Эффективность ассоциированной вакцины против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят

Клостридиальные гастроэнтериты молодняка крупного рогатого скота, вызываемая патогенными клостридиями, продолжает наносить ощутимый экономический ущерб производителям сельскохозяйственной продукции – молока и мяса. Во многих странах заболеваемость энтеральными клостридиозами, в том числе анаэробной энтеротоксемией, имеет тенденцию к росту. Опасность клостридиозов может стать несоизмеримо большой при нарушениях ветеринарно-зоогигиенических условий содержания, кормления животных. Инфекционная анаэробная энтеротоксемия у новорожденных телят и телят более старшего возраста вызывается, в основном, патогенными Clostridium perfringens серотипов А, С, Д [1, 11]. Заболевание обусловлено бурным размножением возбудителей в тонком кишечнике и всасыванием образовавшихся в кишечнике токсинов в общий кровоток. В патогенезе анаэробной энтеротоксемии имеет значение также и септический компонент. Заболевание у телят, как правило, протекает остро, часто молниеносно, заканчиваясь смертельным исходом через 2-6 часов после появления первых признаков болезни. При патологоанатомическом вскрытии павших телят обнаруживаются геморрагическое воспаление кишечника, преимущественно тонкого отдела, некротические очаги и обширные изъязвления в стенке кишечника, бурная реакция мезентериальных лимфатических узлов. Геморрагические и некротические изменения имеют место также в различных внутренних органах [3, 6, 8, 9]. В неблагополучных хозяйствах клостридиозы молодняка крупного рогатого скота часто протекают в ассоциации с другими желудочнокишечными заболеваниями, в частности с эшерихиозом. Смешанные формы инфекции трудно подаются лечению. Возбудители их проявляют высокую резистентность ко многим антимикробным препаратам [6, 11].

Разработка и осуществление мероприятий по борьбе с клостридиозами является предметом серьезного внимания специалистов ветеринарной службы страны. В настоящее время в РФ для специфической профилактики клостридиозов овец и крупного рогатого скота разработаны и применяются ассоциированные вакцины «Клостобовак-8», предназначенная для борьбы злокачественным отеком, брадзотом, эмкаром, столбняком, анаэробной дизентерией, энтеротоксемией, энтеритом и некротическим гепатитом, а также вакцина «АНАТОКС-9», используемая для профилактики эмфизематозного карбункула, брадзота, злокачественного отека, некротического гепатита, анаэробной дизентерии [4, 5]. Вакцины имеют широкий антигенный состав и предназначены они для иммунизации взрослого поголовья крупного и мелкого рогатого скота. Для специфической профилактики анаэробной энтеротоксемии новорожденных телят необходима вакцина с более узким спектром действия, способная индуцировать специфические антитела в высоких титрах к клостридиям в крови и молозиве для передачи колострального иммунитета с молозивом от матери к потомству.

Целью наших исследований явилась разработка ассоциированной вакцины против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят.

Исходя из намеченной цели, были поставлены следующие задачи:

• 1.    Изучить эпизоотическую ситуацию в Приволжском федеральном округе по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят.

• 2.    Разработать

• 3.    Провести доклиническое испытание вакцины на лабораторных животных и клиническое исследование на

ассоциированную вакцину против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят.

целевых животных в производственных условиях.

