Микробиологическая безопасность свежей рыбы, зараженной трематодами, с учетом санитарного состояния водоемов

Введение. Рыбоводческая деятельность была и остается одной из ведущих отраслей в Российской Федерации, что обеспечивается огромным рыбохозяйственным фондом нашей страны. За последние 10 лет объем добычи рыбы увеличился на 47 % в сравнении с предыдущим десятилетием [1]. Благодаря инновационному оборудованию стало возможным получение высококачественной продукции, обладающей большим количеством необходимых человеку полезных веществ. Особенно активно рыбохозяйственная деятельность осуществляется на территории Южного федерального округа в связи с благоприятными климатичес- кими условиями территорий. При всех типах рыбоводства преобладает разведение карповой, осетровой, хищной рыбы [2].

В процессе производства рыба может быть заражена патогенами бактериальной, вирусной, паразитарной этиологии, поэтому необходимо осуществлять контроль на всех этапах выработки рыбной продукции. Так, согласно ветеринарному законодательству, в свежей рыбе не допускается обнаружение жизнеспособных личинок гельминтов, опасных для здоровья человека [3]. В этот перечень возбудителей паразитарных болезней входят описторхисы, клонорхисы, псевдомфисты, метагонимусы, нанофиетусы, эхинохазмусы, меторхисы, россикотремы, апо-фалусы, дифиллоботрии, анизакиды и др. С целью предупреждения паразитарных болезней предусмотрен комплекс ветеринарных профилактических и лечебных мер на рыбоводческих предприятиях, проведение ветеринарносанитарной экспертизы живой рыбы непосредственно перед ее реализацией и на перерабатывающих предприятиях [4]. Однако учету не подлежат заболевания, не оказывающие прямого воздействия на организм человека, но способные стать причиной отравлений и токси-коинфекций. К числу таких заболеваний относятся диплостомоз и постдиплостомоз, возбудителями которых являются трематоды [5]. Размер тела трематод не более 1,0 мм, они имеют вытянутую овальную форму тела, на передней части - ротовую присоску и несколько придаточных. Промежуточными хозяевами принято считать пресноводных моллюсков и рыб разных видов, окончательным или дефинитивным хозяином - рыбоядных птиц. Для человека данное заболевание не является опасным, но, по данным многих авторов, способно стать причиной снижения качества получаемой продукции рыбного происхождения, опасной для здоровья человека и животных [6]. При этом существует мнение, что рыба может быть подвержена контаминации патогенными и условно-патогенными микроорганизмами еще на этапе ее выращивания, чему способствует низкое санитарное состояние места обитания [7].

Цель исследования - изучение взаимосвязи между микробиологическими показателями рыбы, зараженной диплостомозом и постдипло-стомозом, и показателями ветеринарно-санитарной безопасности водоемов, задействованных при ее выращивании.

Задачи: определение основных паразитологических показателей зараженных рыб: интенсивность инвазии (ИИ), экстенсивность инвазии (ЭИ), видовая предрасположенность рыбы к возбудителям трематодозов; проведение микробиологического анализа полученной свежей рыбы и места ее выращивания с учетом степени инвазированности рыбы возбудителями дип-лостомоза и постдиплостомоза.

Материалы и методы. Исследование было проведено в условиях Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветери- нарного института в летний и осенний сезоны года. Материалом для исследования послужила рыба разных видов - Hypophthalmichthys molitrix (толстолоб), Cyprinus carpio (карп), Ctenopharyn-godon idella (белый амур), Abramis brama (лещ), как зараженная трематодами, так и клинически здоровая. Изучению была также подвергнута вода места добычи рыбы, отобранная из Нижнедонского канала, Веселовского, Пролетарского и Цимлянского водохранилищ.

Паразитологическое исследование рыбы проводилось с использованием метода микроскопии ввиду небольших размеров трематод и невозможностью их обнаружения невооруженным глазом.

С целью обнаружения диплостом в глазном яблоке исследовали хрусталик глаза и стекловидное тело на наличие трематод. Пораженные постдиплостомами участки кожных покровов вскрывали скальпелем. Полученное содержимое переносили в чашку Петри. После предварительной обработки полученный материал изучали под микроскопом для подсчета особей паразитов с последующим определением ИИ и ЭИ.

Для лабораторного анализа рыбы небольшое количество мышечной ткани, но не менее 26 г, отобранной с разных частей туловища, измельчали стерильными ножницами и переносили в колбу, откуда отбиралось необходимое для исследований в последующем количество рыбного фарша.

Отбор проб воды производился с каждого участка вылова рыбы металлическим черпаком в стерильные фляги объемом 500 мл.

Микробиологический анализ рыбной продукции, воды естественных и искусственных водоемов осуществлялся после внесения исследуемого материала на общие, элективные и дифференциально-диагностические питательные среды с последующим инкубированием в заданном температурном режиме (33,5 ± 4,5°) в течение 18-48 ч [8, 9].

Расчет статистических показателей проводился согласно общепринятым математическим формулам, рекомендованным при работе с качественными и количественными величинами, полученными при проведении опыта. Для выявления взаимосвязи между сравниваемыми признаками использовался расчет линейной корреляции Пирсона, а для обозначения правильно- сти гипотез результатов исследований – критерий Стьюдента [10].

Результаты и их обсуждение. Согласно результатам паразитологических исследований свежей рыбы, представленным в таблице 1, заражению диплостомами и постдиплостомами в наибольшей степени была подвержена рыба

Таблица 1

Результаты гельминтологического исследования рыбы, зараженной трематодами

вида Hypophthalmichthys molitrix (толстолоб) и Cyprinus carpio (карп). Так, результаты процентного соотношения зараженных особей составили 23,81 и 31,5 %; среднего значения обнаруженных личинок – 35,58 ± 3,95 и 17,60 ± 2,64 ед. соответственно.

Вид рыбы	Кол-во обследованных	Кол-во зараженных	Интенсивность инвазии, особ/экз.	Экстенсивность инвазии, %
Толстолоб ( Hypophthalmichthys molitrix )	105	25	35,58 ± 3,95	23,81
Карп ( Cyprinus carpio )	103	24	17,60 ± 2,64	23,30
Лещ ( Abramis brama )	101	7	12,57 ± 1,22	6,93
Белый амур ( Ctenopharyngodon idella )	95	2	1,9 ± 0,15	2,11

Наименьшая интенсивность и экстенсивность инвазии установлена у рыб вида Cteno-pharyngodon idella (белый амур), что можно расценить как их низкую предрасположенность к возбудителям трематодозов рыб. Интенсивность инвазии у толстолоба в сравнении с белым амуром была выше в 11,3 раза, у карпа – в 9,3, у леща – в 6,6 раза; экстенсивность инва- зии (ЭИ) была выше у толстолоба в 11,3 раза, у карпа – в 11,0, у леща – в 3,3 раза.

Бактериологический анализ зараженной и клинически здоровой рыбы представлен в таблице 2. Как в здоровой, так и в зараженной трематодами рыбе при ее микробиологическом исследовании были обнаружены бактерии рода Staphylococcus, Escherichia, Klebsiellа, Salmonella.

Таблица 2

Показатель качества рыбной продукции	Бактериальная обсемененность промысловых рыб
	Толстолоб ( Hypophthalmichthys molitrix )	Лещ ( Abramis brama )	Карп ( Cyprinus carpio )	Белый амур ( Ctenopharyngodon idella )
1	2	3	4	5
Клинически здоровая рыба
БГКП (0,01 г/см3)	0,73 ± 0,40	0,5 ± 0,1	0,7 ± 0,3	0,30 ± 0,11
КМАФАнМ, КОЕ/г (1·104)	1,14 ± 0,037	1,50 ± 0,29	1,55 ± 0,44	1,10 ± 0,19
Микроо	рганизмы, обнаруженные в клинически здоровой рыбе
Staphylococcus sp . (0,01 г)	0,30 ± 0,15	0,10 ± 0,05	0,19 ± 0,08	0,10 ± 0,05
Escherichia sp . (0,01 г)	0,20 ± 0,17	0,30 ± 0,17	–	0,40 ± 0,23
Klebsiellа sp . (0,01 г)	0,01 ± 0,005	0,03 ± 0,013	0,02 ± 0,01	0,06 ± 0,023
Salmonella sp . в 25 г продукции	0,02 ± 0,01	–	–	–
Рыба, зараженная личинками трематод
БГКП (0,01 г/см3)	1,86 ± 0,87	1,9 ± 0,56*	1,3 ± 0,77	0,30 ± 0,07
КМАФАнМ, (КОЕ/г 1·104)	16,8 ± 9,9***	6,5 ± 2,3**	6,58 ± 3,2**	4,58 ± 1,7**

Окончание табл. 2

1	2	3	4	5
Микроорганизмы, обнаруженные в зараженной трематодами рыбе
Staphylococcus sp . (0,01 г)	7,3 ± 3,7***	1,76 ± 0,9***	6,3 ± 3,5***	1,5 ± 0,7***
Escherichia sp. (0,01 г)	0,30 ± 0,17	0,36 ± 0,17	0,6 ± 0,21	0,5 ± 0,37
Klebsiellа sp . (0,01 г)	1,1 ± 0,55***	0,70 ± 0,33***	1,7 ± 0,7***	0,3 ± 0,02***
Salmonella sp . в25 г продукции	0,90± 0,36***	–	0,80 ± 0,48	0,10 ± 0,07

Примечание : (*) – р ≤ 0,05; (**) – р ≤ 0,01; (***) – р ≤ 0,001 относительно незараженной рыбы.

Бактериальная обсемененность промысловых рыб, выловленных из естественных водоемов Волго-Донского бассейна

Так, у высокоинвазированных рыб вида Hypophthalmichthys molitrix (толстолоб), Cyprinus carpio (карп) мезофильных аэробов и факультативных анаэробных микроорганизмов обнаружено соответственно в 14,7 и 4,24 раза больше в сравнении со здоровой рыбой; по среднему значению обнаруженных бактерий группы кишечной палочки – в 2,54 и 1,86; по количеству обнаруженных Staphylococcus sp. в 24,3 и 33,15; Escherichia sp. – в 1,5 и 0,6; Klebsiellа sp. – в 110

и 85; Salmonella sp. – в 45 и 0,8 раза больше соответственно.

