Морфологические и иммуногистохимические механизмы эволюции хронического H. pylori-ассоциированного гастрита в MALT-лимфому желудка

Автор: Косталанова Юлия Владимировна, Давыдкин Игорь Леонидович, Королева Ирина Альбертовна, Осадчук Алексей Михайлович, Гриценко Тарас Алексеевич

Журнал: Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Социальные, гуманитарные, медико-биологические науки @izvestiya-ssc-human

Рубрика: Фундаментальная медицина

Статья в выпуске: 5-4 т.16, 2014 года.

Бесплатный доступ

В динамике обследовано 49 пациентов с I и II стадиями MALT-лимфомы желудка в возрасте от 60 до 74 лет субтипов A и B по классификации D. de Jong (1997) с отсутствием транслокации - t (11;18). Исследовалась экспрессия молекул Ki-67, Bcl-2 и p53 в эпителиальной и лимфоидной ткани слизистой оболочки желудка до назначения эрадикационной и химиотерапии и при достижении морфологической ремиссии заболевания. Подтверждено наличие ассоциативной связи между прогрессированием атрофического гастрита, нарастанием выраженности кишечной метаплазии, дисплазии желудочного эпителия, степени лимфоидной гиперплазии слизистой оболочки желудка, нарушением экспрессии основных регуляторных молекул (Bcl-2, Ki-67, p53). Установлены новые механизмы прогрессирования хронического H. pylori-ассоциированного гастрита с лимфоидной гиперплазией, на заключительном этапе которого происходит формирование MALT-лимфомы желудка. Достижение клинико-эндоскопической и морфологической ремиссии MALT-лимфомы сопровождается значимым снижением экспрессии исследуемых маркеров клеточного гомеостаза (Ki-67, Bcl-2, p53).

Еще

Malt-лимфома, хронический гастрит, лимфоидная гиперплазия, атрофия

Короткий адрес: https://sciup.org/148101910

IDR: 148101910

Текст научной статьи Морфологические и иммуногистохимические механизмы эволюции хронического H. pylori-ассоциированного гастрита в MALT-лимфому желудка

Цель исследования: повышение эффективности диагностики MALT-лимфомы на основе определения иммуногистохимических показателей экспрессии Ki-67, p53 и Bcl-2.

(ХАГ) в сочетании с ЛГ I-II степеней и 30 больных с ХАГ в сочетании с ЛГ III-IV степеней. Степень ЛГ оценивалась по шкале Wotherspoon A.C. (1993). Эрадикация H. pylori проводилась в соответствии с Маастрихтскими соглашениями IV (2010) по схеме, включающей омепразол в дозе 20 мг 2 раза в сутки, кларитромицин в дозе 500 мг 2 раза в сутки и амоксициллин в дозе 1000 мг 2 раза в сутки в течение 10 дней. Химиотерапия MALT-лимфом включала схемы R-СHOP или R-CVP. Для диагностики H. pylori-инфекции использовался гистологический метод с использованием окраски по Романовскому-Гимзе и быстрый уреазный тест.

Общее гистоморфологическое исследование биоптатов и иммуногистохимическое исследование проводилось на базе Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии Северо-Западного отделения РАМН при научном консультировании з.д.н. РФ, профессора И.М. Кветного. Полученный материал фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине (рН=7,2) в течение 24 часов. Последующую обработку проводили в изопропиловом спирте по стандартной методике с изготовлением парафиновых блоков. С каждого блока были выполнены срезы толщиной 4 мкм и окрашены гематоксилином и эозином. Для иммуногистохимического окрашивания серийные парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм помещали на предметные стекла покрытые поли-L-лизином. Исследования проводились на депарафинизированных и дегидратированных срезах с использованием авидин-биотинового иммунопероксидазного метода.

Температурная демаскировка антигенов проводилась с использованием 0,01М цитратного буфера рН 6,0 под давлением. С целью блокады эндогенной пероксидазы стекла помещали в 3% раствор перекиси водорода на 10 минут. Для промывки использовался трис-NaCl-буфер рН 7,6. В качестве специальных методов использовали иммуногистохимическую верификацию молекул Ki-67, Bcl-2 и р53 в эпителии СОЖ и лимфоидной ткани в собственной пластинке слизистой.

Для выявления экспрессии Bcl-2 использовали Monoclonal Mouse Anti-Human Bcl-2 Oncoprotein (Clone 124, DAKO), разведение 1:50, время инкубации 30 минут при комнатной температуре; для выявления экспрессии p53 использовали Monoclonal Mouse Anti-Human p53 Protein (Clone DO-7, DAKO), разведение 1:25, время инкубации 30 минут при комнатной температуре; для выявления экспрессии Ki-67 использовали Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen (Clone MIB-1, DAKO), разведение 1:75, время инкубации 30 минут при комнатной температуре. В качестве вторичных антител использовали антитела, конъюгированные с полимером, маркированным пероксидазой (универсальный набор DAKO EnVisionTM). Визуализацию окрасок проводили с применением комплекса DAB+ и субстратного буфера (DAKO).

Изучение препаратов проводилось в исследовательском микроскопе Nikon Eclipse400 с использованием встроенной фотокамеры Nikon DXM1200. Для оценки результатов иммуногистохимического окрашивания проводили морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений Морфология 5.2 (Видеотест). В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении х 400. Относительную площадь экспрессии рассчитывали как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Оптическую плотность экспрессии исследуемых молекул измеряли в условных единицах.

Показатели

ХНГ /ЛГ I-II степени (N=30)

ХАГ/ЛГ I-II степени (N=30)

ХАГ/ЛГ III-IV степени (N=30)

ХАГ/MALT-лимфома (N=49)

площадь экспрессии Ki-67, %

18,5±1,1

9,6±1,28 (4****)

25,6±1,6*

15,9±1,44 (4*,5*)

36,4±1,6 (*,2*) 16,8±1,44 (4*, 5*)

47,7±1,35 (*,2*,3*)

18,9±1,26 (4*, 5*, 6*)

оптическая плотность Ki-67, ус. ед.

0,28±0,02 0,25±0,02

0,33±0,02 * 0,26±0,02 (4*)

0,42±0,02 (*, 2*) 0,31±0,02 (4*,5*,6*)

0,46±0,02 (*, 2*) 0,39±0,02 (4*, 5*, 6*, 7*)

площадь экспрессии р53, %

4,3±0,7

2,5±0,7 (4****)

11,8±0,8*

5,9±0,8 (4*,5*)

16,8±1,1 (*,2*)

6,6±0,9 (4*, 5*)

20,4±1,1 (*, 2*, 3*) 8,9±,0,77, (4*, 5*, 6*, 7*)

оптическая плотность p53, ус. ед.

0,22±0,01

0,14±0,02 (4****)

0,25±0,01* 0,16±0,01 (4*)

0,27±0,02* 0,19±0,02 (4*, 5*)

0,32±0,02 (*, 2*, 3*) 0,22±0,01 (4*, 5*, 6*)

площадь экспрессии Bcl-2, %

1,42±0,2

1,2±0,5

2,0±0,2* 1,6±0,5

3,8±0,2 (*, 2*)

2,3±0,6 (4*)

4,72±0,2 (*,2*,3*)

3,9 , ±0,5 ( , 4*, 5*, 6*, 7*)

оптическая плотность Bcl-2, ус. ед.

0,16±0,01 0,15±0,02

0,18±0,1 0,16±0,02

0,32±0,02 (*, 2*) 0,18±0,02 (4*)

0,34±0,02 0,21±0,02 (4*, 5*, 6*)

Примечание: в числителе дроби представлены показатели до проведения эрадикационной терапии H. pylori, в знаменателе – после проведения эрадикационной терапии. Знаком «*» показаны различия (р<0,05) с I группой до проведения терапии. Знаком «2*» показаны различия (р<0,05) со II группой до проведения лечения. Знаком «3*» показаны различия (р<0,05) с III группой. Знаком «4*» показаны различия (р<0,05) с периодом, предшествующим лечению. Знаком «5*» показаны различия (р<0,05) со I группой после лечения. Знаком «6*» показаны различия (р<0,05) со II группой после лечения. Знаком «7*» показаны различия (р<0,05) с III группой после лечения.

Анализ экспрессии маркеров клеточного обновления в лимфоидной ткани СОЖ показал отсутствие достоверных различий между ЛГ I-II ст. при ХНГ и ХАГ c ЛГ I-II ст. У пациентов с ЛГ III-IV ст. определялось достоверно нарастание площади экспрессии и оптической плотности экспрессии Ki-67, р53, Bcl-2. При MALT-лимфоме верифицировалось достоверное увеличение площади экспрессии Ki-67, Bcl-2 и р53 по сравнению с ЛГ III-IV ст., тогда как соответствующее увеличении оптической плотности верифицировалось лишь в отношении молекулы Ki-67 (р˂0,05). Полученные данные свидетельствуют о схожести нарушений механизмов экспрессии молекул Ki-67, p53 и Всl-2 в лимфоидной и эпителиальной ткани СОЖ у пациентов с

  • H.    pylori-ассоциированной патологией и обнажает общность механизмов их изменений.

Необходимо отметить, что после проведения эрадикационной терапии и элиминации H. pylori у всех обследованных пациентов отмечалось значительное улучшение параметров клеточного гомеостаза эпителиоцитов СОЖ. Так у больных с ХНГ и ХАГ в сочетании с различными степенями ЛГ отмечалось достоверное снижение экспрессии Ki-67 в эпителии СОЖ

Показатели

ХНГ /ЛГ I-II степени (N=30)

ХАГ/ЛГ I-II степени (N=30)

ХАГ/ЛГ III-IV степени (N=30)

ХАГ/MALT-лимфома (N=49)

площадь экспрессии Ki-67, %

4,73±0,88

4,57±0,94

5,13±0,79 4,9±0,98

11,53±1,21 (*, 2*)

9,47±1,28 (5*, 6*)

21,1±1,22 (*, 2*, 3*) 12,22±1,09 (4*, 5*, 6*, 7*)

оптическая плотность Ki-67, ус. ед.