Материал и методы исследований. Изучение эпизоотической ситуации по эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят осуществляли в сельскохозяйственных предприятиях по производству молока в республиках Татарстан, Чувашия, Марий Эл, Самарской и Ульяновской областей ПФО. Анализ эпизоотической ситуации в неблагополучных хозяйствах проводился согласно рекомендациям, разработанным Бакуловым И.А. [2]. Выделение культур Escherichia coli и их идентификация проводилось в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных» [7]. Диагностика анаэробной энтеротоксемии осуществлялась в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии ягнят [8]. Разработка ассоциированной вакцины проводилась на основе инактивированных антигенов бактерий Escherichia coli (продуцирующие адгезивные антигены К99 и А20) и Clostridium perfringens (серотипы А, С и Д) [10]. Получение биомассы бактерий Escherichia coli осуществлялось на мясопептонном агаре, Clostridium perfringens – тиогликолевой среде. Контроль ассоциированной вакцины в условиях лаборатории проводилась по таким показателям, как стерильность, безвредность, антигенная активность. Контроль вакцины на безвредность проводилась на белых мышах, антигенная активность – на кроликах. Клиническое испытание вакцины на целевых животных проводилось в условиях трех скотоводческих хозяйств, неблагополучных по желудочнокишечным заболеваниям телят. При этом животные были разделены на 2 группы: опытную и контрольную. Животных опытной группы двукратно иммунизировали ассоциированной вакциной против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии за 50-60 дней до отела. Об эффективности вакцины судили по показателям заболеваемости и сохранности телят в опытной иммунизированной и контрольной не иммунизированной группах животных.

Результат исследований. Изучение желудочно-кишечных заболеваний телят проведено в 16 сельскохозяйственных предприятиях по производству молока. При этом эшерихиозную диарею диагностировали в 14 хозяйствах, анаэробную энтеротоксемию – 6 хозяйствах, смешанную инфекцию, вызванную энтеропатогенными штаммами Escherichia coli и Clostridium perfringens, наблюдали в 5 хозяйствах. Для специфической борьбы с этими инфекциями нами изготовлены 3 серии ассоциированной вакцины против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят и изучена их эффективность на лабораторных и целевых животных.

При доклиническом исследовании вакцины установлено, что ассоциированная вакцина стерильна, не дает роста на специальных питательных средах (мясопептонный агар, мясопептонный бульон, среда Китта-Тороцци, агар Сабуро), при подкожном введении белым мышам в дозе 0,5 см3 не оказывает реактогенного, раздражающего, токсического действия.

Антигенные свойства вакцины изучили на кроликах, путем двукратного подкожного введения. Результаты серологических исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных кроликов (М±m, n=5)

Сроки исследования	Титры антител, log 2
	к Cl. perfringens в ИФА			к E. coli в РА
	тип А	тип С	тип Д	К99	А20
До вакцинации	-	-	-	-	-
7 дней после 1-ой вакцинации	8,64±0,35	9,24±0,27	9,44±0,22	7,12±0,22	7,52±0,22
14 дней после 1-ой вакцинации	10,84±0,42	11,24±0,22	11,24±0,27	7,92±0,27	8,52±0,22
7 дней после 2-ой вакцинации	12,04±0,27	13,04±0,27	12,84±0,22	8,52±0,22	8,72±0,27
14 дней после 2-ой вакцинации	13,24±0,27	13,84±0,22	13,64±0,35	8,72±0,27	8,92±0,27

Таблица 2 – Содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных коров (M±m, n = 5, log 2 )

Антитела к антигенам	Сроки исследования
	до вакцинации	7 сут после 1-ой вакцинации	14 сут после 1-ой вакцинации	7 сут после 2-ой вакцинации	14 сут после 2-ой вакцинации
Cl. perfringens тип А	9,64±0,35	9,44±0,42	11,24±0,27	12,44±0,42	13,44±0,22
Cl. perfringens тип С	-	8,64±0,35	9,840±0,42	12,24±0,27	13,24±0,27
Cl. perfringens тип Д	-	8,44±0,42	10,04±0,27	12,04±0,27	13,04±0,27
E. coli К 99	4,12±0,42	5,12±0,55	7,52±0,22	8,52±0,22	8,72±0,27
E. coli А20	-	5,72±0,27	7,32±0,50	8,52±0,22	9,12±0,22

Как видно из результатов исследований, двукратное подкожное введение вакцины в дозе 4 см³ индуцирует у кроликов выработку специфических антител к бактериям: Clostridium perfringens на 14 сутки после второго введения к типу А - 13,24±0,27 log 2 ; к типу С - 13,84±0,22 и к типу Д - 13,64±0,35 в ИФА, к Escherichia coli на эти же сроки к штамму К99 - 8,72±0,27 log 2 и к штамму

А20 - 8,92±0,27 в РА.

