Состояние детоксикационной системы печени у телят после применения Креолина-Х

Одним из способов усиления борьбы с эктопаразитами животных является использование эффективных, безопасных и простых в применении инсектоакарицидов. Таким требованиям отвечают препараты на основе синтетических пиретроидов, имеющие существенные преимущества перед другими, так как обладают избирательной токсичностью по отношению к насекомым и клещам в низких концентрациях, быстро разлагаются во внешней среде на нетоксичные компоненты и хорошо переносятся животными [11, 13].

Для борьбы с арахноэнтомозом животных перспективны комбинированные инсектицидные препараты с различным механизмом действия, что позволяет снизить развитие лекарственной устойчивости, повысить эффективность лечения, сократить частоту обработок, снизить затраты и понизить токсическое воздействие на животных [15].

Между тем, сочетание препаратов может усиливать не только терапевтический, но и токсический эффект [7].

Более того, возможными недостатками комбинированных препаратов, связанными с сочетанием свойств входящих в его состав соединений, являются особенности спектра и механизма действия, сроки наступления и продолжительность эффекта, пути токсикокинетики, стабильность при применении и т.д., которые часто не учитываются [14].

Целью настоящего исследования было изучение состояния системы детоксикации печени телят при применении комбинированного инсектоакарицидного препарата Креолин-Х.

Материал и методы исследований. В работе использовали Креолин-Х (Kreolin-X, международное непатентованное название – циперметрин). Лекарственная форма: раствор для наружного применения. Креолин-Х содержит в качестве действующего вещества циперметрин - 2,5 или 5 %, а в качестве вспомогательного вещества - креолин бесфенольный каменноугольный - до 100%. По внешнему виду Креолин-Х представляет собой однородную маслянистую жидкость, прозрачную в тонком слое, с запахом каменноугольного масла, темнокоричневого, черно-бурого цвета. С водой образует эмульсию молочно-белого или молочно-серого цвета. Креолин-Х выпускают расфасованным в стеклянных бутылках, флаконах и банках или в полимерных бутылках, флаконах с полиэтиленовыми пробками, в канистрах стальных или полимерных. Циперметрин, входящий в состав Креолина-Х, относится к пиретроидам второго поколения, обладает широким спектром инсектоакарицидного действия, активен в отношении саркоптоидых, иксодовых клещей и насекомых [1].

Изучение влияния Креолина-Х на дезинтоксикационнную систему печени проводили на телятах черно-пёстрой породы. Для этого были укомплектованы три группы 3-4-месячных животных со средней исходной массой тела 110-130 кг. Перед применением Креолин-Х тщательно перемешивали с водой. Телят 1 опытной группы (пять голов) опрыскивали эмульсией Креолина-Х 1 % концентрации. Телят 2 опытной группы (пять голов) опрыскивали эмульсией Креолина-Х 0,2 % концентрации. Опрыскиваемая доза составляла 27 мл/кг. Телят контрольной группы (пять голов) опрыскивали водой. Для исследования у животных брали кровь до введения и через 1, 7, 15 и 31 сутки после применения арахноакарицида. Для исследования были выбраны следующие биохимические показатели крови: содержание общего белка, билирубина, мочевины, активность ферментов: аланин -и аспартатаминотрансферазы (АЛТ, КФ 2.6.1.2 и АСТ, КФ 2.6.1.1), лактатдегидрогеназы (ЛДГ 1.1.1.27), щелочной фосфатазы (ЩФ, КФ 3.1.3.1) и глутаматдегидрогеназы (ГгДГ, КФ 1.4.1.2). Для изучения гепатотоксического действия у подопытных животных определяли коэффициенты де Ритиса, Шмидта (КШ) [8, 9, 10, 21, 22] и индекс R. Коэффициент де Ритиса определяли отношением АСТ к АЛТ [25]. Коэффициент Шмидта (КШ) рассчитывали по формуле (1).

КШ= АСТ+АЛТ                                 (1)

ГлДГ , где: АСТ - аспартатаминотрансфераза, Е/л; АЛТ - аланинаминотрансфераза, Е/л; ГлДГ - глутаматдегидрогеназы Е/л

Индекс R определяли отношением активности АЛТ к активности ЩФ [7, 21]. Концентрацию общего белка определяли по биуретовой реакции [8,  9,  24].

Количество    мочевины    определяли унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом [8, 9, 10, 20]. Концентрацию общего билирубина определяли колориметрическим методом с 2,4-дихлоранилином [8, 9].