0,18±0,01 0,17±0,01

0,19±0,01 0,19±0,02

0,27±0,01 (*, 2*) 0,24±0,01 (4*, 5*, 6*)

0,28±0,01 (*, 2*) 0,28±0,02 (5*, 6*, 7*)

площадь экспрессии р53, %

4,57±0,75

4,37±0,82

4,73±0,65 4,53±0,9

7,33±0,87 (*, 2*)

7,1±1,03 (5*, 6*)

9,12±0,64 (*, 2*, 3*)

7,65±0,87 (5*, 6*)

оптическая плотность p53, ус. ед.

0,17±0,01 0,17±0,01

0,18±0,01 0,19±0,02

0,25±0,02 (*, 2*) 0,24±0,01 (5*, 6*)

0,26±0,01 (*, 2*) 0,25±0,1 (5*, 6*)

площадь экспрессии Bcl-2, %

5,13±0,76 5,03±0,85

5,63±0,78

4,93±0,77

12,67±1,05 (*, 2*)

10,3±0,96 (4*, 5*, 6*)

20,2±1,2 (*, 2*, 3*) 13,3±1,13 (4*, 5*, 6*, 7*)

оптическая плотность Bcl-2, ус. ед.

0,2±0,02 0,19±0,01

0,22±0,01 0,2±0,02

0,28±0,02 (*, 2*)

0,27±0,02 (5*, 6*)

0,28±0,01* 0,26±0,01 (5*, 6*)

Примечание: в числителе дроби представлены показатели до проведения эрадикационной терапии H. pylori, в знаменателе - после проведения эрадикационной терапии. Знаком «*» показаны различия (р<0,05) с I группой до проведения терапии. Знаком «2*» показаны различия (р<0,05) со II группой до проведения лечения. Знаком «3*» показаны различия (р<0,05) с III группой. Знаком «4*» показаны различия (р<0,05) с периодом, предшествующим лечению. Знаком «5*» показаны различия (р<0,05) со I группой после лечения. Знаком «6*» показаны различия (р<0,05) со II группой после лечения. Знаком «7*» показаны различия (р<0,05) с III группой после лечения.

pylori и свидетельствует о перспективах использования данного метода в дифференциальной диагностике MALT-лимфомы и лимфоидной гиперплазии у пациентов с хроническими гастритами.

Список литературы Морфологические и иммуногистохимические механизмы эволюции хронического H. pylori-ассоциированного гастрита в MALT-лимфому желудка

  • Герман, С.В. Распространенность инфекции H. pylori среди населения Москвы/С.В. Герман, И.Е. Зыкова, А.В. Модестова и др.//Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2010. №2. С. 25-30.
  • Исаков, В.А. Хеликобактериоз/В.А. Исаков, И.В. Домарадский. -М.: ИД Медпрактика, 2003. 412 с.
  • Комаров, Ф.И. Особенности апоптозной активности и экспрессии регуляторных молекул (Ki-67, Bcl-2) эпителиоцитов слизистой оболочки желудка в реализации каскада Корреа/Ф.И. Комаров, А.М. Осадчук, М.А. Осадчук и др.//Клин. мед. 2007. Т.85, №10. С. 48-52.
  • Косталанова, Ю.В. MALT-лимфома желудка: современное состояние проблемы/Ю.В. Косталанова, И.А. Королева, И.Л. Давыдкин и др.//Эффективная фармакотерапия. Онкология, гематология и радиология. 2013. № 4. С. 26-29.
  • Курилович, С.А. Некоторые итоги и перспективы изучения Helicobacter pylori-инфекции в Западной Сибири/С.А. Курилович, О.В. Решетников, Л.Г. Шлыкова//Педиатрия. 2002. № 2 (приложение). С. 65-71.
  • Осадчук, А.М. Роль маркеров клеточного обновления (bcl-2, Ki-67) и апоптоза эпителиоцитов в возникновении опухолевых заболеваний желудка, ассоциированных с H. pylori/А.М. Осадчук, М.А. Осадчук, И.М. Кветной//Клин. мед. 2008. №5. С. 33-38.
  • Capelle, L.G. Gastric MALT lymphoma: Epidemiology and high adenocarcinoma risk in a nation-wide study/L.G. Capelle, A.C. de Vries, C.W.N. Looman et al./European Journal of Cancer. 2008. Vol. 44(16). Р. 2470-6.
  • Correa, P. Human gastric carcinogenesis: a multistep and multifactorial process//Cancer Res. 1992. Vol. 52. Р. 6735-6740.
  • Parsonnet, J. Helicobacter pylori infection and gastric lymphoma/J. Parsonnet, S. Hansen, L. Rodriguez et al.//N. Engl. J. Med. 1994. Vol. 330. Р. 1267-1271.
Еще
Статья научная