Оценка гуморального иммунитета у коров, вакцинированных вакциной «Коглавакс»

Одним из основных задач ветеринарной науки и практики является обеспечение высокой сохранности молодняка сельскохозяйственных животных. Молодняк в ранний постнатальный период подвержен инфекционным болезням и прежде всего желудочно-кишечными [2, 5]. По мнению многих ученых в возникновении желудочно-кишечных болезней основная роль принадлежит возбудителям клостридиозной и эшерихиозной этиологии крупного рогатого скота [2, 4, 11]. Наиболее часто кишечные инфекции возникают у этих животных, вызванные возбудителем Cl. perfringenes , который имеет несколько типов А, В, С, Д и Е. У животных они имеют широкое распространение, каждый из которых вызывает тяжелые анаэробные энтеротоксемии.

Наиболее эффективным средством борьбы с клостеридиозами животных является вакцинация [3]. Для этого разработаны множество вакцин, как зарубежного, так и отечественного производства. И в этой связи, контроль результативности вакцинопрофилактики остается актуальным, т.к. низкая эффективность профилактики может привести к возникновению инфекционного процесса. Причиной этому могут быть пропуски животных при вакцинации, толерантность организма и наконец потери активности вакцины [6,7]. Поэтому при применении новых и тем более зарубежных вакцин необходимо проводить контроль за процессом иммуногенеза [9]. Одним из надежных методов контроля вакцинопрофилактики, это установление специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных серологическими методами.

Цель исследования – оценить поствакцинальный иммунитет у коров, привитых вакциной «Коглавакс».

Материал и методы исследования . Объектом исследований были стельные коровы черно-пестрой породы, ранее не вакцинированные. Иммунизацию проводили вакциной поливалентной инактивированной «Коглавакс», изготовленной из альфы, бета и эпсилон анатоксинов возбудителя Clostridium perfringens типов А, В, С, D, а также анатоксинов Clostridium septicum, Clostridium novyi тип B, Clostridium tetani и Clostridium chauvoei . Вакцинацию проводили согласно инструкции, путем 2-кратного введения вакцины в область шеи подкожно, в дозе 2 мл. Для создания колострального иммунитета у молодняка не вакцинированных беременных маток вакцинировали в тех же дозах дважды с интервалом 4 недели не позднее, чем за 6 и 2 недели соответственно до ожидаемых родов; ранее вакцинированных беременных маток вакцинировали в тех же дозах однократно не позднее, чем за 2 недели до ожидаемых родов.

Вакцину вводят клинически здоровым животным с соблюдением правил асептики.

Животные для исследования подбирались по принципу аналогов, которые находились в одинаковых условиях кормления и содержания. Иммуногенную активность вакцины «Коглавакс» изучали на 16 коровах.

Уровень антител в сыворотке крови и в молозиве к возбудителю Clostridium perfringens α, β, ε – токсину, устанавливали в ИФА. Для этого применяли наборы ИФА для определения антител: к эпсилону, альфа и бета токсинам, изготовленный «Biox diagnostics», Франция.

Результат исследований. До вакцинации у 16 голов (10 % от опытных животных) были исследованы пробы сыворотки крови в ИФА. Все исследованные животные по результатам ИФА были негативны, т.е. антитела к антигену Cl. perfringenes не выявлены. Далее эти животные были иммунизированы вакциной поливалентной инактивированной «Коглавакс».

Наличие антитела в сыворотки крови от вакцинированных коров к антигену Cl. рrefringenes тип В к токсинам α, β и ε, устанавливали в ИФА. Для этого образцы сыворотки крови разбавляли вдвое в фосфатно-селевом буфере. Двукратно разведенную сыворотку, каждую пробу в отдельности, в трех проворностях (к антигену α, β и ε токсин) внесли непосредственно в лунки микропланшет. То же самое проделали и с контрольными сыворотками (положительный и отрицательный контроли), согласно инструкции. Подготовленные таким образом планшеты с образцами испытуемых проб инкубировали при 37 °C в течение 2-х часов. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Антитела сыворотки крови коров к возбудителю Cl. рerfringenes

Примечание: «-» - отрицательная проба; «+» - положительная проба

В таблице представлены результаты ИФА по степени активности антител в пробах сыворотки крови. Наиболее активные пробы выражены в 4-и креста и наименее – в 1 и 2 креста.

Как видно из таблицы, у стельных коров после вакцинации установлено наличие антител в сыворотке крови.

Титры антител в сыворотке крови коров вырабатывались на все три токсина Cl. рerfringenes на одном уровне. Наиболее активны антитела были выработаны к эпсилон токсину у 50 % животных, к бета – 40 % и к альфа – 30 %. Антитела отсутствовали или были на низком уровне у 5 коров из 16 к альфа токсину; к бета токсину отсутствовали у 2-х; к эпсилону – с низким титром отмечено у 4-х коров. К эпсилон токсину отрицательных реакций не было.

Анализируя результаты ИФА можно отметить, что животные более активно реагируют на эпсилон токсин, и менее к альфа токсину. Между тем, среди вакцинированных животных отмечаются и толерантные животные. На все три токсина у этих животных отсутствуют антитела или отмечаются с низким титром антител.

На втором этапе опытов провели определение специфических антител в молозиве от отелившихся коров. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2 – Титр Ат в молозиве к Cl. рerfringenes в ИФА

Экспериментальные исследования показали, что антитела в молозиве у коров сохранялись и после отела. Средние титры секреторных антител молозива к альфа токсину составили 2,6 + 0,54 log²; к бета токсину – 3,5 + 0,35 log²; к эпсилон токсину – 4,2 +1,4 log². Животные, которые не реагировали на вакцину путем синтеза антител в сыворотке крови до отела, у этих животных отсутствовали титры антител в молозиве и после отела. Коровы с порядковыми номерами 2, 9, 11, и 12 показали отрицательные результаты в ИФА, у этих животных в молозиве отсутствовали антитела.

Заключение. Результаты проведенных исследований позволяют заключить, что вакцина поливалентная инактивированная, изготовленная из альфа, бета и эпсилон анатоксинов возбудителя Clostridium perfringens типов А, В С, D, а также анатоксинов Clostridium septicum, Clostridium novyi тип B, Clostridium tetani и Clostridium chauvoei веденная стельным коровам создает гуморальный поствакцинальный иммунитет. Исследованиями установлено, что синтез антител идет на все токсины возбудителя Clostridium perfringens. Однако наиболее активны в ИФА антитела к эпсилону и бета токсину. В молозиве антитела в этой же последовательности в серологической реакции сохраняются. Между тем, среди вакцинированных животных отмечаются и толерантные животные. На все три токсина у этих животных отсутствуют антитела или отмечаются с низким титром. У этих животных антитела отсутствуют и в молозиве после отела. Причинный фактор феномена иммунологической толерантности крупного рогатого скота в данном случае можно объяснить введением сверхбольших или сверхмалых доз вакцины. Возможно, так же частые или многократные иммунизация взрослых животных. Механизм иммунологической толерантности сводится в том, что вакцина, веденная в организм плохо, или не захватывается фагоцитами и следствие чего не успевает фагоцитироваться и информация об антигене не передается к Т и В – лимфоцитам, так как в развитии иммунологической толерантности участвуют макрофаги и лимфоциты. Толерантность может быть адаптировано и в постнатальном периоде у молодняка животных. Повысить иммунологическую резистентность таких животных возможно с применением иммуностимулирующих препаратов.