У низкоинвазированных рыб вида Abramis brama (лещ) и Ctenopharyngodon idella (белый амур) общее количество микроорганизмов превышало таковое в здоровой рыбе в 4,3 и 4,16 раза соответственно; по количеству бактерий группы кишечной палочки – в 19 и 0,1; Staphylococcus sp. – в 17,6 и 15; Escherichia sp. в 1,2 и 1,25; Klebsiellа sp . – в 2,3 и 1,75 раза соответственно.

Таблица 3

Микробиологические показатели санитарной безопасности водоема	Водоем
	Нижнедонской канал	Пролетарское водохранилище	Веселовское водохранилище	Цимлянское водохранилище
ОМЧ, КОЕ/мл (1·106)	13,8 ± 5,06	19,6 ± 7,26	16,8 ± 8,21	13,5 ± 5,38
Коли индекс (не более 9, КОЕ/л)	5,5 ± 0,29	7,6 ± 0,3	8,1 ± 0,8	4,3 ± 0,25
Коли титр (не менее 111 мл)	152,1 ± 35,0	153,2 ± 35,6	180,0 ± 21,3	125,5 ± 38,4
Обнаруженные микроорганизмы (1·104 КОЕ/мл)
Micrococcus sp.	2,3 ± 0,7	2,7 ± 0,9	1,4 ± 0,6	2,3 ± 1,0
Azotobacter sp.	1,2 ± 0,4	1,7 ± 0,8	2,9 ± 0,7	3,3 ± 0,12
Pseudomonas sp.	4,2 ± 1,1	3,3 ± 1,7	2,1 ± 0,8	7,4 ± 2,9
Bacillus sp.	3,66 ± 1,6	9,56 ± 3,2	10,03 ± 4,3	1,0 ± 0,33
Klebsiellа sp.	11,2 ± 3,3	14,3 ± 4,2	9,6 ± 2,7	8,6 ± 2,6
Escherichia sp.	2,3 ± 0,8	4,3 ± 2,1	6,5 ± 3,2	2,2 ± 0,9
Staphylococcus sp.	1,35 ± 0,21	1,59 ± 0,4	2,69 ± 0,64	1,20 ± 0,61
Salmonella sp.	5,28 ± 2,7	12,8 ± 5,2	2,03 ± 1,03	5,8 ± 2,3

Микробное загрязнение воды в местах вылова рыбы

Согласно данным таблицы 3, в исследуемых водоемах Ростовской области: Нижнедонском канале, Пролетарском, Веселовском, Цимлянском водохранилищах – обнаружили высокие значения бактерий разных видов, в т. ч. патогенных, из которых отметили Klebsiellа sp. , Escherichia sp. , Staphylococcus sp. , Salmonella sp.

Поэтому с целью определения взаимосвязи между микрофлорой водоема и выловленной живой рыбы провели корреляционный анализ, при расчете которого определили показатель Пирсона в каждой исследуемой группе сравниваемых признаков. После чего определили среднее значение среди полученных величин:

0,987 + 0,991 + 0,976 + 0,989

Rср =  ^{,        ,        ,        ,}     = 0,986.

Сравнивая полученный коэффициент корреляции, равный 0,99, со значением для четырех измерений, полученное число превосходило табличное не только для достоверности 95 %, но и для достоверности 99 %.

Заключение. Исходя из результатов исследования, отмечаем, что наиболее восприимчивы к трематодозам рыбы вида Hypophthalmichthys molitrix (толстолобик) и Cyprinus carpio (карп), экстенсивность инвазии которых составила 23,81 и 31,5 % соответственно; интенсивность инвазии – 35,58 ± 3,95 и 17,60 ± 2,64 особ/экз. соответственно.

При изучении сравниваемых микробиологических показателей рыб отметили, что показатели клинически здоровых, низко- и высокоин-вазированных рыб отличались между собой по количеству обнаруженного КМАФАнМ, суммарного значения БКГП, в т. ч. бактерий рода Staphylococcus, Escherichia, Klebsiellа, Salmonella. Более того, при высоких ИИ и ЭИ рыбы установлены и более высокие значения показателей исследуемых микроорганизмов.

При проведении микробиологического анализа воды естественных и искусственных водоемов обнаружили высокие значения бактерий разных видов, в т. ч. патогенных, из которых отметили Klebsiellа sp., Escherichia sp. Staphylococcus sp., Salmonella sp., также диагностируемых в свежей рыбе.

Таким образом, неудовлетворительное санитарно-бактериологическое состояние водоема и сопутствующая инвазия трематодами могут стать одной из ведущих причин прижизненной контаминации рыбы условно-патогенными и патогенными микроорганизмами, опасными для здоровья человека. Поэтому ветеринарносанитарная оценка водоемов должна проводиться комплексно с включением показателей паразитологического и микробиологического состояния рыбы и микробиологических показателей санитарной безопасности водоема.