Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в Artemisia subviscosae Herba

Введение. Природные соединения, содержащиеся в растениях, обладают широким спектром фармакологической активности, малой токсичностью или отсутствием таковой, а мягкость воздействия определяет возможность их длительного применения. Богатым источником фенольных и терпеновых соединений являются растения рода Artemisia L., широко применяемые в народной и традиционной медицине разных стран в качестве противовоспалительных, капилляроукрепляющих, желчегонных, противоопухолевых, и антиоксидантных средств [1]. Artemisia subviscosa Turcz. ex Bess. — ксерофитный полукустарничек, эндемик, произрастает в степях Баргузинской долины и на северо-западном побережье Байкала. Сложная орография местности, сочетание широтной и высотной поясности, влияние озера Байкал, низкая сельскохозяйственная освоенность горных и предгорных территорий позволяют предположить, что в эндемичных видах растений данного региона можно обнаружить уникальные биологически активные вещества [2]. Известны только данные химического состава эфирных масел этого вида [3–5].

Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы надземной части полыни клейковатой, собранные в 2018 г. в Баргузинском районе Республики Бурятия (окрестности с. Улюн и Ярикта) в фазе цветения. Количественное определение флавоноидов проводили методом УФ-спектрофотометрии на спектрофотометре ПЭ-5400 УФ (Экохим) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм в пяти повторностях. Снят полный спектр водно-спиртового извлечения A. subviscosae herba в комплексе с 2%-ным раствором хлорида алюминия, максимум поглощения отмечен при 400 нм, что соответствует максимуму поглощения ГСО лютеолин-7-гликозида с хлоридом алюминия (рис. 1).

Рисунок 1. Спектр поглощения водно-спиртового извлечения A. subviscosae herba и СО лютеолин-7-гликозида

Таким образом, для разработки методики количественного определения суммы флавоноидов в A. subviscosae herba в качестве стандартного образца выбран лютеолин-7-гликозид, также необходимо определить условия выделения: тип экстрагента, размер частиц сырья, температуру нагревания, соотношение сырье — экстрагент, длительность и количество экстракций, объем раствора хлорида алюминия, необходимого для комплексообразования, концентрация раствора хлорида алюминия, время, необходимое для образования комплекса.

Результаты и обсуждение. В ходе разработки методики экспериментально определены условия, обеспечивающие наибольший выход суммы флавоноидов из надземной части полыни клейковатой: экстрагент — спирт этиловый 40%-ный, степень измельчения сырья (1 мм), соотношение сырье — экстрагент (1:50), температура нагрева — кипящая водяная баня (табл. 1).

Таблица 1

Зависимость выхода суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид из A. subviscosae herba от условий экстракции

При определении оптимального времени экстрагирования A. subviscosae herba трехкратно экстрагировали в течение 15‒90 мин с шагом 15 мин. После каждой экстракции жидкость отфильтровывали, проводили количественное определение суммы флавоноидов, после чего дважды экстрагировали отжатое сырье в тех же условиях. Двукратная экстракция в течение 30 мин способствует большему выходу суммы флавоноидов из полыни клейковатой травы (табл. 2).

Таблица 2

Зависимость содержания суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид из A. subviscosae herba от времени экстракции

Для определения оптимальных параметров комплексообразования использовали раствор хлорида алюминия в различных концентрациях (1–5%) и объемах (1–5 мл), исследовали время, за которое образуется комплекс (15–90 мин). Выявлено, что оптимальной концентрацией хлорида алюминия является 2%-ный раствор объемом 2 мл, комплекс образуется в течение 45–60 мин (табл. 3).

Таблица 3 Зависимость содержания суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в A. subviscosae herba от концентрации и объема хлорида алюминия, времени комплексообразования

Полученные параметры легли в основу методики количественного определения суммы флавоноидов полыни клейковатой травы. Метрологические характеристики методики количественного определения представлены в таблице 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики результатов количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид

Установлено, что содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в надземной части полыни клейковатой составляет 2,03±0,04%. Относительная ошибка методики не превышает 5%.

Выводы. Таким образом, в результате проведенных исследований нами разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в полыни клейковатой траве.