Разработка и валидация безынструментальной системы обнаружения ДНК-мишеней на основе ультрамонодисперсных наносфер золота

Цель: разработать простую и удобную технологию выявления ДНК-мишеней для диагностики социально значимых заболеваний н а основе колориметрического агрегационного теста с использованием наночастиц золота. Материал и методы. С интез наносфер золота осуществлялся методами жидкофазной химии. Физико-химические параметры наночастиц контролировались методами спектроскопии поглощения, динамического светорассеяния, электронной микроскопии. Рациональный дизайн последовательностей специфических фрагментов геномных мишеней и олигонуклеотидов, входящих в состав тест-системы, осуществлялся с учетом термодинамических констант и с применением геномных баз. Аналитическую валидацию тест-системы проводили на модели выявления ДНК Babesia species – возбудителя пироплазмоза человека и животных, путем кросс-сравнения характеристик с полимеразной цепной реакцией с электрофоретическим учетом результатов и в формате реального времени. Результаты. Разработан пилотный вариант тест-системы для специфического обнаружения до 10 нг ДНК в образцах крови путем визуальной дискриминации цвета реакционной смеси при длительности анализа примерно 30 мин. Выявлен размерный эффект наночастиц в диапазоне от 15 до 60 нм на минимальный предел обнаружения ДНК-мишеней. Заключение. В настоящей работе представлены результаты разработки и аналитической валидации пилотной версии экспресс-тест-системы для ДНК-диагностики на основе меток наночастиц золота и визуальной дискриминации цвета реакционной смеси.