Получение рекомбинантного антигена для серологической диагностики бруцеллеза

Бруцеллез сельскохозяйственных животных представляет собой одну из наиболее значимых проблем в сфере практической ветеринарии. Своевременное выявление и изоляция инфицированных животных являются критически важными для предотвращения распространения данной инфекции и обеспечения эпизоотического благополучия хозяйства. Диагностические исследования при бруцеллезе в большинстве своем основаны на серологических методах, таких как реакция связывания комплемента и иммуноферментный анализ (ИФА). Целью исследования являлось получение рекомбинантного антигена возбудителей бруцеллеза и изучение его серологической активности в непрямом твердофазном ИФА. В результате анализа иммуногенных эпитопов белков возбудителя бруцеллеза выполнен дизайн антигена, нуклеотидная последовательность которого была клонирована в составе экспрессирующей конструкции на основе вектора pET28а(+). Сконструированный рекомбинантный антиген бруцеллеза был успешно синтезирован в культурах бактериального штамма-продуцента и очищен с применением метода аффинной хроматографии. Полученный препарат использовали в разведении 10 мкг/мл в качестве антигена при проведении непрямого твердофазного ИФА для выявления антител против бруцеллеза. По результатам ИФА установлено, что рекомбинантный антиген проявлял серологическую активность в отношении противобуцеллёзных А-, Sи М-антител. Коэффициент специфичности рассчитывали относительно данных ИФА с сывороткой крови в разведении 1:128. Так, для рекомбинантного антигена при реакции с сывороткой крови крупного рогатого скота против Brucella abortus коэффициент специфичности составил 3,5, B. melitensis – 5,5, S антигена бруцелл – 14,25, R антигена – 0,75. Таким образом, разработанный антиген показал большой потенциал для применения в серологических реакциях для индикации антител против возбудителей бруцеллёза, для которых характерен рост в S-форме бактериальных колоний.