Мембранопротекторный эффект глатирамера ацетата у больных ремиттирующей формой рассеянного склероза

Терапия препаратами ПИТРС (препаратами, изменяющими течение рассеянного склероза) является наиболее перспективной в лечении этого тяжелого заболевания. Представителем этой группы лекарственных препаратов является глатирамера ацетат, зарегистрированный для лечения ремиттиру-ющей формы рассеянного склероза (РС). Действующим веществом глатирамера ацетата является синтетический полимер, образованный 4 природными аминокислотами: L-глютаминовой кислотой, L-аланином, L-тирозином и L-лизином с молекулярным весом от 14 до 23 кДа [3, 13]. В результате многочисленных исследований в нашей стране и за рубежом было установлено, что глатирамера ацетат достоверно снижает число обострений и замедляет прогрессирование инвалидизации при рассеянном склерозе [3, 4]. Вместе с тем, механизм действия препарата еще нуждается в уточнении.

Материалы и методы.

В режиме мониторирования нами были обследованы 69 больных ремиттирующим рассеянным склерозом (РРС). Общая продолжительность исследования составила 2 года. Диагноз РС установлен на основании критериев McDonald с соавт. [15].

Все больные РРС были разделены на две группы: 46 пациентов получали глатирамера ацетат в комплексе лечебных мероприятий (группа наблюдения) и 23 - метаболическую терапию без ПИТРС (группа сравнения).

Для решения поставленных задач нами использован комплекс биохимических и биофизических методов исследования, а в качестве модели - эритроцит периферической крови (стабилизатор - гепарин в количестве 25 ЕД на 1 мл крови). Мембранный комплекс (тени эритроцитов) получали методом осмотического гемолиза [2].

Исследовали биохимические параметры:

• 1.    Уровень антиоксидантной защиты (на основании определения содержания альфа-токоферола -жирорастворимого антиоксиданта [ 10 ] , исследования активности: супероксиддисмутазы - фермента антирадикальной защиты, каталазы - фермента ан-типерекисной защиты, а также глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы [8]).

• 2.    Структуру липидной фазы эритроцитарных мембран оценивали на основании определения содержания фосфолипидов в мембранах эритроцитов методом тонкослойной хроматографии на силикагеле и определения холестерина методом, основанном на реакции Златкиса [ 8 ] .

• 3.    Активность процессов перекисного окисления липидов оценивали на основании изучения содержания продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов: концентрации диеновых конъюгатов полиненасыщенных жирных кислот фосфолипидов и концентрации шиффовых оснований [ 2, 8 ] .

Специальные исследования проведены у каждого больного группы сравнения дважды (в начале исследования и после 2-х лет наблюдения). У каждого больного основной группы специальные исследования проведены в первые 6 месяцев исследования – один раз в месяц, в дальнейшем – каждые три месяца (всего 11 исследований у каждого больного в течение 2 лет).

Для проведения статистической обработки фактического материала использовали статистический пакет SAS 8,0 (SAS Inc., США). Использовали критерии t и χ2. Результаты считали достоверными при р<0,05.

Результаты и обсуждение.

В процессе двухлетнего наблюдения двух групп больных РРС мы проанализировали клиническую эффективность глатирамера ацетата. Полученные результаты аналогичны имеющимся литературным данным о клинической эффективности препарата [3, 4, 6, 12]. Средняя частота обострений на 1 больного за 2 года в группе, получавшей гла-тирамера ацетат, составила 0,78, в то время как в группе сравнения – 2,91.

Средний балл инвалидизации после двухлетнего лечения глатирамера ацетатом составил 2,15 балла, то есть практически не изменился по сравнению со степенью инвалидизации до лечения. В группе сравнения этот показатель за двухлетний период наблюдения увеличился с 2,21 до 3,26.

Наряду с анализом клинической эффективности глатирамера ацетата, мы изучили влияние препарата на состояние основных звеньев системы антиоксидантной защиты, активность процессов перекисного окисления липидов у больных РРС во взаимосвязи со структурой липидной фазы мембран эритроцитов.

Анализ состояния отдельных звеньев системы антиоксидантной защиты у больных РРС позволил выявить ряд изменений: при исходно сниженном уровне активности ферментов антиоксидантной защиты и истощении пула альфа-токоферола в мембранах эритроцитов у больных РРС, на фоне применения глатирамера ацетата мы установили повышение активности глюкозо – 6 - фосфатдегидрогеназы, супероксиддисмутазы, каталазы. В этой же группе пациентов показано также постепенное повышение содержания альфа-токоферола в мембранах эритроцитов. В то же время в группе сравнения нами установлен низкий уровень активности ферментов антиоксидантной защиты и истощение пула альфа-токоферола как в начале, так и в финале исследований (через 2 года).

