Разработка моновалентного эритрацитарного полисахаридного антигенного диагностикума Clostridium botulinum тип А для РНГА

Ботулизм - тяжелая интоксикация, возникающая в результате употребления в пищу продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum и характерезующаяся преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы.

В настоящее время известно 8 типов возбудителя ботулизма (А, В, С α , C β , D, E, F, G), которые вызывают заболевание со схожими клиническими признаками, тем не менее токсин каждого типа специфичен и нейтрализуется только соответствующим антитоксином.

Возбудитель ботулизма относится к политропным представителям микробов, которые в ходе инфекционного процесса занимают ряд последовательных локализаций в организме, тем самым обнаруживая свою адаптированность к ряду различных органов и тканей, однако это есть единая форма болезни, в которой разные локализации возбудителя соответствуют разным стадиям болезни (кишечник, печень, легкие).

Что касается диагностики ботулизма, то она имеет целый ряд проблем. Это, во-первых, связано со сложностью культивирования клостридий как анаэробов и отсутствием селективных сред для них. Кроме того; единственным методом, позволяющим с высокой чувствительностью идентифицировать ботулизм, является биопроба на мышах в сочетании с реакцией нейтрализации. Данный метод требует большого количества лабораторных животных, использование которых в настоящее время принято считать не этичным. Помимо этого, биопроба также не всегда обеспечивает получение необходимой информации. По статистическим данным, 65% клинических случаев ботулизма не имеют лабораторного подтверждения. На сегодняшний день нет средств и методов экспресс-индикации возбудителя ботулизма.

Цель работы: разработка метода экс-пресс-индикации возбудителя ботулизма в сыворотке крови животных.

Материалы и методы. Посев культуры Clostridium botulinum тип А на мясо пептонный агар с 1% глюкозой с 3 дневной инкубацией в анаэростате. Последующий перенос и смыв посева Cl. botulinum тип А на бульон Хоттингера с 1% глюкозой и помещение его в анаэростат на 6 суток, для накопления токсина. После истечения срока культивирования, смесь центрифугировалась при 6000 об/мин в течении 30 мин, супернатант удаляли, а осадок ресуспензировали стерильным физиологическим раствором до 200 млн. м.к./см³ взвеси по стандарту мутности им. Тарасевича.

Применяли термическую инактивацию взвеси Cl. botulinum тип А, путем нагревания в водяной бане при t -1100 С в течении 2 ч 15 мин. Смесь проверяли на стерильность путем высева на МПА с 1% глюкозой. При подтверждении отсутствия роста считали смесь полностью пригодной для дальнейшей работы по созданию диагностикума.

Следующий этап включал в себя фор-малинизацию эритроцитов барана по L.Csizmаs с последующей их танизацией по S.V. Boyden и сенсибилизацией с инактивированным антигеном Cl. botulinum тип А по В.А. Шамардину.

Результаты исследований.

Таблица 1 - Проверка моновалентого эритроцитарного полисахаридного антигенного диагности-кума Cl. botulinum тип А в РНГА

Заключение. Из полученных данных видно, что моновалентный эритроцитарный антигенный диагностикум Cl. botulinum тип А специфически реагирует на свой вид, при этом во всех случаях отрицателен к контрольным сывороткам. Так же моновалентный диагностикум улавливает антитела из сывороток крови лошадей гипериммунизи-рованных ботулиничеcким моноанатоксином типа А, что говорит о высокой специфичности данного препарата. Исходя из этого, применение данного диагностикума вполне целесообразно в качестве внутрилаборатор-ного контроля исследований Cl. botulinum, вместе с основными методами постановки диагноза- биопробой и реакцией биологической нейтрализации.

Бочарова // Сб. науч. трудов. - 1979. - Вып. 4. - С. 157-161.

Резюме

В борьбе с особо опасными инфекционными заболеваниями определяющее значение имеют лабораторная диагностика и индикация возбудителей. С тех пор, как ботулизм был выделен в виде отдельной нозологической формы, во всем мире непрерывно ведутся поиски специфичных, чувствительных и быстрых методов лабораторного подтверждения этого диагноза. Всестороннее и детальное изучение возбудителя ботулизма и их токсинов позволило разработать метод получения антигенного ботулинического эритроцитарного диагностикума, который предназначен для выявления специфических антител к возбудителю ботулизма в сыворотке крови. Сущность непрямой реакции гемагглютинации (РНГА) заключается в том, что эритроциты, обладают способностью адсорбировать на себе антигены, становятся «чувствительными» (сенсибилизированными). Эритроциты, сенсибилизированные антигеном, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обладающие высокой адсорбирующей активностью. Одним из составляющих данного метода является антиген, используемый как иммуноген, участвующий в серологических реакциях.