Активность АЛТ и АСТ определяли унифицированным динитрофенилгидразиновым методом [8, 9, 10,  16, 20, 21]. Активность щелочной фосфатазы (ЩФ, КФ 3.1.3.1.) изучали кинетическим       колориметрическим методом [8,  9,  10,  21], активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) определяли унифицированным            методом, оптимизированным оптическим тестом [8, 9, 10], активность глутаматдегидрогеназы (ГлДГ) изучали оптимизированным унифицированным тестом в соответствии с рекомендациями DGKC [8, 9, 10]. В ходе исследования            использовались биохимические анализаторы:   ERBA-

XL100, VETSCAN VS2 и Roche Cobas 8000 с биохимическим модулем с702, Roche Diagnostics (Швейцария).

Эксперименты проводились в соответствии с рекомендациями, установленными Международным комитетом по этике животных и этическим комитетом учреждения, а также в соответствии с действующими нормативными актами. Все исследования выполнялись согласно Правилам гуманного обращения с лабораторными животными. Все процедуры с животными проводили в соответствии с Директивой 2010/63/US от 22 сентября 2010 г. [23]. Содержание и уход за экспериментальными животными осуществляли в соответствии с «Ветеринарными правилами содержания крупного рогатого скота в целях его воспроизводства, выращивания и реализации» (Приказ Министерства сельского хозяйства РФ от 21 октября 2020 г. N 622 «Об утверждении Ветеринарных правил содержания крупного рогатого скота в целях его воспроизводства, выращивания и реализации»).

Результаты экспериментальных исследований обработаны методом вариационной статистики. Для этого использовалась прикладная программа Statistica 13.3 [21]. Статистическую значимость различий определяли по величине критерия Стьюдента.

Результат исследований. При изучении токсичности инсектоакарицидных препаратов обязательным является проведение биохимических исследований крови животных для выявления органов-мишеней токсического действия и оценки степени поражения. Изучая биохимические показатели крови, можно наиболее полно диагностировать функциональное состояние систем и органов организма, выявить воспалительные процессы, дисбаланс микроэлементов и нарушения водно-солевого обмена. Биохимические исследования позволяют выявить степень поражения органов [8, 9].

Для выявления токсического действия препаратов на дезинтоксикационную систему печени изучают содержание в крови общего белка и билирубина, активность аминотрансфераз (АЛТ, АСТ), глутаматдегидрогеназы, ЛДГ и ЩФ; коэффициенты де Ритиса и Шмидта, показатель R. Изменения этих показателей наблюдаются при гепатите, циррозе печени, печеночной недостаточности, токсическом воздействии лекарственных средств [5, 6].

После однократного опрыскивания телят эмульсией Креолина-Х 1- и 0,2 %-ой концентрациями общее состояние и поведение подопытных животных не менялись, признаки угнетения, токсикоза, а также гибель телят не наблюдались.

В таблице 1 представлены данные биохимических показателей крови телят после применения Креолина–Х в 1 %-ой концентрации.

Таблица 1 – Биохимические показатели крови телят после применения Креолина-Х 1%-ой концентрации

Показатель	Сроки исследования, сутки
	1	7	15	31
Билирубин,	7,1±0,91	10,0±1,90	11,2±1,27	6,4±1,23
мкмоль/л	6,7±0,85	6,8±1,86	7,1±1,46	6,8±1,10
Мочевина,	20,7±4,95	23,9±4,42	16,8±4,95	18,7±4,59
ммоль/л	19,7±5,08	19,5±4,75	20,1±5,68	19,5±4,75
Общий белок,	67,3±2,88	66,6±3,45	58,4±5,62	65,8±4,17
г/л	67,4±1,36	68,8±1,79	68,2±2,89	68,8±1,79
КШ	3,06±0,30	3,31±0,23	4,30±0,47	3,57±0,56
	3,70±0,47	3,59±0,42	3,63±0,39	3,59±0,42
Индекс R	0,29±0,05	0,3±0,05	0,28±0,02	0,22±0,04
	0,21±0,03	0,21±0,03	0,21±0,03	0,22±0,03
Коэффициент	1,79±0,28	2,41±0,66	2,21±0,43	2,35±0,35
де Ритиса	2,15±0,41	1,91±0,51	2,09±0,35	2,14±0,40
АСТ, Е/л	78,6±16,6	84,5±15,2	136,4±31,3	78,1±16,9
	66,9±15,7	67,7±16,9	64,9±11,0	67,1±17,0
ГлДГ, Е/л	39,4±3,35	40,5±3,79*	45,6±4,73*	33,6±5,99
	26,6±3,50	27,4±4,18	26,6±3,50	27,4±4,18
ЩФ, Е/л	157,8±11,6	162,6±11,0	244,2±20,1*	152,2±9,6
	146,6±9,6	146,8±8,5	146,6±11,16	146,8±8,5
АЛТ	40,5±3,6	49,6±10,6*	61,7±7,2*	33,1±4,6
	30,4±2,4	30,6±3,6	30,4±2,4	30,6±3,6
ЛДГ	621,0±121,7	951,6±136,3*	749,4±130,9	600,8±91,2
	506,0±93,7	508,4±93,6	508,6±94,7	506,4±93,1

