Разработка метода видовой идентификации бактерий рода Clostridium в мультиплексной ПЦР в режиме реального времени

Цель исследования - разработка метода видовой идентификации 7 видов клостридий при помощи мультиплексной ПЦР в режиме реального времени. Представлены результаты разработки мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени для видовой идентификации семи видов клостридий крупного рогатого скота. Результаты показали, что клостридиозы широко распространены в животноводческих хозяйствах Сибирского региона, проявляются в различных клинических формах и зависят от вида возбудителей и их ассоциаций. При помощи классических бактериологических методов исследовали 510 проб биоматериала от животных из семи регионов Сибири. В результате выделили и идентифицировали биохимическими методами 50 изолятов клостридий различных видов. Для подтверждения видовой принадлежности разработали мультиплексную ПЦР в режиме реального времени, позволяющую выявлять и типировать семь видов клостридий: C. sporogenes, C. perfringens, C. sordellii, C. histolyticum, C. septicum, C. chauvoei и C.novyi в смешанных и чистых бактериальных культурах с высокой степенью специфичности. Чувствительность разработанной ПЦР при исследовании искусственно синтезированных положительных контрольных образцов составила 7,2∙10-3,2∙102 ГЭ, а при исследовании чистых культур - 102-103 КОЕ/мл. Специфическая реакция была только с клостридиями своего вида, но не с клостридиями других видов или другими видами бактерий. Показана высокая специфичность использования ПЦР в реальном времени, позволяющая одновременно выявлять клостридии в смешанных и чистых бактериальных культурах, что делает ее перспективным методом в лабораторной диагностике различных форм клостридиозов крупного рогатого скота.