Показатели клеточного иммунитета у молодых лиц при тяжелом течении орофациальной герпетической инфекции

Введение. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции, способны поражать практически все органы и системы хозяина, длительно, пожизненно персистировать в его тканях, вызывая поражения различной степени тяжести. К тяжелым формам герпетической инфекции относятся случаи часто (более 6 раз в году) рецидивирующей инфекции (Н.А. Дидковский, И.К. Милашенкова и др.). Важной задачей современной иммунологии является анализ механизмов тяжелого течения вирусного заболевания, способов уклонения патогенов от иммунного контроля. Учитывая ключевую роль клеточного звена иммунитета в защите против внутриклеточных патогенов, особое значение приобретает при тяжелой орофациальной герпетической инфекции у молодых людей изучение состояния данной ветви иммунитета.

Материалы и методы. Исследование проводили на базе аллергологического отделения городской клинической больницы № 2 г. Челябинска и кафедры иммунологии и аллергологии Челябинской государственной медицинской академии. Группа наблюдения составила 94 молодых человека, из них 74 пациента с герпетической инфекцией. 20 человек составили группу здорового контроля. У них не было клинических проявлений герпетической инфекции в анамнезе, отсутствие герпетической инфекции подтверждено также лабораторно одним или двумя методами (ПЦР - прямой метод детекции вируса и/или ИФА для выявление антител). Из 20 человек у 11 не было выявлено в крови присутствия герпетического вирусного ма териала (ПЦР - отрицательные), у 12 не обнаружено специфических противогерпетических антител класса IgG, а у 5 выявлены низкие титры таких антител. В работе использована клиническая классификация герпетической инфекции по тяжести течения заболевания, определяемой числом и выра- ' женностью обострений (Н.А. Дидковский, И.К. Милашенкова и др.). Критериями включения в основную группу служили:

• -    возраст пациентов 18-28 лет;

• -    тяжелое течение герпетической инфекции;

• - орофациальная локализация рецидивирующей герпетической инфекции;

• -    верификация ВПГ1, 2 инфекции лабораторными методами.

У обследуемых молодых людей герпетическая инфекция была подтверждена с помощью определения специфических противогерпетических антител класса IgG в диагностически значимых титрах у 100 % пациентов и с помощью ПЦР диагностики у 64,8 % из них.

Обследуемые пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от стадии заболевания.

1 группу составили пациенты с герпетической инфекцией в стадии клинической ремиссии (37 человек); 2 группу - пациенты в стадии клинического обострения (37 человек); 3 группу (контрольную) составили молодые люди того же возраста, не имевших каких-либо клинических проявлений герпетической инфекции (20 человек).

В работе использовались следующие методы: ПЦР, реакция ИФА для определения титра специ- фических противогерпетических антител, анализ популяционного спектра лимфоцитов проводили на градиенте плотности по Воушп (1968). Определение популяций и субпопуляций лимфоцитов периферической крови производилось с помощью непрямого метода иммунофлюоресценции с применением моноклональных антител серии ICO производства НИИ «Препарат» Н. Новгород. Морфологическая оценка апоптоза лимфоцитов проводилась с помощью прижизненного окрашивания выделенных на градиенте плотности мононуклеа-ров. Статистическая обработка данных производилась с использованием пакета программ StatSoft STATISTICA 6.0.

Результаты исследований. В результате проведенного исследования нами была выделена группа молодых людей (средний возраст 23,2 года), у которых была диагностирована герпетическая инфекция в орофациальной локализации тяжелого течения. Среди них женщин было (78,3 %), мужчин (21,7 %). Клинические симптомы, выявленные у больных и позволившие нам отнести их к группе пациентов с тяжелым течением, представлены в табл. 1.

