Коррекция экспериментального вторичного иммунодефицита растительным средством

В связи с широкой распространенностью иммунодефицитных состояний актуален поиск новых эффективных иммуномодуляторов, обладающих мягким действием, низкой токсичностью, отсутствием побочных эффектов. В этом плане перспективными являются лекарственные средства растительного происхождения. Преимущество их заключается в том, что они действуют на организм всем комплексом содержащихся в них веществ [1,2]. Объектом настоящего исследования стал сухой экстракт из корней астрагала перепончатого - Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge, полученный водной экстракцией в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН. Компонентный состав экстракта астрагала перепончатого: флавоноиды – каликозин и его 7-О-глюкозид, формононетин; тритерпены – астрагалозиды I, II, III, IV; аминокислоты – аспарагин, аспарагиновая кислота, глицин, аргинин, пролин; полисахариды – группа (-глюканов. Из данных литературы известно, что извлечения, полученные из астрагала перепончатого, обладают выраженными иммуномодулирующими свойствами [4,5,7,9,10].

Целью настоящего исследования явилось определение иммунокорригирующих свойств сухого экстракта из корней астрагала перепончатого в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа в условиях вторичного иммунодефицита, вызванного азатиоприном.

Материалы и методы

Эксперименты проведены на мышах-самцах линии F1 (СВАхС57Вl/6) массой 18-20 г. Действие исследуемого средства на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета было изучено на интактных животных, а также животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней.

Сухой экстракт астрагала перепончатого (ЭАП) вводили 1-й опытной группе на фоне азатиоприна и 2-й опытной группе интактных мышей в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала воду, очищенную по аналогичной схеме.

Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ [3]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1 %-ной взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена - 50 мкл 50%-ной взвеси ЭБ. В контрлатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 ч по разнице массы опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок.

Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965) [6]. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2 х108 клеток/мышь. Величину иммунного ответа оценивали по числу АОК на селезенку и на 106 клеток с ядрами на 5-е сутки после иммунизации.

При статистической обработке экспериментальных данных вычислялась средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической ((m), критерий Стьюдента (t) и достоверность различий (Р). Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р ( 0,05).

Результаты и их обсуждение

Ранее нами сообщалось об иммуномодулирующем действии отвара астрагала перепончатого при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии [4]. В данной работе показано, что исследуемое средство способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию (гиперчувствительность замедленного типа) и антителогенез, что выражается в восстановлении иммунологических показателей до уровня таковых у интактных животных. В настоящей работе представляло интерес исследовать влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на состояние основных звеньев иммунного ответа при экспериментальной иммунодепрессии.

При исследовании влияния сухого экстракта астрагала перепончатого на процессы антителообра-зования установлено, что данное средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 спленоцитов на 45% и 37% соответственно по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).

При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов; при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 2,1 раза, а второй ─ в 1,8.

При введении ЭАП интактным животным установлено, что данное средство не оказывает существенного влияния на показатели гуморального иммунитета у интактных животных.

Влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на антителообразование

Таблица 1

Примечание: здесь и далее n - количество животных в группе, * - означает, что разница существенна (р ≤ 0,05) по сравнению с контролем.

При исследовании влияния ЭАП на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 44% по сравнению с тем же показателем в интактной группе (табл. 2).

Таблица 2

Влияние сухого экстракта астрагала перепончатого на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)

При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,4 раза по сравнению с контролем, тогда как у интактных животных при использовании экстракта не отмечали значимого изменения данного показателя по сравнению с данными в интактной группе. Таким образом, ЭАП способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа. Исследуемое средство не изменяет показатели иммунитета интактных животных. Это свойство присуще лишь истинным иммуномодуляторам, обладающим активностью только в условиях повреждения иммунитета.

Иммуномодулирующая активность исследуемого средства обусловлена совокупным действием комплекса биологически активных веществ, преимущественно, полисахаридами, флавоноидами и тритерпеновыми сапонинами [1, 2, 8, 11]. Наши данные согласуются с данными Д.Н. Лазаревой и др. (2005), из которых известно, что водный экстракт из корней астрагала перепончатого оказывает про-тективный эффект в условиях иммуносупрессии, вызванной метотрексатом (уменьшает угнетение пролиферации спленоцитов мышей, вызванное данным цитостатиком) [2]. Кроме того, китайскими исследователями установлено, что флавоноиды, выделенные из астрагала перепончатого, стимулируют пролиферацию лимфоцитов, увеличивают число Т-клеток [7].

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что сухой экстракт астрагала перепончатого является эффективным иммунокоррегирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов .