Применение прижизненных методов для диагностики туберкулеза и дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота

Несмотря на огромные достижения, достигнутые в нашей стране, в ликвидации целого ряда инфекционных болезней среди домашних животных, в том числе и туберкулеза, последний все же еще не ликвидирован и представляет проблему как сельскохозяйственную, так и здравоохраненческую.

Несомненно, одной из ближайших и важнейших задач ветеринарной науки и практики является полное оздоровление крупного рогатого скота от туберкулеза, который наносит огромный экономический ущерб народному хозяйству и представляет серьезную опасность для здоровья людей

• [1 ]. А поскольку туберкулез животных имеет еще значительное распространение в определенных зонах, не исключена возможность заноса возбудителя инфекции и в хозяйства благополучных зон, что может привести вслед за этим и ухудшению эпидситуации по туберкулезу для человека.

Применяемые в ветеринарной практике аллергический метод диагностики туберкулеза не во всех случаях обеспечивает точную постановку диагноза, особенно у больных животных, в состоянии анергии. Поэтому своевременная постановка первичного диагноза и выяснение причины сенсибилизации макроорганизма к туберкулину во многом зависит от качества диагностических исследований и идентификации выделенных культур, без проведения которых эпизоотическая ситуация может оставаться неясной на протяжении ряда лет [2].

Не решен вопрос и дифференциации неспецифических реакций на туберкулин от специфических у крупного рогатого скота связанные с наличием различных паразитов. На повышенную чувствительность к туберкулину животных больных фасциоллезом, эхинококкозом, финнозом, дикроцелиозом.

По исследованиям и практическим наблюдениям А.Х. Волкова, М.А. Сафина, М. В. Харитонова [3] если количество реагировавших на туберкулин животных неблагополучных по гельминтозам хозяйствах до дегельминтизации составляло 0,6%, то после лечебной дегельминтизации этот показатель снизился до 0,1% или вообще исчезал.

Проведенная дегельминтизация не оказывала влияния на появление ложных туберкулиновых реакций при эхинококкозе, так как это связано с образованием специфических пузырей, на которых не влияли антгельминтики.

Учитывая вышеизложенные, нами предпринята попытка, изыскать более специфичных и высокочувствительных методов диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.

Тест - ППН основан на определении изменений в структуре ядра и в цитоплазме нейтрофилов, возникающих под воздействием специфического аллергена.

Целью настоящей работы являлось постановка прижизненной диагностики туберкулеза, а также дифференциация неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота на введение ППД туберкулина тестом ППН.

Биологические материалы, полученные от крупного рогатого скота реагирующих на внутрикожное введение туберкулина, а также интактных животных подтверждали лабораторными методами диагностики туберкулеза согласно по инструкции по борьбе с туберкулезом животных.

Материалы и методы. Исследования проводились в неблагополучном по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйстве « В.Каменка» Чермшанского района РТ.

В результате туберкулинизации крупного рогатого скота было выявлено реагирующих на ППД туберкулин 67 коров с утолщением кожной складки от 3-8 мм и выше, из которых 25 были подвергнуты контрольно – диагностическому убою.

При изучении показателей повреждения нейтрофилов (ППН) у животных, реагировавших на ППД туберкулин использовали кровь. Кровь от 6 коров, не реагирующих на туберкулин, служила контролем.

Для постановки теста - ППН брали кровь у животных из яремной вены в стерильные пробирки с добавлением 5% -ного цитрата натрия (антикоагулянт) из расчета 9:1. Затем в две лунки стерильного планшета, добавляли цитрированную кровь, в первую лунку внесли ППД туберкулин, а в другую -стерильный физиологический раствор для каждого животного. В качестве аллергена использовали очищенный ППД туберкулин для млекопитающих. Для контроля специфичности аллергена параллельно использовали стерильный физиологический раствор. Предварительно до инкубировании крови с ППД туберкулином, а также физиологический раствор добавляли 25% цитрат натрия из расчета 4:1. Разбавленную таким образом кровь опытных и контрольных групп животных инкубировали в течение 3–х часов в термостате при температуре 38 С ° . Окрашивали мазки по методу Notchkiss в модификации Р. П. Нарциссова (1983).

Учет коэффициента повреждения нейтрофилов (в %) определяли по формуле: ППН=Н 1 - Н 2/ 100 (В. А. Фрадкин, 1983).

Н 1 – показатель опыта

Н 2 – показатель контроля

100 – необходимые количество нейтрофилов для подсчета на поле зрения микроскопа.

При оценки теста ППН, показатели повреждения нейтрофилов равной до 9 процентов являлся базовой, то есть (нормой) или отрицательным результатом, больше 9% реакция на ППН – положительная.

В качестве патологического материала были отобраны (подчелюстные, предлопаточные, заглоточные и брыжеечные) лимфатические узлы.

Результаты исследований.

Результаты показателей теста - ППН от коров, реагировавших на введение ППД туберкулина, при инкубировании со специфичным аллергеном (ППД туберкулином) колебались в пределах от 20% - 65% поврежденных нейтрофилов.

Таких животных оказалось в опытной группе 67 голов.

В контроле со стерильным физиологическим раствором показатели -ППН у этих 67 реагировавших на введение ППД туберкулина животных составили от 1 до 5%. У животных контрольной группы (6голов) ППН варьировало до 5 % поврежденных нейтрофилов, то есть результат отрицательный.

Из этого числа реагировавших на введение ППД туберкулина 67 животных, из них 25 коров выборочно были подвергнуты контрольно – диагностическому убою, и в дальнейшем биоматериал был исследован лабораторным методом на туберкулез.

При этом получен обильный рост колоний на скошенном агаре. После микрокопировании выявили, микобактерий туберкулеза (M.bovis).

Для постановки биопробы микробной массы (0,15 мг.) разведенной на 1 мл физиологическом растворе, вводили морским свинкам подкожно в область паха. При этом также получили положительный результат микобактерий туберкулеза (M.bovis).

Из анализа проведенных исследований установили: то из 67 головы реагирующих на ППД туберкулин методом ППН животные больны туберкулезом. К чему свидетельствуют полученные лабораторные исследования от выборочно подвергнутых к убою 25 животных а также выделением из лимфатических узлов микобактерий туберкулеза (M.bovis).

Выводы. 1. Результаты проведенных комплексных исследований показали, что тест - ППН при инкубировании со специфичным аллергеном (ППД туберкулином) является эффективным методом для диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота.

• 2.    Применение в ветеринарной практике теста - ППН позволяет дифференцировать неспецифических реакций на ППД туберкулин, и тем самым устраняет необходимость неоправданного убоя высокопродуктивных и племенных животных.

Резюме

Результаты комплексных исследований показали возможности теста ППН для дифференциации неспецифических, реакций на введение ППД туберкулина с разной эпизоотической ситуации по туберкулезу у крупного рогатого скота, и при этом можно избежать убоя высокопродуктивных и племенных животных.

Latypov F.R., Mukhametzyanov F.R. Summary

The results of the combined studies showed the ability of this test to differentiate PPN nonspecific, reactions to the introduction of PPD tuberculin with different epizootic situation on tuberculosis in cattle, and thus it is possible to avoid the slaughter of the highly productive and breeding animals.