Таблица 1

Активность ферментов антиоксидантной защиты и содержание альфа-токоферола в мембранах эритроцитов у больных РРС на фоне лечения глатирамера ацетатом в динамике наблюдения (М±m)

Анализирумые периоды наблюдения	Анализируемые показатели активности ферментов антиоксидантной защиты у больных РРС
	Г6ФДГ мU мл (662,9±29,9)		СОД % торм. (45,3±2,9)	Каталаза ммоль мин. мл (3,9±0,1)	Альфа-токоферол нмоль. мл (5,8±0,28)
до назначения глати-рамера ацетата	485,3±15,6*		42,6±1,3	3,16±0,09*	4,4±0,17*
через 1 месяц	607,13±14,8*	**	48,36±1,2  **	3,19±0,09*	4,0±0,18*
через 3 месяца	547,2±19,6 *	**	56,4±2,0*  **	3,70±0,08   **	5,21±0,2   **
через 6 месяцев	706,25±21,4	**	40,6±1,9	3,85±0,1    **	4,95±0,2   **
через 9 месяцев	749,2±21,6 *	**	54,9±2,8*  **	3,82±0,08   **	4,8±0,2 *
через 12 месяцев	623,8±18,5	**	68,3±2,0*  **	3,7±0,09    **	4,4±0,17 *
через 18 месяцев	843,1±18,9 *	**	59,9±1,8*  **	3,25±0,09*	5,5±0,21   **
через 21 месяц	940,1±27,9 *	**	58,3±1,9*  **	4,61±0,1 * **	6,1±0,12   **
через 24 месяца	847,9±19,6 *	**	62,3±1,2*  **	4,52±0,08* **	6,0±0,14   **

Примечание: в этой таблице и всех последующих m - ошибка среднего арифметического;

* - уровень статистической значимости различий между показателями у здоровых и больных РРС; (р<0,05); ** -уровень статистической значимости различий между показателями до назначения глатирамера ацетата и на фоне глатирамера ацетата в разные периоды наблюдения; (р< 0,05);

Таблица 2

Активность фосфолипазы А2 и содержание липоперекисей в мембранах эритроцитов у больных РРС (M±m)

Анализируемые периоды и клинические группы		Величины анализируемых показателей
Показатели нормы		ФЛА2 % гемолиза (4,43±0,21)	ДК нмоль/мл (48,4±3,5)	ШО у.е. флюор. (18,3±1,02)
У больных РРС при первичном обследовании n=69		19,1±0,21*	125,37±4,1*	28,5±3,5*
В группе наблюдения в процессе лечения глатирамера ацетатом n=46	через 1 месяц	9,83±0,6*/**	107,2±5,1*/**	20,33±1,8**
	через 3 месяца	5,57±0,3*/**	106,2±3,5*/**	21,7±1,3*/**
	через 6 месяцев	6,14±0,1*/**	100,1±4,3*/**	19,0±1,3**
	через 9 месяцев	5,35±0,2**	112,2±3,3*/**	19,1±1,0**
	через 12 месяцев	6,6±0,1*/**	76,4±2,8*/**	20,3±1,1**
	через 18 месяцев	5,62±0,16*/**	100,1±2,3*/**	20,0±1,4**
	через 21 месяц	5,35±0,2**	98,3±3,2*/**	19,4±1,04**
	через 24 месяца	6,11±0,17*/**	96,6±3,4*/**	18,8±1,01**
В группе сравнения n=23	через 2 года наблюдения	18,9±0,22*	128,4±3,8*	29,9±2,1*

Примечание: * - уровень статистической значимости различий между показателями у здоровых и больных РРС; (p<0,05); ** - уровень статистической значимости различий между показателями до назначения глатирамера ацетата и на фоне глатирамера ацетата в разные периоды наблюдения; (p<0,05)

В качестве критериев для определения активности мембрано-дестабилизирующих процессов исследовали уровень функциональной активности эндогенных фосфолипаз и динамику накопления продуктов перекисного окисления липидов – диеновых конъюгатов и шиффовых оснований. Данные представлены в таблице 2.

В процессе двухлетнего динамического наблюдения нами установлена прогредиентная тенденция к снижению исходно повышенного уровня активности фосфолипазы А2 и уменьшению содержания продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов и шиффовых оснований) в мембранах эритроцитов у пациентов на фоне лечения глатирамера ацетатом, наиболее выраженная к концу второго года наблюдения. У больных в группе сравнения, не получавших лечения глатирамера ацетатом, сохранялись высокие показатели активности фосфолипазы и содержания продуктов перекисного окисления липидов, достоверно отличные от параметров нормы.

Таким образом, мы можем утверждать, что применение глатирамера ацетата в комплексе лечения позволяет уменьшить проявления оксидантного стресса в организме больных РРС. Применение гла-тирамера ацетата препятствует истощению пула альфа-токоферола, что косвенно оказывает мембранопротекторное действие.

Заключение. В целом, в настоящей работе получены данные, позволяющие установить мембранопротекторное действие глатирамера ацетата при рассеянном склерозе, которое реализуется путем влияния на мембранодестабилизирующие процессы и активность антиоксидантной системы. Полученные нами результаты являются не только до- казательством клинической эффективности глати-рамера ацетата у больных рассеянным склерозом, но и расширяют представления о механизме действия препарата [1, 4, 7, 9, 11, 14].