Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и содержание провоспалительных цитокинов у больных рожей

В настоящее время широко изучаются межклеточные взаимодействия, в основе которых лежат механизмы сигнализации, опосредуемые цитокинами. Известно, что непосредственная адгезия играет существенную роль во взаимодействии между тромбоцитами и нейтрофилами. Установлено, что адгезивные взаимодействия между тромбоцитами и лейкоцитами являются важными звеньями механизмов, обеспечивающих миграцию лейкоцитов в зону повреждения, а, следовательно, воспаления и развития там иммунных и репаративных реакций [2–6].

Тромбоциты способны вступать в контакт с гранулоцитами в процессе остановки кровотечения и развития воспалительной реакции. Установлена взаимосвязь между гемостатическими и воспалительными реакциями при повреждении тканей. При этом ключевым звеном выступает взаимодействие полиморфноядерных лейкоцитов, тромбоцитов и эндотелиальных клеток. Эту кооперацию с участием ряда интегринов регулируют хемокины, цитокины, факторы роста, производные радикалов кислорода, вызывающие усиленную коагуляцию и репарацию тканей в месте их повреждения [4, 5, 11, 12].

Известно также, что в патогенезе рожи ведущими звеньями являются иммунные механизмы. Ранее установлено, что у таких больных развиваются признаки вторичного иммунодефицита [1, 7, 8]. Учитывая, что способность лимфоцитов вступать в контакт с тромбоцитами отража- ет состояние иммунитета, эта функция взаимодействия клеток и их сигналов при роже мало изучена.

Цель работы: исследование лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (ЛТА), продукции провоспалительных цитокинов у больных рожей.

Материал и методы

Под наблюдением находилось 20 больных (10 женщин и 10 мужчин) с эритематозно-буллезной формой рожи средней степени тяжести и 30 больных (12 мужчин и 18 женщин) с эритематозной формой рожи средней степени тяжести в возрасте 45–55 лет (средний возраст – 46,7 лет). У всех больных диагностировано первичное заболевание с локализацией воспалительного процесса на нижних конечностях. Больные госпитализировались в течение 1–3 суток с начала клинических проявлений болезни. Контрольная группа представлена 55 здоровыми лицами обоего пола в возрасте 45–55 лет (средний возраст – 47,2 лет).

Все лабораторные исследования выполнялись на 3-и сутки с момента проявления симптомов заболевания до получения лекарственной терапии. Оценку лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии проводили по методу, предложенному Ю.А. Витковским и соавт. (1999) [2]. Подсчитывали число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагре-гатов на 100 клеток – показатель ЛТА, который характе-

Таблица 1

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных рожей (M±m)

Наблюдаемые группы	Лимфоциты, абс. х109/л	ЛТА, отн.,%	ЛТА, абс. х109/л	Степень адгезии
Здоровые (n=55)	2,04±0,4	14,0±1,0	0,69±0,02	3,2±0,1
Больные с эритематозно-буллезной формой рожи (n=20)	1,95±0,4, p>0,05	2,0±0,3, p<0,001	0,10±0,02, p<0,001	1,2±0,05, p<0,001
Больные с эритематозной формой рожи (n=30)	1,89±0,4, p>0,05	3,0±0,3, p<0,001	0,16±0,03, p<0,001	1,3±0,06, p<0,001

Примечание: p – уровень статистической значимости различий по сравнению со здоровыми.

Таблица 2

Содержание цитокинов у больных рожей, пкг/мл (М±m)

Цитокины	Здоровые, n=55	Эритематозно-буллезная форма, n=20	Эритематозная форма, n=30
ИЛ-1α	19,3±4,1	163,8±10,2, р<0,001	153,6±12,3, р<0,001
ИЛ-1β	32,6±9,4	221,0±18,2, р<0,001	186,9±14,2 , р<0,001
ИЛ-8	25,9±4,2	321,6±21,6, р<0,001	283,5±16,8, р<0,001
ФНОα	12,3±2,1	282,3±19,7, р<0,001	231,5±16,5, р<0,001

Примечание: p – уровень статистической значимости различий по сравнению со здоровыми.

ризует количество активированных лимфоцитов, и среднее число кровяных пластинок, адгезированных на поверхности одного лимфоцита (степень адгезии), что косвенно отражает экспрессию рецепторов на поверхности лимфоцитов и тромбоцитов.

Определение уровня цитокинов в сыворотке крови пациентов (IL-1 α , IL-1 β , IL8, TNF α ) проводилось с использованием наборов реактивов ЗАО “Вектор-Бест” (Новосибирск). Метод основан на твердофазном “сэндвич”-ва-рианте иммуноферментного анализа. Специфическими реагентами набора являются моноклональные антитела, сорбированные на поверхности лунок разборного поли-стирольного планшета, коньюгат поликлональных антител с биотином и колибровочные образцы.

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki, 1964, 2000-поправки) и Правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г., № 266.

Для обработки результатов исследования использовали методы вариационной статистики с вычислением среднего и среднеквадратичного отклонения (M±m) и статистической значимости различий по критериям Стьюдента, Вилкоксона. Различия считались статистически значимыми при значениях р<0,05. Обработка параметров выполнена программой “Microsoft Exel”.

