Изучение хронической токсичности кормовой добавки кобаметин на лабораторных животных

Минеральные вещества являются одними из важнейших питательных веществ, необходимых для различных катаболических и анаболических биохимических реакций, и физиологических функций в организме, а также для оптимального роста, производства и размножения у животных. Биодоступность многих минералов, присутствующих в кормах, оставляет желать лучшего, и минеральные добавки часто необходимы в больших количествах по сравнению с фактическими потребностями на клеточном уровне [5, 6].

Применение полифункциональных кормовых добавок и комплексных препаратов, в которых содержатся жизненно важные компоненты для здоровья животных, позволяет совершенствовать деятельность их функциональных систем и органов [2, 7].

Хелатные соединения обладают широким спектром биологического действия, начиная от увеличения ферментативной активности многих важных ферментов, а также обеспечения процессов защиты организма от неблагоприятных внешних факторов. Одним из них является кобальт, который образует ряд биологически активных комплексных соединений со многими белками и тканями организма. Находят его в составе сывороточных белков, он имеет способность встраиваться в молекулу некоторых аминокислот. Находящийся в печени кобальт, более чем на 40 % связан с белковыми фракциями. Большая роль отводится кобальту в формировании липидных и белковых структур нервных тканей, в частности, миелинового слоя нервных тканей. За счет включения кобальта в состав коферментной части многих ферментов, участвующих в процессе метаболизма основных нутриентов белков, жиров и углеводов, активизирует их каталитические функции [1, 3].

Важную роль в организме играет кровь, которая несет информацию, отражающую происходящее в органах и тканях, состав крови может меняться в зависимости от возраста, продуктивности, сезонности, условий кормления и содержания животных, все параметры показателей отражаются в гематологических и биохимических исследованиях [4, 7].

Целью настоящих исследований явилось изучение действия новой кормовой добавки кобаметин при длительном введении на сохранность; динамику живой массы тела; гематологические и биохимические показатели белых крыс в хроническом опыте.

Материал и методы исследований. Научно-исследовательская работа проводилась в научноиспытательном цетре Ветфармбиоцентр, являющийся структурным подразделением

ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И. Т. Трубилина».

В качестве объекта исследований использовали     кормовую     добавку кобаметин, которая представляет собой комплексное соединение кобальта с 2 амино-метил-тио-(З-оксо-З-амино) масляной кислоты.

В начале и конце эксперимента проводились взвешивания лабораторных крыс с использованием лабораторных весов ВК-3000 производства АО «МассаК» (Россия). В конце эксперимента у всех подопытных крыс под общей анестезией был осуществлен забор крови.

Для проведения общего анализа крови использовался автоматический анализатор, позволяющий измерять широкий    спектр гематологических параметров URIT-5160 Vet, производства

URIT Medical Electronic Co. (Китай).

Биохимический анализатор DIRUI CS-600 производства Dirui Industrial Co. Ltd (Китай) обеспечивал высокоточное измерение различных биохимических маркеров. Полученные данные были статистически обработаны для выявления значимых изменений.

Результат исследований. В результате анализа полученных данных по определению хронической токсичности кормовой добавки при ее длительном внутрижелудочном введении лабораторным животным, установлено: в 1-й опытной группе был зафиксирован падеж 1-й головы на 14-й день эксперимента, во 2-й опытной группе зафиксирован падеж 1-й крысы на 9-й день эксперимента, в контрольной группе сохранность составила 100 %. У павших животных за 14-38 часов до гибели отмечались учащенное дыхание, снижение двигательной активности, отказ от воды и корма. У выживших животных 1 -й опытной группы отмечалось лёгкое угнетение спустя 10 дней после начала хронического опыта, продолжительностью от 2-х до 4-х суток, у животных 2-й опытной группы, начиная с 4-х суток эксперимента, также отмечалось угнетение и снижение двигательной активности продолжительностью до 7-и суток.

