Эпизоотология и лечение эшерихиоза телят в Краснодарском крае

В заболеваемости животных существенное место занимает эшерихиоз телят. Как нозоологическая единица он является синдромом, включающим нарушения пищеварения, диарею и дисбактериоз на фоне размножения E. сoli.

E. сoli широко распространена в природе и является одним из наиболее изученных микроорганизмов. Её биологическая роль заключается в том, что она первой заселяет кишечник новорожденных, выделяя биологически активные вещества – витамины, кислоты и другие, готовит среду для лакто- и бифидобактерий, а затем количественно отходит на второй план.

Причиной болезни у человека и животных является размножение и кратное увеличение количества патогенных штаммов кишечной палочки в кишечнике, что и учитывается при диагностике дисбактериоза, сопровождающего эшерихиоз. Окончательный диагноз при эшерихиозе ставят на основании бактериологических и серологических исследований с учетом эпизоотологической обстановки на территории [2, 11]. Для лечения эшерихиоза у телят используют антимикробные средства, а для специфической профилактики и терапии – вакцины и гипериммунные сыворотки [1, 4, 7].

По данным ветеринарной статистики эшерихиоз у молодняка крупного скота давно и часто регистрируется в России и многих странах мира [7, 8].

Краснодарский край является одним из ведущих регионов России в области разведения крупного рогатого скота. Имеет связи со всеми регионами страны и многими сопредельными странами. В связи со значительными перемещениями маточных и племенных животных необходимо обеспечивать благополучие эпизоотической обстановки, в частности, по эшерихиозу телят.

Из анализа литературных источников, критическими моментами, которым по ряду причин уделялось недостаточное внимание и могут быть усовершенствованы, являются, в частности, необходимость экспресс диагностики для скорейшего начала лечения, а также восполнение недостатка обменной энергии и витамина А у новорожденных телят [13]. Предлагается, наряду с антибиотикотерапией, применение средств, обеспечивающих телят дополнительной легкоусвояемой энергией и ретинолом, в комплексном лечении эшерихиоза телят.

Материал и методы исследований. Изучение лечения эшерихиоза у телят проводили в хозяйствах Южного федерального округа в 2020-2022 годах на телятах 3-14-дневного возраста, с признаками диареи. Для этого были сформированы по методу пар-аналогов три группы животных, по 24 в каждой.

Диагноз устанавливали на основе клинических признаков, результатов бактериологического и серологического исследования материала от больных и павших животных. Проводили бактериологические исследования патологического материала и фекалий с целью установления рода и вида возбудителя, а также чувствительность возбудителя к антибиотикам. При постановке диагноза учитывали эпизоотическую ситуацию в хозяйстве [2-4, 9].

Лабораторные исследования проводили в асептическом блоке с ламинарным боксом 2а класса биобезопасности – Белаквилон 1,2. Использовали весы аналитические OHAUS Pioneer PR224, пипетки 20 мкл, термометр Термекс LTA/2-HTC-HTC, иономер И-160МИ, стерилизатор VK-18, термостат ТВ-20-ПЗ-(К). Готовили среды: Эндо и Минка, их ростовые свойства сред определяли на Bac. Subtilis, полученном из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов НИЦ Курчатовский институт – ГосНИИГенетика, В-4537 (ATCC 6633), исследовали E. сoli от больных телят. Микроорганизмы Escherichia Coli, выделенные на средах (Эндо и Минка), идентифицировали наборами ЭНТЕРОтест 16, а из объектов внешней среды – КОЛИтест. Серологический профиль выделенных E. coli устанавливали с помощью типоспецифических О–агглютинирующих колисывороток (Армавирская биофабрика) и адгезивных колисывороток (ВНИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск). Для обнаружения антител к E. coli методом ИФА использовали наборы Monoscreen AbELISA E.coli F5 (K99), а для экспресс диагностики (антиген) AgELISA Calf digestive.

При определении факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№ 209 Р) по И. В. Нестеровой и соавт. (1996). Общий анализ крови, лейкоцитарную формулу определяли по общепринятым методикам; биохимические показатели, с помощью наборов «Витал» на спектрофотометре ПЭ-5400УФ.

Общая схема лечения всех животных была одинаковой и предусматривала внутривенное введение раствора Рингера-Локка, для восстановления водно-солевого баланса, в количестве 300 мл, двукратно с интервалом 6 часов, в дальнейшем по показаниям 1 раз в сутки. В качестве средства специфической терапии -сыворотка антиадгезивная антитоксическая против эшерихиоза сельскохозяйственных животных внутримышечно 50 мл, в два–три приема с интервалом 3-4 часа, повторно через 24-48 часов. Для нормализации кишечной микрофлоры применяли Бифидум-СХЖ в дозе 30 условных доз (1 мл содержит 10 млн. КОЕ штамма Bifidobacterium bifidum № 1) один раз в сутки, внутрь, до выздоровления.