Примечание: в числителе приведены показатели опытной группы, в знаменателе -контрольной; * – достоверная разница между опытной и контрольной группой (Р<0,05)

Анализируя данные таблицы 1, следует отметить, что после опрыскивания телят Креолином–Х 1 %-ой концентрации возникают незначительные колебания количества билирубина, мочевины и общего белка (P≥0,05). После применения Креолина-Х через 7 суток происходило достоверное повышение активности ферментов ГлДГ, АЛТ и ЛДГ в крови телят, а на 15 сутки – ГлДГ, ЩФ и АЛТ (P<0,05).

Отмечались незначительные колебания коэффициент де Ритиса, индекса R и коэффициента Шмидта. На 31 сутки изменения биохимических показателей в сыворотке крови телят были недостоверны (P≥0,05).

В таблице 2 представлены данные биохимических показателей крови телят после применения Креолина–Х 0,2%-ой концентрации.

Таблица 2 – Биохимические показатели крови телят после применения Креолина-Х 0,2%-ой концентрации

Показатель	Сроки исследования, сутки
	1	7	15	31
Билирубин,	6,5±0,98	7,0±1,88	8,8±1,04	6,6±1,23
мкмоль/л	6,7±0,85	6,8±1,86	7,1±1,46	6,8±1,10
Мочевина,	21,7±4,93	20,2±4,30	20,1±5,01	18,3±4,41
ммоль/л	19,7±5,08	19,5±4,75	20,1±5,68	19,5±4,75
Общий белок,	67,7±2,47	67,2±3,71	63,8±5,41	67,0±4,08
г/л	67,4±1,36	68,8±1,79	68,2±2,89	68,8±1,79
КШ	3,38±0,41	2,50±0,66	4,10±1,10	3,93±0,80
	3,70±0,47	3,59±0,42	3,63±0,39	3,67±0,45
Индекс R	0,26±0,04	0,27±0,05	0,24±0,05	0,21±0,04
	0,21±0,03	0,21±0,03	0,21±0,03	0,22±0,03
Коэффициент де	1,86±0,34	2,48±0,88	2,94±0,21	1,96±0,60
Ритиса	2,15±0,41	1,91±0,51	2,09±0,35	2,13±0,39
АСТ, Е/л	68,4±16,2	74,4±15,2	94,8±20,5	71,0±14,6
	66,9±15,7	67,7±16,9	64,9±11,0	68,1±17,4
ГлДГ, Е/л	31,3±3,17	37,4±3,80	31,2±4,47	30,1±6,14
	26,6±3,50	27,4±4,18	26,6±3,50	27,4±4,18
ЩФ, Е/л	150,4±10,7	152,2±10,8	148,4±20,5	148,2±9,6
	146,6±9,6	146,8±8,5	146,6±11,16	146,8±8,5
АЛТ	37,0±4,1	40,5±9,7	31,7±7,3	30,9±4,6
	30,4±2,4	30,6±3,6	30,4±2,4	30,6±3,6
ЛДГ	631,0±88,7	609,6±121,7	550,6±131,3	551,4±91,1
	506,0±93,7	508,4±93,6	508,6±94,7	506,4±93,1

Примечание: в числителе приведены показатели опытной группы, в знаменателе - контрольной; * – достоверная разница между опытной и контрольной группой (Р<0,05)

Анализируя данные таблицы 2, следует отметить, что после опрыскивания телят Креолином-Х 0,2 %-ой концентрации возникают незначительные колебания количества билирубина, мочевины, общего белка, активности ферментов коэффициентов де Ритиса и Шмидта, индекса R (P≥0,05).

Креолин-Х в 0,2 %-ой концентрации не вызывает изменений в биохимических показателях крови телят, не нарушает метаболизм и активность ферментов крови телят. Количество общего белка, мочевины и билирубина в течение периода применения препарата незначительно отличались от аналогичных показателей контрольной группы.

Концентрация вещества является фактором для проявления его токсического действия , которое коррелирует с появлением клинических синдромов и дальнейшим их развитием вплоть до возможного летального исхода - при смертельной концентрации [16].

Достоверное повышение активности ферментов ГлДГ, АЛТ и ЛДГ в крови телят на 7 сутки и ГлДГ, ЩФ и АЛТ – на 15 сутки исследования после применения КреолинаХ 1 %-ой концентрации, свидетельствует о том, что детоксикация акарицида происходит в печени и, по всей вероятности, связано с особенностями всасывания – проникновения Креолина-Х после опрыскивания.