Изменения показателей живой массы тела у животных опытных и контрольных групп не имели значительной разницы и соответствовали физиологическим показателям для возрастной группы данного вида животных. Однако, стоит отметить, что средне групповая масса тела крыс 1-й опытной группы на 30-е сутки опыта была достоверно ниже аналогичного показателя в контрольной группе на 7,12 % (P≤0,05), во 2-й группе на 9,15 % (P<0,01). Через 60 дней после начала хронического эксперимента масса тела крыс контрольной группы составила в среднем 283,45±7,09 г, что достоверно выше показателя 1-й опытной группы на 7,48 % (P<0,05) и на 13,15 % в сравнении со 2-й опытной группой (P≤0,051), прирост живой массы тела относительно фоновых значений в контроле составил 24,09 % против 18,39 % в 1-й опытной группе и

4,73 % во 2-й опытной группе.

Таблица 1 – Результаты влияния кормовой добавки на живую массу лабораторных крыс, n=10, M±m

Группа	Масса тела животных, г				Прирост за опыт, г
	в начале опыта	через 30 дней	через 60 дней	в конце опыта
контрольная	228,42±2,21	260,37±5,42	283,45±7,09	304,97±6,61	76,55
1-я опытная	221,50±2,37	241,84±2,91*	262,24±3,95*	311,14±8,24	89,64
2-я опытная	235,06±3,00	238,62±3,70**	246,18±5,57**	301,25±3,90	66,19

Результаты достоверны по отношении к группе биологического контроля: * - P≤0,05;

** - P≤0,01

Таблица 2 – Результаты ОАК и БАК у крыс (n = 5)

Показатель	Группа			Норма
	контрольная	1-я опытная	2-я опытная
Гематологические показатели
Эритроциты, 1012/л	6,37±0,39	7,35±0,64	9,09±0,72***	5,00-9,80
Гемоглобин, г/л	119,20±5,01	126,80±1,11	135,60±20,13	110,0-170,0
Гематокрит, %	42,36±2,33	45,90±2,66	50,10±2,95*	32-53
Тромбоциты, 109/л	716,60±70,46	810,20±69,36	721,00±125,05	250-1500
Лейкоциты, 109/л	8,27±0,35	6,97±0,72	4,00±1,12***	1,90-16,80
Лимфоциты, %	55,83±1,95	58,66±2,96	57,97±4,10	40,00-88,90
Моноциты, %	11,69±1,24	13,30±1,97	17,18±1,08***	2,00-18,00
Нейтрофилы, %	28,37±1,69	24,42±2,29	21,61±4,97	7,30-50,00
Эозинофилы, %	3,90±0,55	3,46±0,34	3,20±0,31	0,00-7,00
Базофилы, %	0,21±0,16	0,17±0,04	0,04±0,02	0,00-1,50
Биохимические показатели
АСТ, Ед/л	88,28±1,94	106,02±5,29**	114,94±9,16**	54,6–128,5
АЛТ, Ед/л	80,28±5,18	59,54±6,37*	54,72±14,97	22,0–137,0
ЩФ, Ед/л	267,46±36,20	310,98±40,51	229,98±25,17	40,00–442,00
Холестерин, ммоль/л	2,08±0,06	1,67±0,21	1,85±0,09*	0,52–3,64
Триглицериды, мкмоль/л	1,05±0,09	1,65±0,37	2,24±0,21***	0–2,3
Общий билирубин, мкмоль/л	4,74±0,19	5,64±0,47	6,98±0,53***	4,0–7,0
Прямой билирубин, мкмоль/л	1,38±0,13	0,96±0,27	0,54±0,06***	0,0–3,98
Мочевина, мкмоль/л	4,46±0,37	4,42±0,19	6,65±0,26***	3,5–6,7
Креатинин, мкмоль/л	44,40±2,42	45,80±2,85	47,20±2,65	0,1–53,0
Общий белок, г/л	59,54±1,64	60,84±2,21	64,08±2,26	56,0–76,0
Альбумин, г/л	40,32±0,54	39,96±0,76	42,12±1,69	38,0–69,0
Глюкоза, ммоль/л	6,46±0,50	5,34±0,84	6,60±0,48	2,75–7,49
ЛДГ, Ед/л	216,56±8,22	213,54±9,07	191,40±49,06	25,0–285,0
Ca, ммоль/л	2,52±0,11	2,60±0,08	2,66±0,15	2,37–3,51
P, ммоль/л	1,57±0,13	1,61±0,11	1,72±0,07	0,74–2,26