Результаты и обсуждение

У пациентов с рожей мы не обнаружили существенных изменений в содержании абсолютного числа лимфоцитов в начале заболевания по сравнению со здоровыми (табл. 1). Однако показатель лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии уже в эти сроки резко снижался. Так, у больных с эритематозно-буллезной формой он уменьшался до 2,0±0,3%, при эритематозной форме – до 3,0±0,3%, тогда как у здоровых составлял 14,01,0% (p<0,001). Соответственно изменялось и абсолютное чис- ло лимфоцитов, присоединивших к себе кровяные пластинки: у больных – (0,10±0,02)х109/л и (0,16±0,03)х109/ л против (0,69±0,02)х109/л у здоровых (p<0,001). Одновременно с этим уменьшалось среднее число тромбоцитов, адгезированных на поверхности лимфоцита (степень адгезии): при эритематозно-буллезной форме – до 1,2±0,5 и при эритематозной форме заболевания – до 1,3±0,06 против 3,2±0,1 в контроле (p<0,001). Учитывая известный факт, что основными регуляторами лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются медиаторы иммунного ответа, мы исследовали у больных рожей концентрацию провоспалительных цитокинов. Нами установлено резкое повышение концентрации провоспали-тельных цитокинов при обеих формах заболевания.

Так, у пациентов с эритематозно-буллезной формой концентрация провоспалительных цитокинов значительно повышалась: для ИЛ-1 α – до 163,8±10,2 пкг/мл, для ИЛ-1 β – до 221,0±18,2 пкг/мл, тогда как у здоровых этот показатель составлял 19,3±4,1 пкг/мл и 32,6±9,4 пкг/мл соответственно (р<0,001), таблица 2.

Одновременно выявлено увеличение уровня ФНО- α до 321,6±21,6 пкг/мл против 12,3±2,1 пкг/мл в контроле (р<0,001). Нарастало и содержание хемокина ИЛ-8 с 25,9±4,2 пкг/мл до 282,3±19,7 пкг/мл (р<0,001). При эритематозной форме также выявлялись высокие значения концентрации провоспалительных цитокинов (табл. 2).

Как можно объяснить полученные результаты? Ранее Ю.А. Витковским и соавт. установлено, что феномен лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии представляет собой одну из физиологических функций, присущую различным субпопуляциям лимфоцитов и реализуемую посредством адгезивных молекул [2]. Показано, что Т-хелперы (CD4+) способны к спонтанному розеткообразованию с интактными тромбоцитами, а ИЛ-2 и ИЛ-1β повышают эту способность у хелперно-индуцирующих клеток с интактными тромбоцитами и индуцируют ее у натуральных киллеров (CD16+). Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия регулируется цитокинами и индукторами агрегации тромбоцитов. Повышают эту функцию ИЛ-1β, ИЛ-2, коллаген, адреналин и аденозиндифосфат (АДФ). Ингиби- торами лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются ИЛ-4, ИЛ-10 и ИФНγ [2, 3, 6, 9, 10]. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбоцитарного взаимодействия нам представляется следующим. При повреждении тканей и сосудистой стенки нарушается целостность эндотелия, тем самым затрудняется экспрессия большинства молекул адгезии, в результате чего в зоне воспаления страдает кооперация и миграция клеток. В связи с этим значительно расширяются функции тромбоцитов. В частности благодаря ЛТА лимфоциты, контактирующие с кровяными пластинками, адгезированными к субэндотелию, могут вступать во взаимодействие с коллагеновыми волокнами. Более того, кровяные пластинки, адгезированные на коллагене, снижают реакцию лимфоцитов на эти волокна как на антиген и тем самым проявляют супрессивные свойства. Одновременно тромбоциты отчасти компенсируют недостающую антигенпрезентирующую функцию, утерянную в связи с повреждением эндотелия. При этом контакт лимфоцитов с кровяными пластинками усиливается за счет высвобождающегося из тромбоцитов ИЛ-1, стимулирующего функцию Тh1. Под воздействием ИЛ-1 индуцируется секреция ИЛ-2, стимулирующего Тh2и NK-клетки. Как известно, ИЛ-2 является специфическим индуктором экспрессии ICAM-1, рецептор к которой располагается на мембране лимфоцита [2]. Активированные лимфоциты усиленно адгезируют тромбоциты и благодаря ретракции последних продвигаются далее через поврежденную стенку сосудов вглубь поврежденного участка, где развивается иммунный ответ [11, 12].

При роже заметно резкое снижение лимфоцитарнотромбоцитарной адгезии. Уменьшение показателя и степени ЛТА при роже является ранним признаком развития вторичной иммунологической недостаточности, когда число клеток еще остается в пределах нормальных значений и концентрация провоспалительных цитокинов, способных их стимулировать, достигает высокого уровня.

Выводы

• 1.    При роже снижается способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты. Показатель и степень лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии являются более выразительными маркерами функции иммунокомпетентных клеток при данном заболевании по сравнению с изменением числа лимфоцитов. Более тяжелое течение рожи (эритематозно-

• буллезная форма) сопровождается большими сдвигами параметров ЛТА.

• 2.    У больных рожей существенно повышается продукция провоспалительных цитокинов – ИЛ-1 α , ИЛ-1 β , ФНО α и хемокина ИЛ-8.