ентов только процентного содержания клеток, обладающих эффекторными функциями и обеспечивающими защиту организма от внутриклеточных патогенов. Это касается процентного содержания клеток врожденного иммунитета CD 16, которые обладают способностью уничтожать инфицированные клетки хозяина, а также лимфоцитов, относящихся к клеточным механизмам приобретенного иммунитета CD8, обладающих специфической цитотоксической способностью к поражению инфицированных клеток-мишеней. Рост процентного содержания клеток, без роста их абсолютного количества, обычно связан с перераспределением и усилением миграции иммунных клеток в очаг микробного персистирования без усиления процессов лимфопоэза, пролиферации клеток. У пациентов 1 группы отмечено также достоверное снижение процента лимфоцитов в крови, экспрессирующих маркеры готовности к апоптозу и снижен индекс реализации апоптоза в сравнении со здоровыми лицами. При отсутствии достоверных изменений абсолютного числа лимфоцитов и росте их процентного содержания в крови в фазе ремиссии, у лиц, с частыми рецидивами герпетической

Таблица 1

Частота клинических симптомов орофациальной герпетической инфекции тяжелого течения у обследуемых пациентов

Симптомы	п	%
Частота рецидивов более 6 раз/год	74	100
Субфебрильная температура	38	51,3
Более 1 очагов высыпаний	44	59,4
Длительность рецидива более 10 дней	72	97,3
Гриппоподобный синдром	70	94,6

Таким образом, по совокупности выявленных симптомов, все 74 пациента соответствуют критериям тяжелого течения ГИ. Каждый рецидив существенно нарушал здоровье пациента, его трудоспособность, что явилось поводом для обращения молодых людей за специализированной помощью в алергологический кабинет студенческой больницы МУЗ ГКБ №2.

В соответствии с целью работы, пациенты, включенные в исследование, были обследованы иммунологически в стадии ремиссии, через 2-3 недели после последнего эпизода обострения (1 группа) и в стадии клинически выраженного обострения (2 группа).

Результаты определения популяционного и субпопуляционного спектра лимфоцитов крови у инфицированных больных в стадии ремиссии и экза-цербации в сопоставлении со здоровыми лицами, без герпетической инфекции приведены в табл. 2.

Характерной особенностью количественного состава лимфоцитов в фазе ремиссии орофациальной герпетической инфекции тяжелого течения в сопоставлении с группой возрастного контроля было достоверное увеличение в циркуляции паци- инфекции, отмеченное уменьшение готовности лимфоцитов к апоптозу и снижение клеток с морфологическими маркерами апоптоза можно оценивать как один из механизмов сохранения численности лимфоидной популяции в этих условиях. Вместе с тем, учитывая вероятность инфицирования и персистирования герпетических вирусов в лимфоцитах, можно предположить, что уменьшение готовности и гибели инфицированных лимфоцитов по механизму апоптоза в фазе клинической ремиссии может быть одним из способов ухода вируса от контроля иммунной системы.

Единственная популяция увеличивается в кровотоке у больных в стадии ремиссии, как в относительных, так и в абсолютных количествах, это В лимфоциты (CD22). Рост числа В лимфоцитов отражает достоверную стимуляцию клеток, обеспечивающих антителозависимые формы иммунного ответа, контролирующих внеклеточные стадии развития вирусов.

Рост абсолютного числа В лимфоцитов отражает наличие клональной или поликлональной экспансии В клеток в результате встречи с антигенами внеклеточно расположенных вирусов.

Шестакова А.А.

Показатели клеточного иммунитета у молодых лиц при тяжелом течении орофациальной герпетической инфекции

Таблица 2

Показатели клеточного иммунитета у молодых лиц в стадии ремиссии и при обострении орофациальной герпетической инфекции тяжелого течения