Результаты достоверны по отношении к группе биологического контроля: * - P≤0,05; ** - P≤0,01; *** - P≤0,001

В конце опыта между животными группы биологического контроля и опытными группами достоверной разницы в массе тела установлено не было, общий привес за опыт в контрольной группе составил 76,55 г, что ниже показателя 1-й опытной группы на 17,01 %, но выше показателя 2-й опытной группы на 13,53 %. Результаты представлены в таблице 1.

В конце эксперимента у пяти животных из каждой группы были взяты пробы для определения биохимических показателей и общего анализа крови (Таблица 2).

При длительном применении кобаметина в указанных дозах у подопытных животных не наблюдалось существенных различий в общем анализе крови между животными контрольной и опытной групп по большинству исследуемых показателей. Все параметры находились в пределах референсных значений.

Однако стоит отметить следующее: уровень эритроцитов во 2-й опытной группе составил 9,09±0,72×1012/л и был достоверно выше при P≤0,001 на 42,70 % аналогичного показателя в группе контроля. Уровень гематокрита во 2-й группе был выше контрольного показателя на 18,27 % (P≤0,05). Содержание лейкоцитов в контрольной группе было достоверно выше показателя 2-й опытной группы на 51,36 % (P≤0,001). В параметрах лейкоцитарной формулы у животных 2-й опытной группы была отмечена достоверная разница с животными биологического контроля по содержанию моноцитов: данный показатель был выше контрольного показателя на 46,96 % при P≤0,001.

При биохимической оценке сыворотки крови разница у животных опытных и контрольной групп в содержании анализируемых показателей была незначительной, их уровень соответствовал параметрам физиологической нормы для данного вида животных. Однако следует отметить некоторые достоверные изменения в отдельных изучаемых показателях:

содержание аспартатаминотрансфераз в сыворотке крови опытных животных 1-й опытной группы был достоверно выше контрольного значения на 20,1 %, во 2-й опытной группе на 30,2 % (в обоих случаях уровень достоверности рассчитан при P≤0,01). В содержании АЛТ достоверные изменения были отмечены только в разнице показателей 1-й опытной и контрольной групп: она составила 25,83 % в пользу контрольной группы (при P≤0,05). Уровень холестерина во 2-й опытной группе был достоверно ниже контрольного показателя на 11,06 % (P≤0,05), триглицеридов выше на 113,33 % (P≤0,001), общего билирубина выше на 47,26 % (P≤0,001), прямого билирубина ниже на 60,87 % (P≤0,001). Содержание мочевины в сыворотке крови крыс 2-й опытной группы составил 6,65±0,26 мкмоль/л и был достоверно выше контрольного показателя на 6,31 % (P≤0,001).

Заключение. При изучении хронической токсичности кобаметина установлено, что при длительном введении добавки в дозах 153 и 307 мг/кг массы тела в опытных группах снижается сохранность лабораторных животных на 10 % относительно контрольной группы. При этом динамика живой массы тела у животных опытных и контрольных групп не имела значительной разницы и соответствовали физиологическим показателям для возрастной группы данного вида животных. Гематологические и биохимические параметры оставались в пределах физиологических показателей с некоторыми колебаниями в пределах границ.

Полученные результаты следует учитывать при составлении полной картины хронического токсического действия добавки с учетом патологоанатомических и гистологических исследований в целях прогнозирования возможных побочных эффектов при выборе доз в клинических исследованиях.