Отличались группы средствами этиотропной терапии: в первой опытной группе телятам вводили препарат цефанекс 100 (раствор цефтиофура гидрохлорида 100 мг/мл) в дозе 2 мг/кг подкожно один раз в день, во второй опытной группе телятам вводили препарат цефанекс 100 (раствор цефтиофура гидрохлорида 100 мг/мл) в дозе 2 мг/кг подкожно один раз в день, дополнительно, с выпойкой с разбавленным молозивом давали внутрь препарат кетоцид, в третьей группе – контрольной, применяли препарат цефкином 45 (суспензия цефкинома сульфата 45 мг/мл) ежедневно, подкожно в дозе 2 мг/кг массы.

Кетоцид имеет сладкий вкус, быстро и полностью растворяется в водных средах – молозиве, молоке, физиологическом растворе или воде. При внутреннем применении не вызывает, как другие углеводы, брожения. Всасывается, в печени превращается в глюкозу, препятствуя поражению печени при глюконеогенезе, является известным некетогенным источником энергии для крупного рогатого скота. Применяется в суточной дозе 1 мл/кг массы животного.

Выздоровление оценивали по клиническим признакам с подтверждением результатами серологических исследований.

Полученные результаты были подвергнуты биометрической обработке по И. А. Ойвину (1960), степень достоверности установлена по распределению Стьюдента.

Результат исследований. По ветеринарной отчетности в Краснодарском крае за 2015–2021 годы в отношении болезней животных, установили, что при эшерихиозе у молодняка крупного рогатого скота в период с 2015 по 2017 гг. заболеваемость и летальность росли с 34 до 84 животных, затем в 2020 году снижались до 24, а в 2021 году увеличивались до 33. При этом следует отметить частое совпадение числа заболевших, исследованных и павших животных, что позволяет сделать вывод о диагностике этой болезни уже по факту доставки материала в лабораторию. Число обработок при этой болезни с 2015 по 2017 годы имело обратное значение – максимум в 2015 – 316710 и минимум в 2017 – 254985. Затем до 2020 года их число было около 270 тысяч в год. Заболеваемость и летальность при этом снизились до 24 животных в год. Что свидетельствует о правильной стратегии контроля эшерихиоза в Краснодарском крае.

Вместе с тем имеется проблема рождения телят с морфофункциональной недостаточностью и дефицитом витамина А, которые способствуют развитию как незаразной патологии, так и осложняют, и затягивают выздоровление и при инфекционной, в частности эшерихиозе у телят. В практической ветеринарии в качестве источника углеводов телятам вводят внутривенно раствор глюкозы. Но этот метод трудоемкий и травматичный. Для решения этой проблемы нами предложено использование некетогенного источника углеводов (энергии) и суспендированного в нем ретинола пальмитата, для внутреннего применения. В состав кетоцида входят ретинола пальмитат и пропиленгликоль. Ретинола пальмитат обладает разносторонним действием в организме и способствует повышению неспецифической резистентности организма. К тому же ряд исследователей установили его недостаток у телят при эшерихиозе. Пропиленгликоль является источником энергии, дефицит которой у больных телят выражается в снижении габитуса и затягивает выздоровление животных. Известно, что в первые дни жизни телята получают энергию из запасов, накопленных при внутриутробном развитии, в частности из жиров, которые очень быстро истощаются при течении эшерихиоза.

Ретинола пальмитат (витамин А) гидрофобен, но обработанный особым способом, в пропиленгликоле образует стойкую суспензию, в связи с чем может использоваться для внутреннего применения [9].

В опытах, предварительный диагноз при эшерихиозе устанавливали на основании комплекса клинических, патоморфологических исследований, а дифференцировали от других диарей и подтверждали на основании изучения микробиологических [2] и серологических свойств возбудителя. Установили, что возбудителем болезни является Escherichia coli К99 .

Минимальная подавляющая концентрация цефкинома для изолятов E. coli (серийными разведениями на МПБ) in vitro составила 0,06, 0,12 и 0,25 мг/л (µg/mL). С помощью дисков, содержащих по 30 мкг цефкинома сульфата, определили (Таблица 1), что зоны подавления роста Escherichia coli на МПА составили 3032 мм.

