытная	5 опытная
Лейкоциты, 109/л	10,9±0,46	9,3±0,43	9,8±0,41	10,1±0,45	10,5±0,45
Эритроциты, 1012/л	10,2±0,23	7,9±0,23*	8,1±0,52	9,5±0,36**	9,1±0,36
Тромбоциты, 109/л	458,2±29,29	433,0±17,67	436,8±20,83	442,2±15,88	441,2±15,88
Гемоглобин, г/л	156,4±4,87	173,6±4,27	168,2±5,05	155,2±3,09	156,2±3,09
Лейкоцитарная формула, %: Эозинофилы	2,9±0,58	2,0±0,51	2,1±0,35	2,5±0,40	2,8±0,40
Нейтрофилы палочкоядерные	2,7±0,24	6,4±0,24	5,2±0,37	2,1±0,32	2,0±0,32
сегментоядерные	24,2±0,58	23,7±0,73	23,5±0,66	22,9±0,58	22,2±0,58
Лимфоциты	68,6±0,66	60,2±0,93	63,1±0,84	68,4±0,60	69,5±0,60
Моноциты	1,5±0,40	4,0±0,45*	3,8±0,37	2,2±0,37	2,1±0,37
Базофилы	0,12±0,01	3,7±0,03*	2,3±0,01	1,9±0,02	1,4±0,04
СОЭ (по Панченкову)	2,2±0,60	3,1±0,33*	2,9±0,53	2,0±0,42	2,1±0,42

Примечание: степень достоверности * Р≤0,05; ** Р≤0,001 по отношению к контролю

При анализе полученных результатов можно увидеть, что показатели первой, четвертой и пятой опытных групп находились в пределах физиологических значений, при этом межгрупповая разница была незначительной. Во второй и третьей опытных группах по сравнению с показателями контроля отмечены некоторые различия, проявляемые снижением уровня лейкоцитов на 14,7 и 10,1 %, эритроцитов – на 22,6 (р≤0,05) и 20,5 %, увеличением концентрации гемоглобина на 11,0 и 7,54 % и СОЭ – на 40,1 (р≤0,05) и 31,8 %. Все это может свидетельствовать о хроническом токсическом процессе, вызванным действием микотоксинов. В четвертой и пятой опытных группах с применением исследуемого средства в дозах 2,0 и 3,0 г на кг корма токсическое влияние микотоксинов не проявлялось.

Биохимические показатели крови крыс определяли на 30 день опыта. Результаты свидетельствуют о том, что у животных второй и третьей групп концентрация общего белка в динамике уменьшилась на 41,3 и 22,9 % в сравнении с животными контрольной группы, получавшими доброкачественный корм (Таблица 3).

Подобные изменения проявляются при расстройствах пищеварения, паренхиматозных поражениях печени, белковом нарушении обмена веществ. У животных второй и третьей опытных групп содержание мочевины повысилось на 18,0 (р≤0,05) и 14,7 % в сравнении с интактными животными первой группы. Полученные данные могут свидетельствовать о нарушении работы органов выделения и детоксикации.

Таблица 3 – Биохимические показатели сыворотки крови крыс в конце опыта на фоне содержания микотоксинов в основном рационе с применением исследуемого средства (М±m;

n=10)

Показатели	Группы
	1 контроль	2 опытная	3 опытная	4 опытная	5 опытная
Общий белок, г/л	72,8±1,46	51,5±1,10	59,2±1,17	70,2±1,70	72,1±1,74
Мочевина, ммоль/л	7,81±0,26	9,22±0,23*	8,96±0,21	7,05±0,20	7,06±1,24
Холестерин ммоль/л	4,32±0,11	1,06±0,10	2,08±0,14	2,99±0,13	3,97±0,15
Глюкоза, ммоль/л	12,4±0,54	9,1±0,51	10,1±0,63	12,9±0,53	11,9±0,50
Триглицериды, ммоль/л	1,11±0,07	2,0±0,08	1,94±0,03	1,10±0,07	1,11±0,09
АлАт, Ед/л	32,8±2,03	74,3±1,90**	64,7±1,91*	43,9 ±3,31	44,2±3,31
АсАт, Ед/л	82,7±2,51	98,4±2,95	94,2±3,29	89,1±1,96	87,9±1,93
Кальций общий, ммоль/л	2,51±0,11	2,18±0,11	2,12±0,09	2,46±0,08	2,56±0,10
Фосфор неорганический, ммоль/л	2,05±0,07	2,9±0,09	2,98±0,09	2,04±0,10	2,07±0,14

Примечание: степень достоверности * Р≤0,05 по отношению к контролю

Увеличение уровня мочевины служит ранним признаком развития почечной недостаточности. Кроме того, у крыс второй и третьей опытных групп регистрировалось повышение ферментов печени – аланинаминотрансферазы – в 2,26 (Р≤0,001) и 1,97 (Р≤0,05) раза и аспартатаминотрансферазы – на 19,0 и 13,9 % по сравнению с животными, получавшими корм без микотоксинов.

Заключение . Новое исследуемое средство для профилактики микотоксикозов обладает выраженным детоксицирующим свойством. Его применение в дозировке 3,0 г/кг корма позволяет минимизировать негативные последствия от поступления микотоксинов в организм лабораторных животных (крыс) с кормом.