Изучение местно-раздражающего действия и пирогенных свойств нормотрофина

В последние годы в животноводческой практике всё больше внимания уделяется биостимуляторам, которые наряду с лечебным эффектом оказывают стимулирующее действие на продуктивность животных и увеличивают привесы. Это антибиотики, гормональные, витаминные, тканевые и бактериальные препараты, специфические сыворотки, препараты серы, металлов и металлоидов, агроминералы и другие [2,3,6,9,10,11]. Однако на сегодня особого внимания заслуживают средства растительного происхождения, которые согласно данным большинства авторов считаются безопасными и обладают высокой биологической активностью [1,5]. Однако, несмотря на это, внедрение в ветеринарную практику вновь созданных препаратов возможно лишь после проведения доклинических исследований позволяющих исключить их безопасность для теплокровных животных.

Нами, для использования в ветеринарии и животноводстве было разработано комплексное средство Нормотрофин из 10-ти видов растительного сырья, содержащий в своем составе алкалоиды, дубильные вещества, флавоноиды, кумарины, соединения терпеневого ряда, фурфурол, метил- и этил производные фенолового ряда, а также 19 макро- и микроэлементов, обладающий широким спектром действия. Основанием, к применению Нормотрофина является инструкция, согласованная с Начальником Главного управления ветеринарии КМ РТ от 17. 03. 2011 г.

Ранее нами были изучены параметры острой и хронической токсичности, а также кумулятивные свойства разработанного средства, по результатам которых он был отнесен к IV классу опасности – вещества малоопасные со слабовыраженными кумулятивными свойствами [7,8].

Исходя из вышеизложенного, целью настоящих исследований являлось изучение местно-раздражающего действия и пирогенных свойств нормотрофина.

Для достижения цели были определены следующие задачи:

• -    определить местно-раздражающее действие нормотрофина на белых крысах методом накожных аппликаций;

• -    выявить местно-раздражающее действие нормотрофина методом конъюнктивальной пробы при аппликации на слизистую глаз кроликов;

• -    определить пирогенное действие нормотрофина на кроликах.

Материалы и методы. Эксперименты выполнены в условиях вивария кафедры патофизиологии ФГБОУ ВПО КГАВМ имени Н.Э. Баумана.

Раздражающие свойства

Нормотрофина изучали методами накожных аппликаций и конъюнктивальной пробой [6].

В экспериментах, с целью выявления местно-раздражающего действия методом накожных аппликаций использовано 10 белых крыс обоего пола и 6 кроликов светлой масти. Для этого участок кожи 5х5 см за сутки до опыта тщательно выстригали на спине, слева и справа от позвоночника.

Нормотрофин наносили на выстриженный участок кожи, в нативном виде, с помощью ватно-марлевого тампона, при экспозиции 4 часа. Противоположная сторона служила контролем и туда аналогичным образом делали аппликацию дистиллированной водой. Спустя 4 часа удаляли ватно-марлевые тампоны и регистрировали реакцию кожи.

Повреждающее действие препарата при аппликации на кожу оценивали по наличию гиперемии, болевой реакции, отека и утолщения кожной складки в течение первых 5 часов после нанесения средства на кожу, а затем 1 раз в день в течение 14 суток.

Исследования раздражающих свойств нормотрофина методом конъюнктивальной пробы проведены на 4 белых беспородных кроликах обоего пола. Для постановки пробы одну каплю нативного средства вводили глазной пипеткой под верхнее веко правого глаза, а в левый глаз (контрольный) вводили такое же количество дистиллированной воды, после чего в течение одной минуты слегка прижимали слёзно-носовой канал. Учет реакции вели через 15, 30, 60 минут и 3 часа после закапывания нормотрофина, а в последующем один раз в день в течение 14 суток.

Реакцию оценивали по состоянию оболочки глаза, наличию гиперемии и инъецировании сосудов конъюнктивы и склеры, слезоточивости, изменению зрачка, отёчности век, наличию выделений из глаз.

Пирогенные свойства Нормотрофина оценивали по результатам термометрии [4].