Таблица 1 – Значения МПК и подавления роста изолятов E. coli

№ п/п	Номера изолятов	МПК, мг/л	Диаметры зон подавления роста (в мм)
1	E. coli 1	0,06	31
2	E. coli 2	0,12	30
3	E. coli 3	0,25	32

Чувствительность выделенного возбудителя болезни Escherichia coli К99 изучали диско-диффузным методом согласно действующим методическим указаниям МУК 4.2.1890-04. Метод основан на диффузии антимикробных веществ из пропитанных ими дисков в плотную питательную среду и задержке роста предварительно посеянной микрофлоры. Использовали те же среды, что и для выделения возбудителя болезни.

Содержание действующего вещества в диске составляло, как правило, 30 мкг (за исключением: гентамицина 10 мкг; ципрофлоксацина 5 мкг действующего вещества на 1 диск). Для приготовления инокулята выделенного возбудителя эшерихиоза брали 5 колоний, выросших в течение 19 часов на агаре, суспендировали их с физраствором до достижения показателя 0,5 по стандарту мутности Мак Фарланда, соответствующего количеству микроорганизмов 1,5 х 108 КОЕ/мл. Наносили инокулят стерильным ватным тампоном, равномерно, в трех направлениях. Просушили 3-5 минут при комнатной температуре и нанесли по 4-5 диагностических диска на поверхность агара в 100 мм чашку Петри. Инкубировали 20 часов при температуре 35 °С, перевернутыми вверх дном. Результаты учитывали в том же положении, в отраженном на 45 градусов свете лампы, на матовой поверхности, линейкой. Результаты изучения чувствительности штаммов, выделенных от больных эшерихиозом телят к некоторым антибактериальным препаратам, представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Чувствительность E. coli К99 к антимикробным средствам

№	Лекарственные средства	Зоны задержки роста микроорганизмов (мм) * Escherichia coli К99	Критерии интерпретации результатов определения чувствительности для Enterobacteriaceae, для чувствительных культур мм
1	Амоксициллин	16	≥21
2	Гентамицин	13	≥15
3	Линкомицин	10	≥20
4	Тетрациклин	12	≥19
5	Тилозин	16	≥20
6	Энрофлоксацин	22	≥20
7	Флорфеникол	20	≥18
8	Цефкином	32	≥30
9	Цефтиофур	25	≥20
10	Ципрофлоксацин	21	≥21

Цефтиофура гидрохлорид, входящий в состав препарата цефанекс 100 – цефалоспориновый антибиотик третьего поколения, широкого спектра действия, оказывающий бактерицидное действие на грамотрицательные и грамположительные бактерии.

Механизм антибактериального действия препарата заключается в подавлении функциональной активности бактериальных ферментов транспептидаз, участвующих в связывании основного компонента клеточной стенки микроорганизмов - пептидогликана, что приводит к гибели бактерий.

После введения препарат быстро резорбируется с места инъекций, цефтиофур метаболизируется с образованием десфуроилцефтиофура, который оказывает антибактериальное действие. Максимальная концентрация препарата в плазме крови достигается через 12 часов после введения препарата и сохраняется на терапевтическом уровне не менее 7 суток. Десфуроилцефтиофур выводится в основном с мочой (свыше 70 %) [14].

Цефкином 45 содержит цефкинома сульфат 45 мг в 1 мл. Классифицируется как цефалоспорин VI поколения. Помимо свойств, присущих цефалоспоринам III поколения, он подавляет штаммы микроорганизмов нечувствительные к предыдущим поколениям цефалоспоринов, включая протей и синегнойную палочку.

Результаты лечения телят схемами, приведенными в материалах и методах отражены в таблице 3.

Максимальное содержание цефкинома в крови у крупного рогатого скота наблюдается через 1–2 часа после его введения. Эффективная ингибирующая концентрация его сохраняется в течении суток после последнего введения [12].

Таблица 3 – Эффективность применения препаратов при эшерихиозе у телят

Показатель	Группа
	опыт 1	опыт 2	контроль
Количество, телят,	24	24	24
из них: выздоровело	22	24	24
пало	2	-	-
Срок выздоровления, дни	4,1±0,18	3,5±0,15	3,7±0,18
Терапевтическая эффективность, %	91,7	100	100

Установили (таблица 4) целесообразность использования в качестве средства первого выбора препарата цефтиофура гидрохлорида – цефанекс 100, в качестве второго препарата цефкинома сульфата – цефкинома 45. В случае формирования резистентности следует использовать цефалоспорины четвертого поколения – цефкинома сульфат – цефкином 45.

