Изучение рецептивности плацентарной ткани свиноматок различной ферментативной активности на основании иммуногистохимических методов исследования

Введение. Важной особенностью полноценного развития новорожденного молодняка сельскохозяйственных продуктивных животных является взаимоотношение плода и материнского организма с формированием закономерной плацентарной связи [1–3].

Во время беременности материнский организм подвергается влиянию значительного спектра различных определяющих факторов. При этом разная интенсивность и продолжительность их действия вызывают отрицательные сдвиги адаптации фетоплацентарнорго комплекса и могут привести к патологии беременности [4, 5].

Плацентарные условия между материнским организмом и развивающимся плодом образуются на ранних стадиях эмбрионального периода и продолжаются до завершения внутриутробного развития. Изменения, связанные с ростом и развитием плода, сопровождаются существенными функциональными и морфологическими преобразованиями (обменные процессы усложняются, уровень гуморальных ком- понентов усиливается, клеточные и тканевые процессы претерпевают высокую дифференцировку) [6, 7].

Исследования ученых выявили прямую взаимосвязь уровня жизнеспособности плода с изменениями в плацентарной ткани. Однако изучение рецептивности плацентарной ткани в проведенных исследованиях не отражено. Выявление характерных условий плацентации с именным рецептивным профилем дает возможность объективно оценить адаптивные возможности новорожденного организма, а также конкретизировать тактику последующих беременностей у животных [8–10].

В современных условиях значительно увеличился интерес к иммуногистохимическим методам исследования у животных. Данная группа диагностических методов позволяет устанавливать патогенез и патоморфологию до явных клинических проявлений с определением маркеров, являющихся важным элементом структуры фетоплацентарного комплекса и его функционирования.

Цель исследования – изучение рецептив-ности плацентарной ткани свиноматок различной ферментативной активности на основании иммуногистохимических методов исследования.

Объекты и методы. Опыты проводили на базе свиноводческого хозяйства СПК Гущенко Краснодарского края, благополучного по инфекционным и инвазионным заболеваниям. Объектом исследования выступали плаценты 10 свиноматок крупной белой породы. Предметом исследования являлся рецептивный профиль плацентарной ткани свиноматок различной кратности опоросов и плодоношений. В репрезентативную выборку были определены свиноматки с различной ферментативной активностью плацентарной ткани: первая группа с высокой активностью плацентарной карбоксипептидазы (среднее значение 8,48±0,11 ед.) и вторая группа с низкой активностью плацентар- ной карбоксипептидазы (среднее значение 2,70±0,25 ед.)

Материал фиксировали в 10 %-м буферном растворе формалина. Экспрессию CD34 имму-нопозитивных клеток в эндотелиальном сосудистом слое хориона проводили путем иммуногистохимического исследования в системе проводки и инкубации с антителами по протоколу от производителя (Dako – USA), с мышиными моноклональными антителами к CD34 – CD34 Mouse Monoclonal Antibody – фл., конц. 0,5 (мл), с применением промывного буфера ТРИС 20Х кратный для ИГХ + ТВИН20 – 20Х TBS IHC Wash Buffer + Tween 20 – фл. конц. 1000,0 мл.

Результаты и их обсуждение. При проведении иммуногистохимического исследования плацент свиноматок выявлены различия в экспрессивной активности маркера CD34 в ворсинах хориона. Высокая оптическая плотность свидетельствует о патологии эндотелия (рис. 1, 2).

Рис. 1. Экспрессия CD34 в хорионе свиноматок группы с активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 8,48±0,11 ед.)

Рис. 2. Экспрессия CD34 в хорионе свиноматок группы с активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 2,70±0,25 ед.)

Экспрессия иммунопозитивных структур маркера CD34 определялась в виде окрашенных ядер в коричневый цвет хориальной оболочки.

Различный уровень ферментативной активности плацентарной ткани проявился в изменении уровня экспрессии маркера CD34, отраженного в диаграмме (рис. 3).

Выявление экспрессивных структур маркера CD34 позволяет сделать вывод о важном аспекте изучения иммунорецептивного профиля плацентарной ткани как нового критерия патологического состояния фетоплацентарного комплекса.

Установлено изменение эндотелиальных структур плаценты в виде различного уровня экспрессии базальной части ворсин хориона, из этого делаем вывод о дефекте эндотелия капилляров ворсин. В группе животных с высокой ферментативной активностью плацентарной ткани выявлены CD34 – иммунопозитивные структуры в парацентральных зонах ворсин хориона у 87 % особей с высокой активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 8,48±0,11 ед.). Этот факт обуславливает дистрофические процессы в стенках сосудов плаценты и указывает на патоморфологические изменения плацентарного барьера.

3,5

Рис. 3. Площадь экспрессии эндотелиального маркера CD34 в ворсинах хориона свиноматок групп сравнения

Заключение. Использование предложенных подходов по CD-типированию фетоплацентар-ного комплекса в зависимости от ферментативной активности плаценты позволит устанавливать нарушения и патологические состояния с целью предотвращения ранних репродуктивных потерь у сельскохозяйственных высокопродуктивных животных.