Изучение превентивных свойств сыворотка крови от иммунизированных кроликов, введенная подкожно белым мышам в дозе 0,5 см3, показало сохранность их от гибели в 80-90 % случаях после заражения смертельными дозами бактерий Clostridium perfringens и Escherichia coli.

Таким образом, лабораторные испытания антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины показали достаточно высокую специфическую активность, что позволило продолжить дальнейшие испытания в производственных условиях.

Клиническое изучение ассоциированной вакцины против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят проводилось в трех стационарно неблагополучных хозяйствах Республики Татарстан. Антигенную активность вакцины оценивали по уровню содержания специфических антител в сыворотке крови вакцинированных коров в ИФА до и после введения вакцины (Таблица 2).

В ходе производственных испытаний вакцины отмечено у животных опытной группы после вакцинации значительное повышение титров специфических антител к Clostridium perfringens, тип А от 9,64±0,35 log2 до 13,44±0,22 log2, тип С - 8,64±0,35 log2 до 13,24±0,27 log2 , тип Д - 8,44±0,42 log2 до 13,04±0,27 log2 к Escherichia coli, штамм К 99 от 4,12±0,42 log2 до 8,72±0,27 log2 и к штамму А 20 - 5,72±0,27 log2 до 9,12±0,22 log2.

Таким образом, полученные результаты открывают широкие возможности применения вакцины для специфической профилактики смешенных форм желудочно-кишечных болезней у телят.

Далее эффективность вакцины оценивали в производственных условиях по показателям заболеваемости новорожденных телят, полученных от вакцинированных и не вакцинированных коров (Таблица 3).

Таблица 3 – Показатели эффективности применения ассоциированной вакцины

Наименование хозяйства	Получено телят	Заболело		Пало		Сохранность, %
		кол-во	%	кол-во	%
до применения ассоциированной вакцины
ООО им. Тимирязева	1041	887	85,2	197	18,92	81,08
КФХ «Сулейманов А.И.»	1986	1901	95,72	473	23,81	76,19
Всего	3027	2788	92,1	670	22,13	77,87
после применения ассоциированной вакцины
ООО им. Тимирязева	1221	212	17,36	47	3,84	96,14
КФХ «Сулейманов А.И.»	1608	352	21,89	114	7,08	92,92
Всего	2829	564	19,93	161	5,69	94,31

В ходе производственного исследования вакцины установлено, что от коров и нетелей, вакцинированных ассоциированной вакциной против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии в обеих хозяйствах, получено всего 2829 телят, из них в течение 60 суток после рождения заболели диареей 564 голов (19,9 %), пало 161 (5,6 %). Сохранность телят, полученных от вакцинированных коров, составила 94,3 %.

От контрольных не вакцинированных коров получено всего 3027 телят, из них в течение 60 суток после рождения заболели диареей 2788 (92,1 %), пали – 670 (22,1 %). Сохранность телят, полученных от не вакцинированных коров, составила 77,87 %.

Таким образом, ассоциированная вакцина против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят обладает высокой профилактической эффективностью. После начала ее применения в неблагополучных хозяйствах повышается сохранность новорожденных телят на 16,6 %.

Заключение. Разработана ассоциированная вакцина против эшерихиозной диареи и анаэробной энтеротоксемии телят. Проведено доклиническое и клиническое исследование вакцины на лабораторных и на сельскохозяйственных животных. Установлено, что вакцина стерильна, безвредна, не оказывает реактогенного, раздражающего, токсического действия на животных. Обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью.