О биобезопасности живой вакцины против агалактии мелкого рогатого скота

Успех профилактики инфекционной агалактии овец и коз и ее ликвидации во многом зависит от качества микоплазменной вакцины . Для борьбы с контагиозной агалактией предложены в мире различные вакцины , в том числе живые аттенуированные и инактивированные формальдегидом (Lambert M., 1987; Aarabi I, Vand Yoosefi S., 1990; Consenti B., Montagna C.O., 1989). Нами ( Ф . М . Кулибеков , М . М . Фарзалиев , Г . Г . Дильбази , 1990) был впервые , в условиях Азербайджанской Республики , получен аттенуированный штамм А -319 M. agalactiae, который индуцировал выраженный иммунитет у овец к заражению высоковирулентным штаммом «8899» микоплазмы агалактии .

Целью настоящих исследований явилось изучение иммунобиологических свойств вакцинного штамма А -319 ( реактивность , контагиозность и реверсибельность ).

Материалы и методы . Исследования проводились более 10 лет в лабораторных условиях научно - производственного отдела АзНИВИ , КЗНКЛ ВГНКИ вет . препаратов и в неблагополучных по инфекционной агалактии хозяйствах Агдамского , Агджабединского , Шекинского и других районов Республики Азербайджан . При проведении экспериментов нами применялись клинические , бактериологические и серологические методы исследования .

Клинический метод использовали при наблюдении за животными зараженными музейными авирулентными и аттенуированными штаммами . Учитывали общее состояние и проявление клинических симптомов .

Бактериологические исследования пат . материалов от убитых подопытных овец проводили путем посевов из внутренних органов и лимфоузлов на мартен - сывороточные дрожжевые среды , 0,3% полужидкий агар и 1,3% полутвердый агар , приготовленных из триптического перевара бычьего сердца . В качестве ингибитора атипичной микрофлоры использовали пенициллин 100 ЕД / мл .

Морфологические свойства выделенных исходных культур M. agalactiae от зараженных подопытных овец изучали путем микроскопии мазков окрашенных по Романовскому Гимзе . Культуральные свойства проверяли путем высева на мартеновский бульон с добавлением 20% дрожжевого экстракта .

На жидких питательных средах учитывали интенсивность роста , способность образовать осадки и пленки . На твердых питательных средах обращали внимание на форму , величину и характер поверхности колоний .

В экспериментах использовали штаммы M. agalactiae «8899», А -319, а также 54 головы овец , приобретенные из благополучных хозяйств республики .

Для проведения исследований по установлению реактогенности штамма А-319 M. agalactiae в опыт были взяты 11 голов овец. Животные были разделены на 4 группы. Первой, второй и третьей группам, состоящим из 3-х голов овец, соответственно, вводили 20, 25 и 35 мл бульонной культуры, равнозначной 4-5 и 7-ми кратным иммунизирующим дозам. 4-ая группа служила контролем.

Результаты исследований . После прививки у животных третьей группы наблюдали некоторое повышение температуры тела (1-3° С ), угнетенное состояние , плохой прием корма , прихрамывание на привитые конечности . Указанные явления исчезали к 5-7 дню . Отмечающееся после прививки увеличение лимфатических узлов ( паховых , предлопаточных , шейных ) продолжалось до 15-20 дня . В результате проведенных исследований было установлено , что даже при введении массивной дозы штамма А -319 в объеме 25-35 мл , в организме овец каких - либо значительных отклонений от физиологических норм не наблюдалось . Исключением является увеличение регионарных лимфатических узлов и незначительное повышение температуры тела , впоследствии приходящей в норму . Таким образом , исследования показали , что штамм А -319 M. agalactiae обладает незначительной реактогенностью .

Для изучения возможной контагиозности штамма А -319 M. agalactiae были взяты 16 голов здоровых овец , которые были разделены на 3 группы . Первой группе , состоящей из 5- и голов овец , была введена вакцина из штамма А -319 в объеме 5 мл с титром 10⁵ КОЕ / мл . Вторая группа , состоящая из 5 голов овец , была подвергнута заражению вирулентным штаммом 8899 M. agalactiae, в объеме 5 мл с титром 10⁶ КОЕ / мл . Третью группу , состоящую из 6 голов овец , содержали совместно с 1- ой группой .

В этом опыте была изучена также динамика антителообразования как у вакцинированных , так и у зараженных животных . У всех животных до опыта и через каждые 5 дней после иммунизации и заражения , брали кровь для серологических исследований в РА . Исследования показали , что вакцинированные и находящиеся с ними в контакте овцы были клинически здоровы , температура тела и гематологические показатели находились в пределах нормы . Через 45 дней для установления контагиозности штамма А -319, 3 головы овцы , содержащиеся совместно с вакцинированными были убиты , а 3 - были подвергнуты заражению вирулентной культурой штамма 8899 в объеме 5 мл с титром 10⁶ КОЕ / мл . В результате бактериологических исследований внутренних паренхиматозных органов , лимфатических узлов , глаз , суставных жидкостей у убитых овец культура микоплазмы агалактии не была выделена . Все 3 подопытные овцы , находившиеся в контакте с вакцинированными , через 18-20 дней после заражения заболели суставной и глазной формами инфекционной агалактии , что было подтверждено бактериологическими исследованиями .

