Сравнительная характеристика микробиологических показателей качества рыбы, зараженной диплостомозом

Одной из основных целей для рыбоводческой отрасли остается получение качественной продукции безопасной как для человека, так и для животных. Значительное увеличение выпускаемой и перерабатываемой рыбы, в течение последних 4-5 лет, повлекло за собой подъем числа случаев возникновения отравлений у людей, различной этиологии, в том числе бактериальной. В этой связи было принято решение осуществлять более тщательный контроль ветеринарной службой за реализуемой рыбой и рыбной продукцией в различных подразделениях и точках сбыта [2].

Так на территории Российской Федерации предусмотрен обязательный микробиологический контроль безопасности рыбной продукции, включающий выделение и подсчет условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. В соответствии с нормативной документацией, каждый вид бактерий подлежит культивированию на питательных средах, с последующим их подсчетом в микробиологическом счетчике [1].

Кроме того, анализ проб рыбы и рыбной продукции, помимо выше описанных методов, включает комплекс органолептических, физико-химических, паразитологических исследований, на основании которых продукцию относят к разряду доброкачественной или недоброкачественной [6].

Так, стандарт на живую рыбу по паразитологическим критериям, предусматривает обязательный контроль на наличие в продукции гельминтозов опасных для человека, при этом в большинстве случаев учету не подлежат заболевания, не оказывающие прямого воздействия на организм, но способные снизить качество получаемой продукции в целом [8, 9]. Среди таких заболеваний выделяют диплостомоз, постдиплостомоз, тетракатилез, сангвиниколез и др.

С целью предупреждения отравлений некачественной рыбой и рыбной продукцией, нами был разработан и запатентован способ оценки качества мяса рыб, зараженных трематодозами на примере диплостомоза, включающий бактериологический посев с пораженного органа с выдержкой периода роста микрофлоры, анализ, морфологию полученных колоний и характер роста, окраска мазков по Грамму и их подсчет.

Для осуществления запатентованного нами метода выделили ряд задач: 1) провести паразитологическое исследование пресноводной рыбы, определить степень инвазированности личинками диплостомоза; 2) подсчитать степень контаминации рыбы микроорганизмами в камере Горяева, провести дифференциальную диагностику микроорганизмов; 3) определить наличие отклонения от нормы.

Материал и методы исследований. В качестве биологического объекта использовали хрусталик глаза, зараженной диплостомозом рыбы, который раздавливали между стерильными стеклами, устанавливали вид возбудителя, подсчитывали количество найденных гельминтов на одну особь и производили забор содержимого пораженного органа Пастеровской пипеткой. После этого производили посев содержимого на питательные среды, в зависимости от характера исследуемой микрофлоры с выдержкой согласно инструкции.

Так для определения показателя КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) использовали мясопептонный бульон с выдержкой 48 часов при 25-37 °С.

Для определения количества БКГП (бактерий группы кишечной палочки) использовали питательную среду Кесслера с выдержкой 24 часа при температуре 37 °С. С последующим пересевом на трехсахарный агар Олькеницкого.

Для определения бактерий рода Salmonella, Listeria, Clostridium, Staphylococcus использовали селективно диагностические питательные среды: Эндо,

ПАЛКАМ, ЖСА, Вильсона-Блера с выдержкой 24 часа при температурном режиме 37°С [7].

Морфология полученных колоний и характер роста были проанализированы методом окрашивания мазков по Грамму или Романовскому-Гимза, далее подсчетом в камере Горяева, с заранее приготовленной суспензией в заданном разведении. При получении удовлетворительного результата по условно-патогенной и нулевых показателях по патогенной микрофлоре, мясо рыбы было либо отнесено к разряду доброкачественной и выпущено в свободную реализацию, либо перерабатывалось или утилизировалось [6].

Результат исследований.

Исследования проведены в условиях ветеринарной лаборатории. Паразитологическому и миробиологическому контролю подвергли 120 особей рыб различной видовой принадлежности. Результат представлен в таблице 1.

Таблица 1 – Степень инвазированности метацеркариями Diplostomidae промысловых рыб Волго-Донского бассейна

Таблица 2 – Сравнительный анализ микрофлоры зараженной и здоровой рыбы

Примечание: ** – P ≤ 0,001; * – P ≤ 0,01

При исследовании хрусталика глаза определили следующее: вся зараженная рыба была инвазирована диплостомозом в разной степени. При подсчете личинок каждую обследуемую особь выделили в три интервальных ряда от большего показателя к наименьшему (это приняли за показатель степень инвазированности рыбы).

Так, наименьшая степень инвазированности характерна для особей Cyprinuscarpio (Карп), Abramisbrama (Лещ) и составила 25 %, 25,4 % соответственно. Среднее число инвазированности 67,1 % было установлено у Ctenopharyngodonidella (Белый амур). Наивысшее число личинок и высшая степень инвазированности была определена у рыб вида Hypophthalmichthysmolitrix (Толстолобик) и составила 80,7% (Таблица 2).

По результатам, полученным при исследовании микрофлоры рыбы запатентованным нами способом, отметили следующее: микробиологический фон исследуемых особей был представлен бактериями рода Clostridium, Staphylococcus, Listeria. Уровень бактериологического обсеменения с места поражения возбудителем, внутренних органонов и мышечной ткани не значительно разнился.

Заключение. При проведении бактериологического исследования рыбы запатентованным нами способом, вошедшим в комплекс микробиологических исследований, выявленный уровень контаминации бактериями группы кишечной палочки инвазированной диплостомозом рыбы, был достоверно выше в 2,2-4,05 раза (толстолобик); показатель КМАФАнМ, в исследуемом материале зараженных рыб, был достоверно выше в 0,1-5,2 раза, в зависимости от степени инвазированности. При этом у толстолобика и карпа были выявлены бактерии родов Listeria, Staphylococcus, присутствие которых в продукции - не допускают.

Резюме

В статье представлено исследование микробиологических показателей зараженной трематодозами рыбы (на примере заболевания диплостомоз), изучены и описаны паразитарные болезни, не оказывающие прямого воздействия на организм человека, но оказывающие косвенное влияние на продукцию в целом. При этом рыба была подвержена паразитологическому исследованию, с целью установления заболевания диплостомоз, осуществлен бактериологический посев методом разрушения хрусталика глаза с последующей культивацией на питательные среды. Далее, был осуществлен двукратный подсчет микробиологического фона рыбы, как в мазке, так и в камере Гареева, результат обработан биометрическими методами, определен критерий Стьюдента. Так, нами были получены численные показатели: КМАФАнМ, БКГП, Salmonella, Listeria, Clostridium, Staphylococcus и др. После этого микробное число инвазированной рыбы сравнили с микробным числом клинически здоровой рыбы.