Эксперименты проведены на 8 клинически здоровых кроликах, обоего пола, породы Шиншилла, с массой тела 2,5–3,0 кг, без учета гендерной принадлежности. Испытуемое средство вводили животным в краевую ушную вену в дозе 0,5 мл/кг массы тела. За сутки до начала      эксперимента      кроликов термометрировали и прекращали подачу корма, оставляя доступ к воде. Перед началом опыта проводили повторные замеры температуры тела животного в трех повторностях. Результат заключительной термометрии принимали за исходную температуру. В эксперименте использовали кроликов, температура тела которых укладывалась в пределы физиологической нормы (38,5–39,5   ˚С). Температуру измеряли ректально, утром до кормления, при помощи медицинского ртутного термометра с точностью до 0,1 ˚С. Для точности замера температуры, на стеклянный столбик выше резервуара с ртутью, надевали ограничитель-колечко из резиновой трубки, что давало возможность вводить термометр на одинаковую глубину. Ртутный резервуар перед введением в просвет прямой кишки смазывали вазелином.

Нормотрофин перед применением подогревали до 35 ˚С и инъецировали внутривенно не позднее чем через 15-30 минут после последнего измерения температуры. Животных термометрировали в течение последующих 3 часов после введения, им тестируемого средства.

Средство считали апирогоенным, если сумма повышения температуры тела у трёх кроликов была меньше или равнялась 1,4 ˚С. Если эта сумма превышала 2,2 ˚С, то говорили о наличии в нем пирогенов.

Результаты         исследований.

Экспериментально установлено, что однократная, эпикутанная аппликация нормотрофина, с помощью ватно-марлевого тампона на выстриженный участок кожи белых крыс и кроликов, не приводило к каким либо реактивным нарушениям со стороны исследуемых тканей, как в течение первых пяти часов после аппликации, так и в последующие 14 суток. При визуальном осмотре, пальпации, и измерении толщины кожной складки с использованием кутиметра, за всё время наблюдений, каких-либо функциональных и структурных нарушений со стороны кожи животных не отмечено.

При оценке раздражающих свойств Нормотрофина методом конъюнктивальной пробы установлено, что в течение первых 10 – 15 минут после введения испытуемого средства отмечалось лёгкое покраснение слизистой оболочки, которая приходила в норму через 30 – 60 минут и не отличалась от слизистой левого глаза кролика, служившего контролем. Осмотром в последующие сроки также не были выявлены какие-либо отклонения со стороны изучаемых показателей глаз.

Одно из основных требований, предъявляемых к качеству парентеральных лекарственных форм, является апирогенность. Поэтому нами, наравне с местно-раздражающими свойствами нормотрофина были изучены и его пирогенные свойства. До настоящего времени основным и официально принятым во всех странах методом испытания лекарственных средств на наличие пирогенных примесей является метод, основанный на троекратном измерении температуры тела кролика после внутривенного введения исследуемого препарата.

Результаты термометрии показали, что внутривенное введение нормотрофина в дозе 0,5 мл/кг живой массы не приводит к повышению температуры тела у экспериментальных животных (табл. 1).

Таблица 1 – Температура тела кроликов при применении Нормотрофина

Масса тела, кг	Температура тела, ˚С	Температура тела после введения нормотрофина, ˚С, через
	Исходная	1 час	2 часа	3 часа
2,74±0,07	38,98±0,08	39,01±0,08	39,01±0,07	38,99±0,07

На всём протяжении эксперимента кролики оставались в удовлетворительном состоянии, изменений в поведенческой реакции не отмечали. Отклонения показаний термометра были не существенными и находились на уровне исходных, что свидетельствовало об отсутствии пирогенных свойств у нормотрофина.

Заключение. Таким образом, исследованиями на лабораторных животных установлено, что нормотрофин не обладает местно-раздражающим и пирогенным действиями.

Резюме

В статье приведены результаты исследований по изучению местно-раздражающего действия и пирогенных свойств растительного средства нормотрофин. Результатами доклинических испытаний установлено, что аппликация нормотрофина на кожу и слизистую оболочку глаз не приводит к каким либо реактивным и структурным нарушениям со стороны исследуемых тканей. Испытание его на наличие пирогенных примесей также не нашло подтверждения в наших исследованиях.