Одновременное определение активности АЛТ и АСТ в крови информативнее с клинической точки зрения, позволяя судить о локализации и характере поражения, активности процесса, а также прогнозировать исход заболевания. Определение активности АСТ используется для выявления и оценки тяжести цитолитического синдрома при диагностике и мониторинге заболеваний печени и сердца. АСТ также увеличивается при остром гепатите и других тяжелых поражениях гепатоцитов. Тест используется совместно с определением активности АЛТ [3, 4, 5, 20].

Токсичность инсектоакарицидных препаратов очень информативно отражает уровень активности ГлДГ. Поскольку этот фермент находится в митохондриях, степень повышения его активности отражает степень цитолиза при токсическом поражении печени. По его уровню можно судить о тяжести патологического процесса [9].

После применения инсектоакарицида происходили недостоверные колебания коэффициентов де Ритиса и Шмидта, R-индекса.

Увеличение коэффициента де Ритиса свидетельствует о хронических процессах, связанных с поражением паренхимы печени вследствие интоксикации организма [27].

Повышение активности ферментов переаминирования свидетельствует о повреждении и гибели клеток печени, и прямо связано с токсическими эффектами.

Метаболизм в органах и тканях осуществляется в основном за счет регуляции активности внутриклеточных ферментов, и печень не является исключением. Активность ферментов может нарушаться как в результате физиологических изменений, так и токсического воздействия ксенобиотиков, способствующих повышению проницаемости мембран клеток. Ферменты печени могут располагаться в мембране, цитоплазме     или     митохондриях гепатоцитов. Изменения активности ферментов, расположенных в мембране или цитоплазме      гепатоцитов      (ЛДГ, аминотрансферазы и щелочная фосфатаза), чаще характерны для острого процесса, поражение митохондриальных ферментов (глутаматдегидрогеназа, митохондриальная АСТ) – для глубокого поражения печени с развитием некроза. Специфических маркеров для диагностики заболеваний печени не существует. Для диагностики поражения ткани печени токсической этиологии важно определение изменений    активности    различных ферментов и их соотношения [4].

Международная      организация

CIOMS предложила классифицировать типы лекарственного поражения печени на основании изменений активности АЛТ, ЩФ и R-индекса [6].

Повышение активности АЛТ и АСТ в 1,5-5 раз, по сравнению с верхней границы нормы, соответствует «умеренной гиперферментемии», в 6-10 раз – «гиперферментемии средней степени» и более чем в 10 раз «высокой гиперферментемии».        Повышение активности АЛТ и АСТ свидетельствует о выраженности синдрома цитолиза, но прямо не указывает на глубину нарушения функции печени [2].

В настоящее время разработана классификация типов фармакологического поражения печени:    гепатоцитарное, холестатическое и смешанное [4]. Гепатоцитарный тип поражения печени характеризуется повышением активности АЛТ более чем в 2 раза относительно верхней границы нормы или соотношением АЛТ/ЩФ ≥5. Холестатический тип поражения печени характеризуется повышением активности щелочной фосфатазы более чем в 2 раза относительно верхней границы нормы или отношением АЛТ/ЩФ ≤2. Смешанный тип поражения печени характеризуется повышением активности АЛТ и ЩФ более чем в 2 раза относительно верхней границы нормы или соотношения АЛТ/ЩФ от 2 до 5 раз. Для острого течения поражения печени лекарствами характерен гепатоцитарный тип. Гепатоцитарное поражение, как правило,     чаще     других     видов

(холестатического    и    смешанного)

характеризуется тяжелым течением [4].

Результаты          исследования свидетельствуют о том, что Креолин-Х при рекомендуемом способе применения не приводит к развитию патологических реакций, а также не оказывает токсического действия на печень и на организм телят, о чем свидетельствуют динамика изменений биохимических показателей подопытных телят.     Динамика     биохимических показателей свидетельствует об активном участии печени в метаболизме Креолина-Х, а      препарат      не      оказывает гепатотоксического действия.

Заключение. Креолин-Х при однократном накожном нанесении  не оказывает отрицательного влияния  на состояние и поведение животных,  не влияет на биохимические показатели крови и не оказывает гепатотоксического действия.

Креолин-Х в 0,2 %-ой концентрации не вызывает изменений в биохимических показателях крови телят и не нарушает метаболизм и активность ферментов крови телят. Результаты исследования свидетельствуют о том, что Креолин-Х при рекомендуемом способе применения не приводит к развитию патологических реакций, а также не оказывает токсического действия на печень и на организм телят, о чем свидетельствуют динамика изменений биохимических показателей под опытных телят. Динамика биохимических показателей свидетельствует об активном участии печени в метаболизме Креолина-Х, а акрицидный препарат не оказывает гепатотоксичекого действия.