Сравнительная характеристика методов подготовки мышечных срезов для компрессорной трихинеллоскопии

Oдним из наиболее опасных зоонозов, заражение которым человека происходит через мясо и мясопродукты, является трихинеллез.

Среди диких промысловых животных трихинеллез наиболее широко распространен у медведя и кабана, которые являются ценными продуктами охотничьего промысла. Высокая экстенсивность трихинеллезной инвазии регистрируется у диких плотоядных животных, таких как волк, лисица, енотовидная собака, рысь и др., а также мышевидных грызунов, которые способствуют сохранению этого гельминтоза в природе [1].

В последнее время трихинеллез представляет особый интерес как природноочаговый гельминтозооноз, что связано с возможностью заражения людей этим опасным заболеванием от продуктов убоя диких животных.

Решающим этапом в системе мероприятий, направленных на профилактику трихинеллеза у человека, является своевременное выявление туш животных, зараженных личинками трихинелл. При неправильной или некачественной подготовке проб для проведения исследования снижается процент выявляемости данного гельминтоза в тушах, что в свою очередь влечет за собой риск заболевания трихинеллезом людей.

Особую важность это представляет для охотохозяйств и охотников-любителей, которые, не обладая достаточными навыками и знаниями, зачастую самостоятельно проводят исследования туш добытых ими на охоте животных на трихинеллез.

В связи с этим актуальным является изыскание наиболее доступных и эффективных способов подготовки проб мышечной ткани для компрессорной трихинел-лоскопии с целью повышения результативности диагностических исследований.

Актуальность работы. Одним из методов диагностики трихинеллеза является компрессорная трихинеллоскопия. Однако в замороженном мясе свиньи и диких животных обнаружить трихинелл трудно, так как при его консервировании низкими температурами вода из капсул паразита вымораживается, а после дефростации они заполняются мясным соком. Мясной сок имеет цвет мяса, поэтому трихинеллы становятся незаметными, что снижает эффективность трихинеллоскопии и соответственно повышается риск заражения людей.

Цель работы – выявить наиболее эффективные методы окраски мышечных срезов при диагностике трихинеллеза.

Задачи исследования:

испытать различные методы обработки мышечных срезов для диагностики трихинеллеза;

определить наиболее эффективные способы подготовки мышечных срезов для индикации личинок трихинелл.

Материалы и методы

Компрессорной трихинеллоскопии были подвергнуты мышцы сгибателей-разгибателей задней конечности и мышца языка 12 диких плотоядных животных, в том числе восьми волков и четырех лисиц, полученные из ветеринарных лабораторий Вологодской области с диагнозом «трихинеллез». Работу проводили в течение 2013-2014 года.

Пробы для исследования подготавливали по общепринятой методике. Для этого мороженое мясо оттаивали и делали тонкие срезы толщиной 1-2 мм изогнутыми глазными ножницами по ходу мышечных волокон.

Для выявления наиболее эффективных методов подготовки мышечных срезов для компрессорной трихинеллоскопии мы провели сравнительный анализ окраски и просветления проб, рекомендованных «Методическими правилами по лабораторной диагностике трихинеллеза животных» и предложенных Янченко А.Е., Черниго-вым В.Д., Крыжевич С.М. (Витебский ветеринарный институт, 1987 г.); Прониным В.В., Могутовой М.О., Могутовым А.В. (Ивановская ГСХА, 2003 г.), а также испытали эффективность окрашивания срезов мышц с применением рабочего раствора генцианвиолета, раствора Люголя, 5%-ого спиртового раствора йода, рабочего раствора фуксина. Для этого от каждого исследуемого животного готовили не менее 960 срезов мышц (по 96 срезов для каждого метода окрашивания мышечной ткани). Микроскопию с одновременным фотографированием личинок трихинелл в приготовленных препаратах проводили с помощью микроскопа модели Микмед 6 и проекционного трихинеллоскопа Partner DT-10M.

Результаты и обсуждение

При просветлении срезов мышц раствором глицерина, с последующим нанесением раствора Люголя было определено, что мышечные волокна, капсула, личинки трихинелл окрашиваются в светло-оранжевый цвет. Личинка была плохо видна, соответственно данный способ не рекомендуется применять для выявления личинок трихинелл.

При окраске мышечных срезов 5%-ым спиртовым раствором йода, личинка приобрела черный цвет на фоне равномерно-окрашенных красновато-коричневых мышечных волокон, что акцентирует на ней внимание и облегчает проведение диагностического исследования.

При обработке проб 1%-ым раствором риванола, было установлено, что мышцы приобрели светло-желтый цвет, капсула – оранжевый и личинка хорошо просматривается, что позволяет исключить пропуск слабо инвазированных туш.

При использовании насыщенных растворов метиленового синего и фуксина установлено окрашивание мышечных волокон, капсулы и личинки соответственно в синий и красный цвета. Личинка при этом сильно перекрашивалась и была плохо видна. Поэтому данные методы окраски не рекомендуются для диагностических исследований.

При применении в качестве красителя насыщенного раствора генцианвиоле-та волокна мышц, капсула и сама личинка приобретают темно-малиновый цвет, а грануляционная ткань наружных полюсов капсулы не окрашивается, что облегчает лабораторную диагностику трихинеллеза. Однако, данный метод может быть применен для диагностики трихинеллеза лишь в тех случаях, когда капсула находится на стадии обызвествления.

При окрашивании срезов мышц 1%-ым раствором риванола с последующим просветлением 50%-ым водным раствором глицерина мышечные волокна приобретают серо-оранжевый цвет, капсула хорошо видна, личинка четко просматривается. Данный метод окраски и просветления тканей дает наибольшую контрастность между мышечной тканью и личинкой.

Через 1 минуту после обработки проб 5%-ым раствором молочной кислоты мышцы приобретали сероватый цвет, становились прозрачными, более рыхлыми, капсула трихинелл набухала и хорошо просматривалась, а жидкость в полости капсулы просветлялась. В этом случае личинки трихинелл легко обнаруживаются.

В результате окрашивания срезов мышц 1%-ым водным раствором метиленового синего мышечные волокна приобретают голубой цвет, капсула – синий. При проведении микроскопии в течение первых 20 минут после применения данного красителя личинки не окрашивались и были хорошо видны. В дальнейшем они, также как и капсула, приобретали синий цвет и становились менее заметными. В связи с этим, при использовании данного метода окраски необходимо проводить микроскопию в течение короткого промежутка времени после нанесения красителя.

Заключение

Для повышения эффективности диагностики трихинеллеза нами был испытан ряд способов, включающих просветление и окраску мышечных срезов.

Наиболее информативными из них, по нашему мнению, является окраска 1%ым раствором риванола с последующим просветлением 50%-ым водным раствором глицерина, что дает наибольшую контрастность между мышечной тканью и личинкой.

Максимальное просветление мышечных волокон мяса достигается с помощью 5%-го раствора молочной кислоты.

Высокую диагностическую эффективность имеет также окраска мышечных срезов 5%-ым раствором йода и 1%-ым водным раствором метиленового синего.

Данные методы могут быть использованы для диагностики трихинеллеза в условиях ветеринарных лабораторий и охотхозяйств.