Кроме того , результаты проведенных серологических исследований показали , что у всех 6- ти голов овец , находившихся в контакте с вакцинированными , во все сроки опыта в сыворотке крови специфические антитела не обнаружены . Таким образом было установлено , что штамм А -

319 M. agalactiae не обладает контагиозностью . Одновременно была изучена динамика антителообразования , как у вакцинированных , так и у зараженных овец .

Серологические исследования показали , что специфические антитела в сыворотке крови появляются на 5-6 день после иммунизации и заражения . Максимальное увеличение титра антител отмечалось на 20-25 дни . Титр агглютининов в эти сроки был равен 1:320 и 1:640 соответственно у вакцинированных и зараженных овец . В последующие сроки было отмечено снижение титра агглютининов в обеих группах и на 45 день исследования титр был равен 1:40 и 1:80.

Нами также были изучены сроки наступления иммунитета у 6 овец , вакцинированных штаммам А -319 M. agalactiae. Все овцы были иммунизированы штаммом А -319 в объеме 5 мл с титром 10⁵ КОЕ / мл . Через 10-20-30 дней по 2 головы овцы были подвергнуты заражению вирулентным штаммом 8899, в дозе 5 мл с титром 10⁶ КОЕ / мл . В результате было установлено , что лишь одна овца , зараженная через 10 дней после иммунизации , проявила клинические признаки заболевания ( хромата , конъюнктивит ), тогда как зараженные через 20-30 дней после вакцинации , оставались клинически здоровыми . Таким образом , было установлено , что через 20 дней у иммунизированных овец наступает стойкий иммунитет . При этом показано , что сроки наступления иммунитета коррелируют со временем максимального нарастания агглютининов .

В последующей серии опытов были проведены исследования по изучению возможной реверсии вакцинного аттенуированного штамма А -319. Для этого на 6- ти головах овец были поставлены опыты с культурой штамма А -319, заложенной после 5- ти кратного пассирования на овцах в жидкий азот на хранение . Овцы были разделены на две группы по три в каждой . Первой группе овец подкожно была введена бульонная культура штамма А -319 в дозе 5 мл (10⁶ КОЕ / мл ). Через месяц животные не проявившие каких - либо клинических признаков инфекционной агалактии были убиты . После проведения бактериологических исследований , из лимфатических узлов была выделена исходная культура штамма А -319 M. agalactiae. Выделенную культуру ввели в той же дозе второй группе овец . Через месяц после инокуляции животные без проявления каких - либо клинических признаков были также убиты . И путем бактериологических исследований была выделена исходная культура , которая была заложена на хранение в жидкий азот . Эти опыты убедительно показали , что после семикратного пассирования на овцах аттенуированный штамм А -319 не реверсирует .

Обобщая результаты многочисленных исследований на значительном количестве овец можно сделать вывод, что аттенуированный штамма А-319 M. agalactiae, полученный нами путем многократного пассирования на развивающихся куриных эмбрионах, обладает высокой иммуногенностью, не реактогенен, не реверсирует и не обладает контагиозностью. Показано, что напряженный иммунитет у овец наступает на 20-30 сутки после введения им вакцины из штамма А-319 M. agalactiae.

ЛИТЕРАТУРА : 1. Кулибеков , Ф . М . Изучить эпизоотологию , усовершенствовать методы специфической профилактики и диагностики агалактии мелкого рогатого скота / Ф . М . Кулибеков , Г . Г . Дильбази , М . М . Фарзалиев // Отчет заключительный Азербайджанского научно исследовательского ветеринарного института . – Баку , 1990. 2. Aarabi I. Determination of the viability at +4C of freeze-dried attenuated live agalactiae vaccine / Aarabi I., Vand Yoosefi J. // Arch. Inst. Razi, 1990, N 41. – P. 58-61. 3. Consenti B. Profilassi dell”agalassia contagiosa degli ovi-caprini / Consenti B., Montagna C.O. // ODV Obiettivi Doc. Veter, 1989, T. 10, N 5. – P. 31-33. 4. Lambert M. Assessment of a live attenuated vaccine against Mycoplasma agalactiae / Lambert M. // Contagious agalactia and other mycoplasmal diseases of small ruminants, 1987. – P. 71-76.

О БИОБЕЗОПАСНОСТИ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ АГАЛАКТИИ МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА

Кулибеков Ф . М . Резюме

Установлено , что аттенурованный штамм А -319 M. agalactiae, полученный нами путем многократного пассирования на развивающихся куриных эмбрионах , обладает высокой иммуногенностью , не реактогенен , не реверсирует и не обладает контогиозностью . Напряженный иммунитет у овец наступает на 20-30 сутки после введения им вакцины из штамма А -319 M. agalactiae.

BIOSAFETY OF LIVE VACCINE AGAINST OVINE CONTAGIOUS AGALACTIA

Qulibekov F.M. Summary

Attenuated M. agalactiae А -319 strain produced after series of passages on chicken embryos was determined to have high immunogenicity; it does not induce responses, reverse reactions, and loesn not have contagiocity. Ovine immunity becomes strained at 20-30 daes after vaccination with M. agalactiae A-319 strain.