Комплексное фармакогностическое и фармакоэкономическое изучение женьшеня с точки зрения ресурсосберегающих технологий

золы, которые не могут трактоваться как объективные, достоверные и надежные показатели качества. Раздел «Количественное определение» в фармакопейной статье отсутствует [1].

На фармацевтическом рынке РФ спектр ЛП женьшеня обширен, однако доминирующими являются ЛС и биологически активные добавки зарубежного производства [2]. Отечественные препараты представлены лишь настойкой женьшеня. Поэтому актуально расширение ассортимента лекарственных препаратов на основе данного сырья в сочетании с разработкой объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов. Особого внимания заслуживает вопрос относительно сырьевой базы женьшеня настоящего. Природные ресурсы растения истощены, оно занесено в Международную Красную книгу. На территории РФ женьшень культивируется в Приморском крае, на Кавказе, в Брянской области, а также Самарской области в крестьянско-фермерском хозяйстве питомник «Женьшень». Существуют также научные данные о адаптогенном, гипогликемическом, противогипоксическом действии извлечений из травы женьшеня. Поэтому с точки зрения ресурсосберегающих технологий актуальным и перспективным является фармакогностическое изучение листьев и стеблей данного растения.

Цель работы: комплексное фармакоэкономическое и фармакогностическое исследование фармакопейного сырья женьшеня настоящего, а также надземной части данного растения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи :

• 1.    Анализ ассортимента ЛП группы общетонизирующих средств и адаптогенов, представленных на фармацевтическом рынке Самарской области и РФ в целом.

• 2.    Исследование анатомо-морфологических признаков корневищ с корнями и надземной части женьшеня настоящего.

• 3.    Обоснование новых подходов к стандартизации сырья и ЛП женьшеня с учетом принципа унификации методик в ряду ЛРС – субстанция – лекарственная форма.

• 4.    Разработка методик качественного и количественного анализа корневищ с корнями и надземной части женьшеня.

• 5.    Оптимизация технологии ЛП «Женьшеня настойка», обоснование состава и технологии ЛП «Женьшеня сироп» и «Женьшеня таблетки». 6. Разработка методик качественного и количественного анализа ЛП «Женьшеня настойка», «Женьшеня сироп» и «Женьшеня таблетки».

Объектами исследования служили:

• -    сектор фармацевтического рынка Самарской области и РФ в целом, представленный общетонизирующими и адаптогенными ЛП;

• -    корневища, корни, вегетативные органы надземной части женьшеня, культивируемого в Самарской обл., а также корни дикорастущего растения;

• -    лабораторные образцы субстанций и препаратов;

• -    образцы настоек женьшеня различных производителей;

Исследование проводили методом электронно-цифровой микроскопии, с помощью химических, хроматографических, физико-химических методов, а также методов получения лекарственных средств и оценки фармакологической активности.

Результаты проведенного анализа показали, что среди растительных адаптогенных препаратов преобладают препараты, приготовленные на основе корней женьшеня настоящего – 30%. Почти четверть рынка фитоадаптогенов (21%) занимают средства на основе корневищ и корней элеутерококка колючего. Далее идут препараты на основе корней и корневищ родиолы розовой (17%) плодов и семян лимонника китайского, алоэ и березового гриба (по 8%), корней аралии манчжурской (4%), и только по 2% составляют препараты на основе левзеи сафлоровидной и заманихи высокой.

Проведено анатомо-морфологическое и гистологическое исследование надземных и подземных вегетативных органов женьшеня настоящего. В сравнительном плане изучено строение отдельных частей сырья – корневища, главного и придаточного корней. На основании полученных данных взамен ранее используемому названию сырья «Женьшеня корни» предложено новое наименование – «Женьшеня корневища с корнями», которое более полно отражает состав используемого сырья. Впервые изучены анатомические и морфологические особенности потенциального сырья «Женьшеня трава», перспективного в качестве источника БАС и в рамках комплексного использования растения. В частности, исследовано строение черешка листа женьшеня – петиолярная анатомия, которая является современным узкоселективным методом диагностики лекарственного растительного сырья (ЛРС). Выявленные диагностические признаки и иллюстрации микропрепаратов положены в основу раздела «Микроскопия» проекта ФС «Женьшеня корневища с корнями». Диагностические признаки листьев и стеблей, а также их микрофотографии в дальнейшем могут быть рекомендованы для включения в проект ФС «Женьшеня трава».

Методом ТСХ проведен фитохимический анализ различных органов женьшеня. На полученных хроматограммах видно, что в корнях и надземной части содержатся сапонины как в форме гликозидов, так и в форме агликонов. Кроме того, в надземной части содержатся флавоноиды. В результате спектрофотометрического анализа получены кривые поглощения извлечений из корней и надземной части женьшеня. Максимум поглощения водно-спиртового извлечения из корней женьшеня находится при длине волны 268 нм, извлечения из травы – при длине волны 273 нм и 320 нм, что свидетельствует о различной химическом составе. Кривая поглощения раствора извлечения из травы обусловлена, на наш взгляд, в большей степени, флавоноидами, спектр извлечения из корней – веществами терпеноидной природы.