Таблица 4 – Показатели крови телят при лечении эшерихиоза (M±m; n=24)

Показатель	Группы животных
	начало болезни	опыт 1	опыт 2	контроль
Эритроциты, 1012/л	6,64±0,43	6,70±0,29	6,60±0,21*	6,63±0,23
Лейкоциты, 109/л	8,69±0,33	8,44±0,32	8,52±0,39	8,58±0,55
Гемоглобин, г/л	102,98±5,15	106,92±6,02	106,53±4,98	108,55±4,38*
Общий белок, г/л	50,90±2,55	60,91±3,91	63,10±2,82	62,51±4,01
альбумины, %	53,61±2,39	52,12±1,99	52,38±2,36	52,25±2,66
α-глобулины, %	18,51±0,97	16,98±0,81	16,96±0,80	15,10±0,69
β-глобулины, %	12,77±0,64	11,71±0,56	12,64±0,45**	11,57±0,65
γ-глобулины, %	14,22±0,72	16,79±0,87	17,37±0,75*	16,66±0,85
Фагоцитарное число, ед.	6,61±0,34	6,68±0,29	6,61±0,20***	7,14±0,28
Фагоцитарная активность лейкоцитов, %	82,82±4,14	84,74±4,07	86,09±4,28	85,60±3,99*
Витамин А, кг/100 мл	8,5±0,4	9,9±0,38	15,2±0,69*	12,5±0,63
Глюкоза, ммоль/л	1,9±0,09	2,1±0,10	2,5±0,09*	2,0±0,11

*P < 0,05; ** P > 0,001; *** P > 0,001

Применение цефанекса в сочетании с кетоцидом позволило сократить срок клинического выздоровления на 12 часов. Исключило гибель животных в опыте. Количество форменных элементов, белка и гемоглобина в крови животных не имели значимых отличий во всех трех группах. Наряду с этим, при исходе болезни, следует отметить большее количество гемоглобина в группе с цефкиномом, гамма-глобулина, глюкозы и витамина А у телят в группе с цефтиофуром, когда дополнительно использовали источник энергии и витамин А.

Предлагается, наряду с антибиотикотерапией, применение средств, обеспечивающих телят дополнительной легкоусвояемой энергией и ретинолом, в комплексном лечении эшерихиоза телят.

Заключение. Установлено, что эшерихиоз телят имеет широкое распространение в мире и России, при этом в Краснодарском крае в последние 5 лет, благодаря массовой диагностике и вакцинопрофилактике, его распространение имеет тенденцию к снижению.

Для изолятов возбудителя эшерихиоза молодняка крупного рогатого скота определена МПК цефкинома, составившая 0,06-0,25 мг/л. Дискодиффузионным методом определена чувствительность возбудителя эшерихиоза животных 30 и более миллиметров.

Разработана схема лечения эшерихиоза телят с использованием средств повышения неспецифической резистентности телят и препаратов на основе цефалоспоринов 3 и 4 поколений, обеспечивающая уменьшение срока излечения телят от эшерихиоза на 0,5 дня. При этом количество глюкозы и витамина А в крови у телят в опытной группе были на 16 % и 34,9 % выше, число выздоровевших животных увеличилось на 8,3 % соответственно, достигнув полного выздоровления всех обработанных телят при эшерихиозе.

диагностике эшерихиоза (эшерихиоза) животных. – М.: Минсельхоз России.

Департамент ветеринарии. – 2000. – 17 с.

анаэробной      энтеротоксемии      и эшерихиозной диареи телят: диссертация ... кандидата ветеринарных наук: 06.02.02 / Насертдинов Динар Дамирович. – Казань, 2018. – 142 с.

Этиопатогенетическая фармакотерапия смешанной кишечной инфекции у новорожденных телят: дисс.... д-ра биол. наук: 16.00.04, 16.00.03. – Воронеж, 2000. – 305 с.

Резюме

В Краснодарском крае в 2015–2021 гг, заболеваемость и летальность при эшерихиозе телят росли с 34 до 84 животных в 2017 г., в 2020 г. снижались до 24 и в 2021 году росли до 33. Обработки при этой болезни с 2015 по 2017 годы были обратно пропорциональны: максимум в 2015 – 316710 и минимумом в 2017 – 254985, до 2020 г. их число было около 270 тыс. в год. Заболеваемость и летальность снижались до 24 животных в год. Для лечения телят при эшерихиозе использовали цефанекс 100 (раствор цефтиофура гидрохлорида 100 мг/мл) в дозе 2 мг/кг подкожно один раз в день, во второй группе цефанекс 100 сочетали с выпойкой препарата кетоцид (витамин А с пропиленгликолем), в третьей группе – контрольной, применяли цефкином 45 (суспензия цефкинома сульфата 45 мг/мл) ежедневно, подкожно в дозе 2 мг/кг массы. Предложено антибиотики первого выбора (цефалоспорины третьего поколения) сочетать с патогенетической терапией (кетоцидом). При резистентности использовать цефалоспорины четвертого поколения – цефкинома сульфат.