Изучение фунгицидного действия нового биоцидного препарата

Одной из наиболее острых проблем в сельском хозяйстве является проблема хранения продуктов, кормов, добавок, препаратов и т.п. Помещения, обычно используемые в этих целях – подвалы, склады, овощехранилища и т.п., как правило, имеют недостаточную вентиляцию, что приводит к сырости и появлению различных грибков. Это неизбежно ведет к порче хранящейся продукции [1,2,3].

Так, грибки очень быстро поражают практически любые поверхности, на которых поселяются, а продукты, корма и т.п. делают непригодными, отравляя их токсинами [4,5].

В связи с изложенным, целью наших исследований явилось изучение фунгицидных свойств новой моюще-дезинфицирующей композиции.

Материалы и методы. Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики; утв. ГУВ МСХ СССР 27.12.87г, методическими рекомендациями по ускоренному определению устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам от 10.01.2002 г.

В опытах использовали рабочий раствор новой моющедезинфицирующей композиции в концентрации 1, 2, 3 % и экспозициях 15, 30, 60 минут, опыты проводили без органической защиты.

Тест-культуры грибов: Penicillium expansum;  Ascosphaera apis;

Aspergillus fumigatus.

Для исследования фунгицидной активности препарата использовали кусочки обезжиренного батиста, размером 0.5–1.0 см, стерилизованного в автоклаве. Нужное для исследования количество стерильного батиста клали в стерильную чашку Петри и заливали 10–20 мл 2–х миллиардной взвеси культуры грибов. После внесения импрегнированных культурой тест–объектов в дезинфицирующий раствор и экспозиции (15, 30, 60 мин), проводили промывку “носителей” в стерильной дистиллированной воде. Далее производили посев на питательную среду (Сабуро) с последующей инкубацией в термостате.

В качестве контроля фунгицидного действия нового дезосредства использовали стерильный изотонический раствор NaCl.

Для изучения обеззараживающих свойств нового препарата использовали трансмиссионную электронную микроскопию. Для этого образцы фиксировали в 4%-ном растворе параформальдегида при +4оС в течение 48 ч. Взвесь культуры грибов центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин. Тест-образцы разрезали на две части, которые складывали стопкой. Затем тест–образцы и полученный после центрифугирования осадок дофиксировали 1%-ным раствором осмиевой кислоты, обезвоживали по стандартной методике в растворах этилового спирта возрастающей концентрации и ацетоне, и заливали в смесь эпон-аралдит. Ультратонкие срезы готовили на микротоме Райхерт-Янг (Австрия). Срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Исследовали в электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония), фотосъемку проводили с помощью встроенной цифровой камеры Jeol и цифровой камеры бокового ввода Veleta (SIS, Германия).

Результаты исследований и их обсуждение. В отношении P. еxpansum и As. apis фунгицидный эффект препарата отмечен при воздействии 2%-ной концентрации и 60-и минутной экспозиции, на A. fumigatus обеззараживающее действие оказывала 3%-ная концентрация при 30 минутной экспозиции (таблица).

1. Фунгицидные свойства нового препарата

Концентрация, в % (по препарату)	Экспозиция, в мин	Культуры грибов
		Penicillium expansum	Ascosphaera apis	Aspergillus fumigatus
1,0	15	+	+	+
	30	+	+	+
	60	+	+	+
2,0	15	+	+	+
	30	+	+	+
	60	-	-	+
3,0	15	+	+	+
	30	-	-	-
	60	-	-	-
Контроль NaCl		+	+	+

Примечание: (+)-рост; (-)- отсутствие роста.

При электронно-микроскопическом исследовании нативного препарата тест-культуры P. еxpansum в полях зрения определяли:

экзоперидиум (фигурная стрелка), более толстый и светлый слой – мезоперидиум (белая стрелка) оптически плотную цитоплазму (стрелка) (рис. №1).

После воздействия 2%-ной концентрации и экспозиции 60 минут наблюдали полную утрату оболочки гиф (отсутствие экзоперидиума и мезоперидиума), эти изменения приводили к дальнейшему лизису гиф (рисунок 2).

Рисунок № 1.

Заключение. В результате исследований установлено, что новый многофункциональный биоцидный препарат обладает фунгицидным действием. При электронно-микроскопическом исследовании установлено, что после воздействия рабочих растворов препарата наблюдается полная утрата оболочки гиф грибов (отсутствие экзоперидиума и мезоперидиума), эти изменения приводили к дальнейшему лизису гиф, механизм фунгицидного действия связан с разрушением оболочки гиф грибов.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Белова, В.И. Основные направления исследований по разработке дезинфицирующих препаратов / В.И. Белова, Л.И. Арефьева, В.Е. Лиманов и др. // Актуальные вопросы совершенствования дезинфекционных и стерилизационных мероприятий. Ч.2 – М., 1990. С. 137 – 141. 2. Джупина, С.И. Контроль эпизоотических процессов факторных инфекционных инфекционных болезней /С.И. Джупина// Теор. и практ. аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях: Междунар. конф. (3-4 октября 2000 г., Воронеж). – Воронеж, 2000. – С. 169 – 170. 3. Кузнецова, Л.С. Состав плесневых грибов, поражающих поверхность мясной продукции / Л.С. Кузнецова, Н.В. Михеева, Е.В. Казакова, С.М. Озерская, Н.Е. Иванушкина // Мясная индустрия.-2009.-№3.-С.28-30. 4. Reybrouck, G. The testing of disinfectants / G. Reybrouck // Intern. Biodeterioration and Biodegradation. – 1998. – №41. – Р. 269 – 272. 5. Lawrence, Е. Advisory Committee on Dangerous Pathogens (ACDP) seminar on microbiological risk assessment 28 January 1997 / E. Lawrence // J. of Applied Microbiology.-1997.-№ 83.- P. 659-664.

ИЗУЧЕНИЕ ФУНГИЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА

Софронов В.Г., Аржаков В.Н., Николаенко Н.Н., Николаенко Т.М., Аржаков П.В.

Резюме

Коллективом авторов проведены экспериментальные исследования по оценке фунгицидного действия нового многофункционального препарата предназначенного для одновременной мойки, дезинфекции и обезжиривания. В опытах использовали рабочий раствор новой биоцидной композиции в концентрации 1, 2, 3 % и экспозициях 15, 30, 60 минут, опыты проводили без органической защиты. Тест-культуры грибов: Penicillium expansum; Ascosphaera apis; Aspergillus fumigates. По результатам исследований установлено, что в отношении P. еxpansum и As. apis фунгицидный эффект препарата отмечен при воздействии 2%-ной концентрации и 60 минутной экспозиции, на A. fumigatus обеззараживающее действие оказывала 3%-ная концентрация при 30 минутной экспозиции. При электронно-микроскопическом исследовании установлено: после воздействия 2%-ной концентрации и экспозиции 60 минут наблюдали полную утрату оболочки гиф (отсутствие экзоперидиума и мезоперидиума), эти изменения приводили к дальнейшему лизису гиф.

NEW STUDY FUNGICIDAL ACTION BIOCIDE

Sofronov V.G., Arzhakov V.N., Nikolaenko N.N., Nikolaenko T.M., Arzhakov P.V.