Методом адсорбционной колоночной хро-матаграфии в сочетании с перекристаллизацией и различными химическими превращениями из корней и листьев женьшеня настоящего выделено 3 индивидуальных соединения. Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ-, 1Н-ЯМР- и масс-спектров. По своим физико-химическим и спектральным характеристикам гинзенозид Rg1 является перспективным веществом в плане использования в качестве рабочего стандартного образца (РСО) в методиках контроля качества сырья и препаратов женьшеня. Кемпферол-3-О-диксилозид (3-О-диксилозид 3,5,7,41-тетрагидроксифлавона) представляет собой новое природное соединение, которое впервые выделено из данного растения и является доминирующим флавоноидом травы женьшеня. Для него впервые получены данные 1Н-ЯМР-спектра и спектральные характеристики. С использованием РСО гинзенозида Rg1 разработаны методики качественного и количественного анализа корней и травы женьшеня [3].

Для определения подлинности корней женьшеня предложен метод ТСХ, предусматривающий проявление хроматограммы 20% спиртовым раствором ФВК и использование для сравнения спиртовой раствор РСО гинзенозида Rg 1 с величиной R f около 0,3 (одно из доминирующих пятен). Наиболее четкое разделение веществ достигается в системе растворителей «хлороформ-метанол-вода» в соотношении 24:14:3. При этом на хроматограмме должны обнаруживаться не менее 6 пурпурно-красных пятен, принадлежащих гинзенозидам, с R f от 0,10 до 0,50. При оценке подлинности травы женьшеня предложено определение двух групп БАС – сапонинов и флавоноидов.

Качественное обнаружение сапонинов в траве методом ТСХ целесообразно проводить при условиях, аналогичных определению сапонинов в корнях. Определение флавоноидов методом ТСХ следует проводить в сравнении с государственным стандартным образцом (ГСО) рутина, фактор удерживания которого совпадает со значением R f кемпферол-3-О-диксилозида. Для определения содержания суммы сапонинов в корнях женьшеня разработана методика спектрофотометрического анализа. Для исключения вклада сопутствующих веществ предложено проводить очистку водно-спиртового извлечения на сорбенте полиамиде, затем проводить реакцию с 70% серной кислотой. Данный реактив приводит к образованию стабильного комплекса с сапонинами, окрашенного в розовый цвет. Раствор имеет максимумы поглощения при длинах волн 320±2 нм, 390±2 нм (пл) и 526±2 нм, при этом последний максимум совпадает с максимумом поглощения гинзенозида Rg 1 после проведения реакции с 70% серной кислотой. Оптимальными условиями получения анализируемого раствора является экстрагирование сырья 70% этиловым спиртом в течение 90 минут в соотношении 1:30 и проведение реакции с 70% серной кислотой в течение 10 минут.

Разработана методика количественного определения суммы сапонинов в траве. За основу взята пробоподготовка, применяемая в методике количественного определения сапонинов в корнях, однако для очистки извлечения от хлорофилла и других липофильных веществ, завышающих результаты, введена стадия очистки водно-спиртового извлечения хлороформом. Для определения содержания суммы флавоноидов в траве предложен метод дифференциальной спектрофотометрии с использованием ГСО рутина при 412 нм.

Разработанные методики качественного и количественного определения суммы сапонинов в корнях женьшеня, а также предложенный нижний предел содержания суммы сапонинов «не менее 2,0%» включены в проект ФС на «Женьшеня корневища с корнями», принятой на рассмотрение ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». Подходы к анализу надземной части женьшеня в дальнейшем могут быть рекомендованы для включения в проект ФС «Женьшеня трава». Проведены исследования по разработке способов получения и методов контроля качества ЛП «Женьшеня настойка», «Женьшеня сироп» и «Женьшеня таблетки».

Разработан новый способ получения настойки женьшеня с использованием этилового спирта в соотношении 1:5 при нагревании. Разработаны и апробированы методики качественного и количественного анализа настойки с использованием гинзенозида Rg 1 . Содержание суммы сапонинов в образцах разработанной настойки составляет от 0,97% до 1,17%. На этом основании предложен нижний предел содержания ведущей группы БАС «не менее 0,4%». Полученные данные включены в проект ФС «Женьшеня настойка».

Предложен оригинальный состав сиропа женьшеня на основе фруктозы и сорбита. Разработанные методики качественного и количественного определения суммы сапонинов метрологически аттестованы, обоснованы числовые показатели и срок хранения – 1,5 года. В качестве нижнего предела содержания ведущей группы БАС предложено значение «не менее 0,04%». Полученные данные включены в проект ФС «Женьшеня сироп».

Разработана технология получения таблеток с жидким экстрактом женьшеня, полученным в соотношении 1:1 на 70% этаноле, предложены методы стандартизации таблеток и показатели качества. Содержание суммы сапонинов в 1 таблетке в пересчете на гинзенозид Rg 1 варьирует от 3,17 м до 3,47 мг.

Выводы:

• 1.    Разработан проект ФС «Корневища с корнями женьшеня».

• 2.    Проведено фармакогностическое изучение надземной части женьшеня: определены диагностические признаки листа, черешка листа и стебля женьшеня, разработаны методики качественного и количественного анализа суммы сапонинов и флавоноидов.

• 3.    Усовершенствована технология и разработан проект ФС на ЛП «Женьшеня настойка»

• 4.    Разработана технология и разработан проект ФС на ЛП «Женьшеня сироп».

• 5.    Разработана технология и методики контроля качества ЛП «Женьшеня таблетки».