Показатель	Группа 1		Группа 2		Группа3 (здоровые)		Pi-3	Р2-3	Р1-2
	Ремиссия		Обострение		Контроль
	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75	Me	Q25-Q75
Лейкоциты	5,0	4,1-6,8	7,2	4,7-7,21	5,25	4,7-7,2	0,54	0,08	0,38
Лимф, абс.	157	127-174	151,5	112-176,2	151,5	112-176,4	0,87	0,44	0,07
Лимф, %	31,0	24-36	26,0	22-31	26	22-31	■	0,95	0,34
CD3, %	60	56-66	63,0	60-67	63	60-70	0,28	0,72	0,51
CD3, абс.	0,95	0,86-1,03	0,94	0,75-1,14	0,935	0,76-1,14	0,77	0,39	0,54
CD4, %	35,0	34-37	35,5	34,5-38	35,5	35-38	0,54	0,49	0,14
CD4, абс.	0,56	0,48-0,61	0,55	0,42-0,67	0,55	0,42-0,67	0,28	0,79	0,81
CD8,%	22,0	21-24	22,0	21,5-24	20,0	18,0-21,0	■	ПН	0,62
CD8, абс.	0,34	0,29-0,39	0,35	0,26-0,38	0,38	0,26-0,52	■	■	0,46
CD22, %	20,0	18-22	20,0	18-22	13,5	12-15		ни	0,46
CD22, абс.	0,31	0,27-0,36	0,31	0,26-0,35	0,2	0,15-0,23	■		0,31
CD16, %	17,0	15-18	18,0	15,5-18	13,5	12,0-15,0	Hi	ин	0,18
CD16, абс.	0,27	0,2-0,32	0,25	0,2-0,28	0,195	0,15-0,23		пн	0,74
CD25, %	12,0	10-12	12,0	12-15	9,5	7-16		пн	0,06
CD25, абс.	0,17	0,5-0,23	0,19	0,14-0,23	0,14	0,11-0,2	■	in	0,53
CD71, %	11,0	10-15	12,0	10-15	8,0	7,0-10	■	НН	0,36
CD71, абс.	0,175	0,12-23	0,175	0,14-0,23	0,11	0,07-0,21	■	■	0,85
CD95, %	10,0	8-12	12,0	11-15	17,1	10-27			0,21
CD95, абс.	0,17	0,11-0,22	0,19	0,16-0,22	0,2	0,09-0,41		пн	0,27
Апоптоз, %	4,00	2-5	3,0	3-5	2,0	2,0-3,0	■1		0,9
Апоптоз, абс.	0,05	0,024-0,085	0,05	0,03-0,08	0,03	0,02-0,05	пн	пн	0,41
ИРА	6,25		26,3		28,8

В фазе обострения часто рецидивирующей герпетической инфекции орофациальной локализации у молодых людей, в сравнении с группой здоровых лиц того же возраста, отмечается тенденция роста общего числа лейкоцитов крови, не достигающая степени статистической достоверности. В периоде часто рецидивирующей инфекции, отмечена достоверная тенденция к снижению процентного содержания лимфоцитов в крови, а также существенное снижение процентного содержания клеток, экспрессирующих маркеры готовности к апоптозу. Уменьшение числа лимфоцитов с готовностью к апоптозу может быть связано с усилением процесса апоптоза лимфоцитов, о чем свидетельствует достоверно значимый рост процентного и абсолютного содержания лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза, клеток с реализованной программой апоптоза. При обострении инфекции увеличивается процент клеток с маркерами поздней активации (CD71+). Отсутствие лейкоцитоза и снижение процентного содержания лимфоцитов в крови при обострении инфекции отражает не только явное нарушение миграции иммуноцитов, но позволяет предполагать и нарушение их пролиферативного ответа, т.к. в кровотоке ожидаемого роста абсолютного количества лимфоцитов с маркерами ранней и поздней позитивной активации (CD25, CD71) не происходит. В целом подобный ответ клеточного звена иммунной системы на обострение инфекции следует оценивать как неадекватный, позволяющий ускользать вирусу от контроля со стороны иммунной системы.

Выводы. При анализе таблицы не установлено каких-либо существенных различий в общем числе лейкоцитов, лимфоцитов и в содержании в крови их популяций у молодых лиц с орофациальной герпетической инфекцией тяжелого течения в фазе клинической ремиссии и в фазе экзацерба-ции, проявляющейся типичными локальными везикулезными высыпаниями и общей реакцией организма. По существу характер клеточного иммунного ответа при тяжелом течении орофациальной герпетической инфекции инертен, он не меняется при усилении репликации вируса, что, возможно, и приводит к частым рецидивам и типичным высыпаниям на коже и красной кайме губ, т.к. клеточный иммунный ответ является ведущим механизмов иммунного контроля внутриклеточной репликации патогена.

Таким образом, к особенностям клеточного иммунного ответа у молодых людей при тяжелом течении орофациальной герпетической инфекции в сопоставлении с лицами здорового контроля относится отсутствие значимого усиления лейкопо-эза, лимфопоэза, отсутствие достоверного увеличения абсолютного количества отдельных популяций и субпопуляций Т лимфоцитов при существенном росте числа В клеток и тенденции роста абсолютного количества лимфоцитов с морфологически выраженными признаками апоптоза.