Изучение раздражающего действия соли фосфония (3-(децилокси)-3-оксопропил) трифенилфосфоний хлорида на кожные покровы и слизистые оболочки глаз животных

В настоящее время соли четвертичного фосфония активно внедряются в медицину и в ветеринарию. Доказано, что антимикробная активность соли четвертичного фосфония высока по отношению ко многим патогенным бактериям и при этом не вызывает развитие устойчивости патогенной микрофлоры к ним [1, 4, 7].

По литературным данным известно, что благодаря способности солей фосфония проникать через клеточные мембраны при случаях введения фосфониевого фрагмента в природные или синтетические функционально замещенные структуры может не только привести к появлению новых видов биоактивности, но и к усилению антимикробных свойств [5, 6, 7].

Проведение некоторых доклинических исследований позволят нам получить дополнительные данные о безопасности фармакодинамики и фармакокинетики раскрываемого вещества, изучение сроков выведения остаточных количеств действующего вещества и его метаболитов из организма.

Целью наших исследований являлось определение местнораздражающего действия нового состава четвертичной фосфониевой соли на кожу и конъюнктиву глаз белых крыс и кроликов.

Материал и методы исследований. Исследования выполнялись в условиях вивария кафедры фармакологии, токсикологии и радиобиологии ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ. Объектом исследования служили 18 крыс и 6 кроликов в возрасте 6 месяцев. Масса тела крыс составляла 200-220 г, кроликов 2,2-3,0 кг. Животные были разделены на две группы, в каждой находились крысы и кролики по 9 и 6 голов. При помощи четвертичной фосфониевой соли определяли местное раздражающее действие, где в одной группе препарат применяли на кожу, в другой на слизистую глаз. Химический состав четвертичной фосфониевой соли состоял из 3-(децилокси)-3-оксопропил трифенилфосфония хлорида. Соединение соли четвертичного фосфония представляет собой густую жидкость тёмного цвета с коричневым оттенком, которая обладает низкой текучестью и характерным запахом. Из этого вещества были приготовлены растворы с концентрацией 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 5 % и 10%. Для их разбавления использовали дистиллированную воду, охлаждённую до комнатной температуры. Определение раздражающих свойств на кожу и слизистые оболочки глаз проводили согласно «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению фармакологических веществ» [2, 3].

Местное раздражающее действие водного раствора четвертичной фосфониевой соли определяли, нанося на кожу экспериментальным животным в концентрациях 1 %, 5 %, 10 %. За 48 часов до начала эксперимента на коже кролика размером 5х5 см с обеих сторон удаляли шерсть, а у крыс в области спины 4х4 см. На подготовленный участок кожи наносили водный раствор вещества в объёме 2 миллилитра. На другой участок кожи, который служил контролем, наносили дистиллированную воду в том же объёме. Препарат оставляли на коже в течение 4 часов. Чтобы предотвратить слизывание вещества животными, кроликам на шею надевали защитные воротники. Изменения, произошедшие на коже в месте нанесения вещества, оценивали визуально. Кожные реакции регистрировали в конце воздействия, в течение первых шести часов, через 1, 3 и 24 часа. В течение 14 суток наблюдали за общим состоянием и поведением животных, также осматривали область, на которую было нанесено вещество. Эксперимент включал однократное нанесение, которое затем сравнивалось с симметричным участком кожи той стороны животного. В ходе опыта учитывали функциональные и структурные изменения кожи. Изменения на коже оценивались по пятибалльной шкале: 0 – отсутствие видимой реакции; 1 – бледно-розовая кожа по всему участку или по его периферии; 2 – ярко-розовая эритема по всему участку; 3 – красная эритема по всему участку; 4 – инфильтрация или отек кожи при наличии или отсутствии эритемы; 5 – эритема, выраженная инфильтрация, очаговые изъязвления, образование корочки.

Исследование влияния на слизистые оболочки глаз второй группы животных проводили закапыванием правый глаз с помощью глазной пипетки. Закапывали водный раствор четвертичной фосфониевой соли однократно по две капли концентрацией 0,1 %, 0,5 % и 1 % соответственно, а в левый -дистиллированную воду комнатной температуры (18-20 °С). После нанесения раствора оттягивали верхний угол конъюнктивального мешка и в течение одной минуты прижимали слезно-носовой канал. Состояние животных оценивали через 5, 30 и 60 минут после процедуры, а также ежедневно в течение 10 дней. Особое внимание уделялись на состояние оболочки глаза, слезоточивость, отечность и гиперемию. Реакцию слизистой глаза также оценивали по трехбалльной шкале: 0 – отсутствие видимой реакции; 1 – лёгкое покраснение конъюнктивы; 2 – покраснение конъюнктивы и частично склеры; 3 – сильное покраснение конъюнктивы и всей склеры. Также наблюдали за появлением гиперемии, отёка, инъекции сосудов склеры и состоянием зрачков. Оценивали воздействие раствора по характеру конъюнктив: поверхностный или глубокий, а также по степени ожога слизистой (I, II, III степени).

