Изыскание биохимических маркеров молока коров инфицированных ВЛКРС

Известно, что химический состав молока изменяется под воздействием различных факторов, таких как рацион кормления, возраст животного, порода, состояние здоровья, а также период лактации. Приводятся множество противоречивых данных в научной литературе о том, что исследователи наблюдают снижение в молоке, как общего белка, так и количества аминокислот, у коров, инфицированных вирусом лейкоза [1, 2], и есть утверждения о повышении жирности молока при снижении количества общего белка и СОМО [3]. По данным Смирновой В.Н., наиболее выраженные изменения в молоке между группами спонтанно инфицированных ВЛКРС и клинически здоровых коров отмечаются в весенний период, а в осеннее время года, существенных различий не устанавливается [5].

Анализ литературных источников показывает, что данных по изучению морфобиохимических показателей крови, особенностям течения и проявления лейкоза крупного рогатого скота достаточно много. Так, Г.А. Симонян, М.И. Гулюкин (2009) отмечают, что проведенные ранее биохимические исследования позволили установить изменения в организме больных животных в виде нарушения обмена аминокислоты триптофана и ее производных, а также концентрации калия и хлора в сыворотке крови, свидетельствующие о нарушении электролитного гомеостаза и другие [4].

А.И. Кузин, Е.Н. Закрепина (2002) указывают на взаимосвязь аминокислотного состава сыворотки крови и молока у больных и инфицированных ВЛКРС коров.

Накоплен значительный объем данных об изменениях метаболизма у животных, инфицированных BLV. Так, при инфекции нарушается метаболизм критической незаменимой кислоты – триптофана, что приводит к накоплению в организме опасных эндогенных метаболитов: содержание свободного триптофана, индола и антраниловой кислоты возрастает в 4-8 раз, которые откладываются в органах иммунной и кроветворной систем (лимфатические узлы, селезенка, печень), молочной железе, легких, почках [6].

Целью данной работы являлось изучение физико-химических и биохимических показателей молока, а также метаболитов триптофана для изыскания маркеров инфицированности коров ВЛКРС.

Материал и методы исследований. РИД проводили на основе наставления по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота. По результатам испытаний 141 образец (28,2 %) испытанного материала имел положительную реакцию. По результатам исследований была создана опытная группа из 15 коров, из них 10 коров РИД-положительные, 2 коровы гематологические и 3 коровы РИД- отрицательные. Наблюдения проводились в течение 3-х месяцев.

Образцы сыворотки и молока от опытной группы животных исследовали дважды, в начале и в конце эксперимента, через каждые 60 дней. Тест ELISA был подготовлен в соответствии со стандартным методом в неконкурентном твердофазном варианте с использованием набора реагентов антител против ВЛКРС.

С помощью прибора Клевер-2 определяли показатели физико-химических свойств молока. Содержание индикана в сыворотке крови и молоке определяли на основании его гидролиза соляной кислотой и последующего окисления хлорным железом. Расчет и интерпретация результатов производились расчетным методом в соответствии с методикой.

Результат исследований.

Статистически значимой зависимости содержания белка и жира в молоке от заражения животного вирусом лейкемии не установлено. Однако в результате исследований у коров, инфицированных ВЛКРС, и при гематологических исследованиях наблюдается небольшое увеличение СОМО и плотности молока.

Остаточное содержание сухого обезжиренного молока относительно постоянно и достигает 8-9 %. У инфицированных коров и больных лейкемией содержание СОМО достигало 9,78 %. Плотность молока от здоровых коров составляет 1027-1032 кг/м3 (23,2-23,4 0А), а у гематологически больных животных лейкозами, эта величина была 23,9-27 0А и несколько ниже у коров, инфицированных ВЛКРС.

Согласно данным исследований, при незначительном изменении содержания жира и общего белка в молоке больных и инфицированных животных, относительно здоровых, наблюдается увеличение содержания сывороточных белков. Когда у здоровых животных в сыворотке молока остается 0,7-0,9 % белков и сывороточные белки составляют 0,9 %, то у инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом коров сывороточные белки составляли 1,2–1,36 %. Главными компонентами сывороточных белков является альбумин, а также иммуноглобулины. По мнению ученых, в биожидкости организма при хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Retroviridae (вирусы семейства Retroviridae), могут появиться иммунные комплексы – «антиген-антитело». При этом большинство исследователей считают, что выявление таких комплексов имеет важное значение в мониторинге лейкоза и может служить индикатором инфицированности животных вирусами [7, 8].

В молоке млекопитающих могут содержаться различные промежуточные и конечные продукты метаболических процессов, протекающие в организме животных с участием азот содержащих соединений. К ним относятся аминокислоты, мочевина, пептиды и др. Содержание подобных соединений в молоке, по некоторым данным, может достигать 50 мг %. Наибольший интерес в этой связи представляет промежуточные продукты катаболизма триптофана. Триптофан, является незаменимой аминокислотой, метаболизм которой осуществляется в трех основных направлениях: кинурениновый путь (основной), серотониновый путь и индольный путь. В зависимости от состояния организма в клетках могут преобладать тот или иной путь с образованием множества различных метаболитов. Индольный путь связан с образованием индола и его производных. Несмотря на растущий интерес к клинической значимости индольных соединений, в настоящее время в научной литературе сведений об изменениях концентраций в крови тех или иных метаболитов триптофана при различных заболеваниях практически отсутствуют. Индикан – один из продуктов обезвреживания индола. Результаты исследований РИД, ИФА и определения индикана представлены в таблице 1.

Пробы № 1 и 2 получены от гематологически больных лейкозом коров, пробы № 3 – 12 – РИД-положительные и № 13-15 РИД-отрицательные.

Таблица 1 – Результаты исследований проб сывороток крови

Согласно данной таблице, ИФА и РИД-отрицательные пробы № 13 и 14 – положительные. По срокам исследований титры специфических антител меняются, проба № 14 к концу исследований стала РИД положительной

В норме содержание индикана в сыворотке крови и молоке лежит в пределах 0,022–0,055. Как видно из результатов исследований, представленных в таблице, содержание индикана в сыворотке крови и молоке от инфицированных и больных лейкозом коров несколько выше от нормы. Однако корреляции между титром противолейкозных антител и содержанием индикана, как в сыворотке крови, так и в молоке не обнаруживаются.

Заключение. При определении показателей химического состава молока (СОМО, жиры, белки и плотность), закономерности в динамике их изменения не было обнаружено. Изменение физикохимических показателей молока у инфицированных и больных лейкозом коров зависит от множества факторов. В том числе и от индивидуальных особенностей иммунитета животного, поэтому выделить какие-либо показатели в качестве маркеров инфицированности коров с ВЛКРС не удалось. Тем не менее, нужно отметить, что у инфицированных лейкозом коров отмечается увеличение СОМО и плотности молока.

Результаты исследований метаболитов триптофана показали, что они, в частности индикан, вполне могут быть использованы в качестве маркерного соединения при диагностике лейкоза крупного рогатого скота. У больных и инфицированных лейкозом животных всегда отмечается повышенное содержание индикана в сыворотке крови и молоке.