Разработка методов длительного хранения культур Corynebacterium pseudotuberculosis

Казеозный лимфаденит овец широко распространен в хозяйствах Западной Сибири. Поражается до 24,0% поголовья мериносовых и кроссбредных овец [1]. В зонах сильного и значительного поражения возбудитель чаще циркулирует в R- и I-формах, а в зонах слабого и умеренного преобладают S-формы. Возбудитель казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза овец) - С. pseudotuberculosis - грамположительная, полиморфная, неподвижная, аэробная бактерия размером 0,5-3,1 мкм в длину и 0,5-0,9 мкм в ширину, не образующая спор и капсул [2; 3]. Коринебактерии сохраняют свою жизнеспособность при лиофильном высушивании в течение 15 лет, а свои первоначальные свойства в течение 12 лет. На скорость отмирания клеток коринебактерий как в процессе лиофилизации, так и при хранении оказывают влияние следующие факторы: высокий вакуум (30,7%), низкая температура (13,9%), защитная среда (10,8%), остаточная влажность (10,6%) и сроки хранения (28,6%) [2; 4]. Испытанный способ сохранения штаммов коринебактерий применяется в изготовлении специфических биологических препаратов для профилактики и борьбы с казеозным лимфаденитом овец, а высушенные штаммы, депонированные в ВГНКИ ветеринарных препаратов (г. Москва) могут служить эталоном для научно-исследовательских и учебных целей. Постоянные посевы и пересевы культур для изучения их свойств и поддержания биологической активности приводили к гибели некоторых штаммов и изменению их фенотипических свойств. Хранение культур в 0,25%-ном полужидком агаре под слоем вазелинового масла при температуре 4°С оказался ненадежным, поскольку не позволял сохранять культуры в R-форме более 12 месяцев. В то время, как S-формы могли храниться и более длительное время (19 месяцев). Проведенные исследования позволили выбрать оптимальные режимы лиофилизации, подобрать криозащитные среды и сохранить лиофильно-высушенные культуры в течение 20 лет (срок наблюдения), а также депонировать C. рseudotuberculosis в ВГНКИ ветпрепаратов (г. Москва). При хранении (12 лет) два штамма R-формы потеряли гликолитическую и каталазную активность и приобрели фенотипические признаки S-формы.