Таблица 1 – Результаты исследования кожно-раздражающего действия трифенилфосфония хлорида у кроликов и крыс

Показатели местно-раздражающего действия на кожу	Концентрация, %
	1	5	10
Отсутствие видимой реакции
Бледно-розовая кожа по всему участку или по его периферии	-	-	-
Ярко-розовая эритема по всему участку	-	-	-
Красная эритема по всему участку	-	-	-
инфильтрация  или  отек кожи при наличии или отсутствии эритемы	-	-	-
Эритема, выраженная инфильтрация, очаговые изъязвления, образование корочки	-	-	-

Результат         исследований.

Полученные результаты исследования кожно-раздражающего действия водного раствора четвертичной фосфониевой соли показали (Таблица 1), что применение препарата в концентрациях 1 %, 5 % и 10 % не вызывало раздражения кожи у кроликов и крыс. Также отсутствовали изменения в общем состоянии, пищевой возбудимости и поведении подопытных животных.

Пятибалльная   оценка местно- раздражающего действия трифенилфосфония хлорида у кроликов и крыс показала отсутствие изменений на коже на протяжении всего эксперимента. На протяжении всего эксперимента у подопытных животных не наблюдались функциональных и морфологических изменений кожи, таких как эритема, отёк, трещины, язвы, корочки или изменения местной температуры у кроликов (Рисунок 1, 2) и крыс (Рисунок 3, 4).

Рисунок 1 – Отсутствие местного раздражения на коже кролика при применении 10% водного раствора четвертичной фосфониевой соли

Рисунок 2 – Отсутствие местного раздражения на коже кролика при применении дистиллированной воды

Рисунок 3 – Отсутствие местного раздражения на коже крысы при применении 10 % водного раствора четвертичной фосфониевой соли

Рисунок 4 – Отсутствие местного раздражения на коже крысы при применении дистиллированной воды

Результаты исследования конъюнктивальной пробы трифенилфосфония хлорида на кроликах и крысах, показали отсутствие изменений в общем состоянии, поведении животных и аппетита в течение всего опыта. В таблице 2 показано, что применение препарата в концентрациях 0,1 %, 0,5 %, 1 % не оказывали отрицательного воздействия на слизистую оболочку глаз в течение всего хода исследования у животных, а именно отсутствовала видимая реакция, лёгкое или сильное покраснение конъюнктивы, гиперемия частично или всей склеры.

Таблица 2 - Результаты изучения конъюнктивальной пробы трифенилфосфония хлорида на кроликах и крысах

Показатели конъюнктивальной пробы	Концентрация, %
	0,1	0,5	1
Отсутствие видимой реакции	-	-	-
Лёгкое покраснение конъюнктивы	-	-	-
Покраснение конъюнктивы и частично склеры	-	-	-
Сильное покраснение конъюнктивы и всей склеры	-	-	-

Рисунок 3 - Введение 1 % водного раствора четвертичной фосфониевой соли в конъюнктивальный мешок кролика

Рисунок 4 - Гиперемия и отек слизистой оболочки глаза у кролика при применении 1 % водного раствора четвертичной фосфониевой соли

Рисунок 5 - Отсутствие раздражения слизистой глаза у крысы при применении 1,0 % водного раствора четвертичной фосфониевой соли

Рисунок 6 - Отсутствие раздражения слизистой глаза у крысы при применении дистиллированной воды

Однако после нанесения 1 % водного раствора на конъюнктиву глаза кроликов (Рисунок 3) через час наблюдали небольшую гиперемию и отек слизистых оболочек (Рисунок 4), а через три часа -незначительную отёчность.

На следующий день после нанесения 1 % водного раствора отёчность конъюнктивы исчезла, и гиперемия тканей полностью прошла у всех кроликов.

У крыс на протяжении всего эксперимента не наблюдали никаких изменений со стороны общего состояния и изменения слизистой оболочки глаза.

Заключение. В ходе исследования было изучено раздражающее действие четвертичной соли фосфония на кожу и слизистые оболочки глаз лабораторных животных. В период эксперимента было установлено, что вещество не вызывает раздражения кожи и не приводит к каким-либо функциональным нарушениям. При контакте со слизистыми оболочками глаз была выявлена слабая реакция только у кроликов при применении 1% раствора водного раствора четвертичной фосфониевой соли, что свидетельствует о незначительном раздражающем действии. Однако в конце исследования у всех животных никаких патологических изменений не было обнаружено.